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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：张龙刘建波黄立平危艳武郭龙军吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

为了表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含tTTV1全长基因组的重组质粒(pMD18-TTVl-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增了PTTV10RF1 (1501～2475)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa),引物两端设计了Sal Ⅰ和Not Ⅰ酶切位... 详细信息

为了表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含tTTV1全长基因组的重组质粒(pMD18-TTVl-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增了PTTV10RF1 (1501～2475)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa),引物两端设计了Sal Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点,将PCR产物克隆到pGEX-6P-1载体,构建了重组质粒(pGEX-TTVl-ORFl-C1).经序列验证的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株进行诱导表达,获得了融合GST的PTTVl-rCap重组蛋白,经SDS-PAGE电泳分析及Westem blot鉴定,目的蛋白获得了高效表达,分子量约64.0kDa,以包涵体形式存在.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得了8株稳定分泌抗PTTVl-rCap蛋白的杂交瘤细胞株,依次命名为1H4、1E9、1E11、4G12、5C5、7B8、8C2、8G2,单抗亚类鉴定均为IgG1,轻链为K型;单抗培养上清效价为400～3200倍,腹水为4.0×105～6.4×106;其中有7株单抗与PTTVl-rCap蛋白产生特异性反应,另1株单抗(1E11)呈阴性,可能针对构象表位.本研究表达的PTTVl-rCap蛋白和制备的单抗,为进一步建立检测该病毒的诊断方法及抗原表位分析奠定了基础.

关键词：猪输血传播病毒1型(PTTV1) 重组Cap蛋白表达单抗制备

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猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆与拯救病毒的体外生物学特性

猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆与拯救病毒的体外生物学...

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c三个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明.采用感染性克隆技术构建了... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c三个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明.采用感染性克隆技术构建了不同基因型代表性毒株，对拯救的毒株进行体外生物学特性试验.本研究构建了4个不同基因型的PCV2感染性分子克隆，经转化细胞后拯救4个克隆毒株，经核酸序列分析、病毒形态学观察、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)等证实属于不同基因型的PCV2毒株;拯救的毒株均通过细胞连续传10代，病毒增殖能力稳定，毒价均可达到105.0TCID50/ml;用具有中和病毒活性的单克隆抗体(1D2株)进行抗原捕获ELISA检测，拯救的PCV2a/rCL毒株与该单抗产生特异性反应，另3个克隆毒株(PCV2b/rYJ、rJF和PCV2d/rBDH)与该单抗均无反应，表明它们属于不同基因型代表毒株.这表明我国猪群中PCV2流行毒株存在不同基因型，其病毒抗原特性各异，构建和拯救了4个代表不同基因型PCV2克隆毒株，为进一步研究其致病性差异奠定了基础.

关键词： PCV2 不同基因型感染性克隆病毒拯救生物学特性

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猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定

猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：郭龙军陆月华黄立平危艳武刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨 150001

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原，其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白，起保护性抗原作用，对其进行抗原表位鉴定十分必要。本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免疫原制备5株单... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原，其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白，起保护性抗原作用，对其进行抗原表位鉴定十分必要。本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免疫原制备5株单克隆抗体，通过原核表达系统对ORF2基因进行了截短表达，先行对Cap蛋白抗原表位进行宽幅定位，然后利用合成多肽对Cap抗原表位做精确扫描定位。5株单抗中有4株针对同一抗原表位，坐落在Cap蛋白N末端核定位信号区，经多肽扫描证实，核心序列为26RPWLVHPRHRY36：另1株单抗(1D2)仅与重组Cap蛋白产生免疫活性反应，对4个分段截短表达的Cap蛋白无免疫活性反应，鉴于该单抗具有中和病毒活性，针对的可能是构象表位。本研究首次鉴定出位于Cap蛋白核定位信号区的一个抗原表位，为以后Cap蛋白功能及核定位机理的研究奠定基础。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白抗原表位多肽扫描核定位信号

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基于反向遗传操作的传染性法氏囊病新型重组疫苗研究

基于反向遗传操作的传染性法氏囊病新型重组疫苗研究

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：祁小乐高立王永强高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病.超强毒(vvIBDV)的感染造成50％以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展.IBD疫苗目前存在问题:... 详细信息

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病.超强毒(vvIBDV)的感染造成50％以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展.IBD疫苗目前存在问题:技术瓶颈是疫苗株需要通过人工盲传驯化获得,费事费力;使用误区是中等或中等偏强毒力毒株被用作疫苗,存在生物安全隐患.目的:优化基于反向遗传操作的IBD疫苗研究新型技术平台,研制高效低毒的IBD新型重组疫苗.方法:建立IBD反向遗传操作技术;研究IBDV毒力和细胞嗜性的分子基础;构建和拯救重组病毒;通过动物实验评估重组疫苗株的有效性和安全性.

