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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：郝晓芳周艳君田志军韦天超安同庆彭金美华荣虹童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

2006年5月以来,我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以... 详细信息

2006年5月以来,我国部分猪场爆发一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定PRRSV的nsp2基因序列,在紧靠上述nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RP-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,通过RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。

关键词：高致病性传染病猪繁殖与呼吸综合征病毒病原分离基因缺失 RT-PCR检测鉴别诊断

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我国传染性法氏囊病病毒新型变异株分析研究

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中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1164-1169页

作者：范林进王雨龙吴甜甜李凯姜楠高玉龙高立刘长军崔红玉潘青张艳萍刘玉凤孙先本刘俊启王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150069 法国诗华动物保健公司北京100102 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7... 详细信息

近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7个省的32个IBDV代表株的VP2基因高变区进行了遗传演化分析,结果显示,IBDV新型变异株虽然属于变异株分支,但却不同于美国早期变异株,其形成了一个独立的亚群。动物回归试验结果显示,IBDV新型变异株不致死鸡,但造成其中枢免疫器官法氏囊严重萎缩,B淋巴细胞崩解坏死,复制出了非典型IBD的症状。本研究测定了IBDV新型变异株的最低致病剂量,并依据病毒自身特殊性状,首次提出用法氏囊半数萎缩量(BAD50)作为IBDV新型变异株的病毒效价单位。本研究为IBDV新型变异株的流行规律监测和综合防控提供了数据支撑。

关键词：非典型传染性法氏囊病传染性法氏囊病病毒新型变异株法氏囊半数萎缩量

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基因修饰的鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力评价

基因修饰的鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力...

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中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：贺笋王云峰木古丽石星明王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐 830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001

DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系，为了提高目的基因的表达量，增强其免疫效果，本研究对NDV F48E9株的HN基因进行了修饰，将NDV F48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子，同时在HN基因的5’端... 详细信息

DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系，为了提高目的基因的表达量，增强其免疫效果，本研究对NDV F48E9株的HN基因进行了修饰，将NDV F48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子，同时在HN基因的5’端加上同样已替换密码子的禽流感病毒HA蛋白信号肽序列。修饰后HN基因命名为SoptiHN，剔除信号肽的HN基因命名为optiHN。将SoptiHN、optiHN和F48E9株的HN基因分别克隆到真核表达载体pVAX1和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列CpG-ODN的载体pVAX1-CpG中，将他们分别命名为pV-SopliHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN和pV-HN、pVC-HN，用这些质粒转染293T细胞，48h后间接免疫荧光和West-blotting检测细胞中瞬时表达的HN蛋白。结果显示，与未经修饰的HN基因相比，修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高，并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量。将质粒pVAx1、pvAx1-CpG、pV-HN、pVC-HN、pV-Sop-tiHN和pVC-SoptiHN采用四头肌多点注射三周龄SPF鸡，每只鸡200μg，PBS设为空对照组;一免后三周以相同的剂量加强免疫，二免后以103 EID50 NDV的F48E9强毒株进行攻毒，计算发病率、死亡率、以及排毒情况。免疫前后，及攻毒前后每周采集血清和外周血淋巴计算Ⅷ抗体和细胞因子IFN-γ和IL-18动态变化情况。分析结果表明，相比NDV F48E9马株的HN基因而言，修饰后的HN基因可以诱导更加强烈的免疫反应，产生更好的保护效率。

关键词：鸡新城疫病毒 DNA疫苗密码子优化信号肽免疫印迹

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猪输血传播病毒2型(PTTV2)Cap蛋白在杆状病毒中的表达及活性测定

猪输血传播病毒2型(PTTV2)Cap蛋白在杆状病毒中的表达及活性测定

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室哈尔滨150001

PTTV1和PTTV2基因组结构相似,有3个大的开放阅读框(Open reading frames,ORFs)(ORF1、ORF2和ORF3),其中ORF1被认为是编码病毒壳体蛋白(Cap)的基因,ORF2编码可能病毒复制酶相关蛋白(Rep),ORF3编码蛋白与细胞凋亡有关.由于Cap蛋白为病毒... 详细信息