关键词：传染性法氏囊病(IBD) 重组疫苗反向遗传

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分子佐剂C3d与HA融合表达增强了猪流感病毒的保护性免疫

分子佐剂C3d与HA融合表达增强了猪流感病毒的保护性免疫

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首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：李国新田志军周艳君于海童光志中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪流感(swine influenza,SI)是由猪流感病毒(SI virus,SIV)引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。目前,包括H1N1、H3N2和H1N2亚型在内的SI已成为危害许多国家猪群的疾病。猪流感的控制不仅有经济上的意义,更有其深远的公共卫生学意

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗分子佐剂 C3d

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SARS冠状病毒S蛋白抗原表位富集区的表达与初步应用

SARS冠状病毒S蛋白抗原表位富集区的表达与初步应用

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨 150001

扩增并克隆了编码SARS-CoV S蛋白中包含多个抗原表位的第539～630氨基酸残基区域的基因片段。基因片段经酶切处理后插入表达载体pGEX-6p-1的Bam HI和XhoI位点之间，构建成融合表达质粒，转化宿主菌BL21经IPTG诱导后融合基因得到了表达... 详细信息

扩增并克隆了编码SARS-CoV S蛋白中包含多个抗原表位的第539～630氨基酸残基区域的基因片段。基因片段经酶切处理后插入表达载体pGEX-6p-1的Bam HI和XhoI位点之间，构建成融合表达质粒，转化宿主菌BL21经IPTG诱导后融合基因得到了表达，表达产物可用谷胱甘肽sepharose 4B RediPack亲和层析柱纯化。用5份SARS患者康复期血清对表达融合蛋白进行ELISA和免疫印迹试验分析融合蛋白的免疫反应性，结果表明重组融合抗原在ELISA和免疫印迹试验中与全部5份SARS患者康复期血清均具有良好的免疫反应性。试验结果提示该SARs-CoV S蛋白第539～630氨基酸残基区域可作为SARS诊断抗原。

关键词：冠状病毒抗原表位免疫反应免疫印迹融合蛋白 SARS病毒

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质粒DNA与rPRV-HA联合免疫增强了小鼠对猪流感病毒攻击的保护效力

质粒DNA与rPRV-HA联合免疫增强了小鼠对猪流感病毒攻击的保护效力

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首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：李国新周艳君于海田志军闫丽萍童光志中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪流感(swine influenza,SI)是由猪流感病毒(SI virus,SIV)引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。目前,包括H1N1、H3N2和H1N2亚型在内的SI已成为危害许多国家猪群的疾病。而且,猪是禽、猪、人流感病毒的易感宿主,可最大限度地被人等

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗 C3d Prime-boost免疫策略

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猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆的构建及拯救病毒的体外生物学特性研究

猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆的构建及拯救病毒的体外...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究黑龙江哈尔滨 150001

环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c 3个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明。采用感染性克隆技术构建了不...

环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重，流行毒株基因不断发生变异，根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c 3个基因型，还有PCV2d基因型新报道，这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明。采用感染性克隆技术构建了不同基因型代表性毒株，对拯救的毒株进行体外生物学特性试验。本研究构建了4个不同基因型的PCV2感染性分子克隆，经转化细胞后拯救4个克隆毒株，经核酸序列分析、病毒形态学观察、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)等证实属于不同基因型的PCV2毒株;拯救的毒株均通过细胞连续传10代，病毒增殖能力稳定，毒价均可达到105.0 TCID50/mL;用具有中和病毒活性的单克隆抗体(1D2株)进行抗原捕获ELISA检测，拯救的PCV2a/rCL毒株与该单抗产生特异性反应，另3个克隆毒株(PCV2b/rYJ、rYJ和PCV2d/rBDH)与该单抗均无反应，表明它们属于不同基因型代表毒株。这表明我国猪群中PCV2流行毒株存在不同基因型，其病毒抗原特性各异，构建和拯救了4个代表不同基因型PCV2克隆毒株，为进一步研究其致病性差异奠定了基础。

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传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗的安全性试验与最适免疫剂量测定

传染性支气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗的安全性试验与最适免疫...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：石星明王云峰王玫李继松孙妍胡文玮童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室中国农业科学院上海兽医研究所

鸡传染性支气管炎(Infectiousbronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitisvirus,IBV)引起的鸡的一种急性高度接触性传染病。IB以呼吸道症状、产蛋下降和肾脏病变为特征,是继禽

关键词：重组鸡痘病毒免疫剂量安全性试验传染性支气管炎

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禽网状内皮组织增生病流行现状及防控

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中国家禽 2015年第1期37卷 1-4页

作者：邓小芸祁小乐李凯胡峰高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生物制品的污染已经不是该病传播的主要原因,REV已经从早期的种源性病毒演变成了在自然界广泛存在的病原。通过疫苗免疫将该病控制到尽可能低的水平,进而进行REV的种群净化,是防控该病的科学策略。

关键词：禽网状内皮组织增生病流行免疫抑制混合感染亚单位疫苗

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