PTTV1和PTTV2基因组结构相似,有3个大的开放阅读框(Open reading frames,ORFs)(ORF1、ORF2和ORF3),其中ORF1被认为是编码病毒壳体蛋白(Cap)的基因,ORF2编码可能病毒复制酶相关蛋白(Rep),ORF3编码蛋白与细胞凋亡有关.由于Cap蛋白为病毒主要结构组成蛋白,能够刺激机体产生体液和细胞免疫反应,是建立检测诊断方法的理想靶抗原.为了开展该病毒血清学诊断方法的建立,本研究对PTTV2的ORF1基因进行扩增,并克隆到pBlueBac4.5N5-His TOPO TA载体,分别构建了PTTV2-ORF1全长序列(pBlueBac4.5N5-His-PTTV2-ORF 1-F)和截短的N端ORF1部分序列(pBlueBac4.5N5-His-PTTV2-ORF 1-S)的重组质粒.将上述2种重组质粒与Bac-N-BlueTM DNA共转染昆虫细胞(Sf21),经3次病毒蚀斑克隆,获得了2株重组杆状病毒,分别表达全长和截短的TTV2 Cap(rBlueBac-PTTV2-ORF1-F和rBlueBac-PTTV2-ORF1-S).重组杆状病毒毒种接种昆虫细胞进行重组蛋白表达,优化表达条件,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表明,表达的全长和截短重组蛋白分子质量分别为79kDa和43 kDa.在重组蛋白C末端设计了6 xHis-Tag标签,采用Ni2+亲和层析法进行了蛋白纯化.为该病毒血清抗体检测和疫苗免疫的研究奠定了基础.

关键词：猪输血传播病毒2型重组Cap蛋白杆状病毒表达

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J亚群禽白血病流行病学研究新进展

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中国家禽 2014年第16期36卷 38-40页

作者：邓小芸祁小乐张久丽华育平高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 东北林业大学林学博士后流动站黑龙江哈尔滨150040

J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康... 详细信息

J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康发展。ALV-J与其他免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中普遍存在,使得鸡群免疫力低下,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,使疫病的诊断和防控难度加大。本文从分子流行病学的角度对ALV-J的发生发展进行综述,以期揭示ALV-J致病性增强的分子机制。

关键词： J亚群禽白血病流行病学进展

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猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

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2006年全国博士生学术论坛——林业及生态建设领域相关学科

作者：张立娜刘培欣曹殿军闫丽辉贾竞波危艳武东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室传染病研究室

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板，通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点，酶切后与PCI真核表达载体连接在一起，测序后，经比较，所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99.8％。将重组质粒转染PK细胞，检测所转染的p... 详细信息

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板，通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点，酶切后与PCI真核表达载体连接在一起，测序后，经比较，所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99.8％。将重组质粒转染PK细胞，检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性。试验结果表明，转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异，说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用。

关键词：猪γ干扰素基因真核表达重组质粒转染抗病毒活性测定 PCR方法

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分子佐剂C3d与HA融合表达增强了猪流感病毒的保护性免疫

分子佐剂C3d与HA融合表达增强了猪流感病毒的保护性免疫

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李国新田志军周艳君于海童光志中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232

猪流感(swineinfluenza，SI)是由猪流感病毒(SIvirus，SIV)引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。目前，包括H1N1、H3N2和H1N2亚型在内的SI已成为危害许多国家猪群的疾病。猪流感的控制不仅有经济上的意义，更有其深远的公共卫生学意义... 详细信息

猪流感(swineinfluenza，SI)是由猪流感病毒(SIvirus，SIV)引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。目前，包括H1N1、H3N2和H1N2亚型在内的SI已成为危害许多国家猪群的疾病。猪流感的控制不仅有经济上的意义，更有其深远的公共卫生学意义。DNA疫苗因为能够同时诱导体液免疫应答和细胞免疫应答而受到青睐。但由于DNA疫苗蛋白表达量低，激发的免疫应答较弱，从而限制了它的应用。因此，提高DNA疫苗的免疫效力已成为基因免疫研究的热点。本文探讨了分子佐剂C3d对猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的影响，并评价了表达不同形式的HA的DNA疫苗在小鼠模型中对不同亚型的猪流感病毒攻击的保护效力。

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗分子佐剂 C3d HA融合表达保护性免疫免疫原性

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番鸭呼肠孤病毒p10.8蛋白致细胞凋亡功能

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中国预防兽医学报 2009年第10期31卷 766-769页

作者：张云郭东春耿宏伟王钰魏萍东北农业大学动物医学院博士后流动站黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农科院植物脱毒苗木研究所黑龙江哈尔滨150086

为确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)p10.8蛋白的生物学功能,本研究采用RT-PCR方法扩增DRVS14株p10.8编码基因,将其克隆到真核表达载体中,构建了重组表达质粒pcDNA-p10.8;通过转染鸭胚成纤维细胞(DEF),首次对p10.8蛋白的凋亡功能进行了研究。细... 详细信息

为确定番鸭呼肠孤病毒(DRV)p10.8蛋白的生物学功能,本研究采用RT-PCR方法扩增DRVS14株p10.8编码基因,将其克隆到真核表达载体中,构建了重组表达质粒pcDNA-p10.8;通过转染鸭胚成纤维细胞(DEF),首次对p10.8蛋白的凋亡功能进行了研究。细胞转染48h后,Hoechest、DNALadder和TUNEL法的细胞凋亡检测结果显示:光镜下可见细胞形态学上出现的细胞皱缩,Hoechest染色后可见细胞核固缩,染色质凝固成团块状;DNALadder法可检测到凋亡细胞DNA样品呈梯形条带;TUNEL法可观察到褐色调亡细胞的存在。以上结果均表明,p10.8在DEF中的表达具有诱导宿主细胞凋亡的作用,是番DRV的凋亡蛋白。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 p10.8蛋白凋亡细胞鸭胚原代成纤维细胞

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质粒DNA与rPRV-HA联合免疫增强了小鼠对猪流感病毒攻击的保护效力

质粒DNA与rPRV-HA联合免疫增强了小鼠对猪流感病毒攻击的保护效力

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李国新周艳君于海田志军闫丽萍童光志中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

本研究应用表达HA的DNA疫苗和重组病毒免疫小鼠，探讨了不同类型疫苗的联合免疫对猪流感病毒攻击的保护效力。

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗 rPRV-HA C3d Prime-boost免疫策略联合免疫效力

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鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建

鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建

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中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：崔红玉王云峰石星明童光志兰德松何来仇华吉刘长军王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001 河北北方学院动物科技学院动物医学系张家口 075131 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001

本研究通过构建表达Eco-gpt(Xanthine-guaninephosphoribosyl transferase，XGPRT，gpt)的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1.3kb)和带有细菌人工染色体(BacterialArtificial Chromosome，BAC)基本功能基因序列的鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11，将重组病毒转移栽体与鸡马立克氏病病毒细胞总DNA共转染鸡胚成纤维细胞，在选择培养基中经过加压筛选，获得并纯化重组病毒;将重组病毒细胞总DNA电转化大肠杆菌，筛选共获得38个BAC分子克隆化病毒，提取BAC-DNA转染鸡胚成纤维细胞以拯救重组病毒。结果，再次启动病毒感染，拯救了重组鸡马立克氏病病毒。本研究成功构建了鸡马立克氏病病毒814株基因组全长感染性细菌人工染色体，为病毒的反向遗传操作提供技术平台。

关键词：鸡马立克氏病病毒细茵人工染色体分子克隆化病毒病毒感染分子克隆

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