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文献类型

457 篇 期刊文献
289 篇 会议

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746 篇 电子文献
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学科分类号

706 篇 农学
- 662 篇 兽医学
- 58 篇 作物学
- 19 篇 畜牧学
- 1 篇 林学
61 篇 工学
- 54 篇 生物工程
- 7 篇 化学工程与技术
- 1 篇 林业工程
59 篇 理学
- 59 篇 生物学
16 篇 医学
- 7 篇 基础医学(可授医学...
- 6 篇 公共卫生与预防医...
- 4 篇 临床医学
- 4 篇 药学(可授医学、理...
- 2 篇 医学技术（可授医学...
1 篇 法学
- 1 篇 政治学

主题

76 篇 猪圆环病毒2型
54 篇 单克隆抗体
39 篇 猪繁殖与呼吸综合...
37 篇 猪瘟病毒
36 篇 原核表达
33 篇 序列分析
28 篇 猪流行性腹泻病毒
27 篇 抗原表位
26 篇 抗菌活性
25 篇 重组蛋白
22 篇 新城疫病毒
22 篇 分离鉴定
20 篇 传染性法氏囊病病...
18 篇 猪细小病毒
18 篇 遗传变异
18 篇 鉴定
17 篇 猪圆环病毒
14 篇 生物学特性
14 篇 抗体检测试剂盒
13 篇 酵母双杂交

机构

180 篇 中国农业科学院哈...
150 篇 东北农业大学
112 篇 中国农业科学院哈...
106 篇 中国农业科学院哈...
99 篇 中国农业科学院哈...
96 篇 中国农业科学院哈...
38 篇 中国农业科学院哈...
28 篇 中国农业科学院哈...
24 篇 黑龙江八一农垦大...
24 篇 中国农业科学院上...
19 篇 东北林业大学
18 篇 新疆农业大学
13 篇 中国农业科学院哈...
11 篇 中国农业科学院
10 篇 哈尔滨师范大学
10 篇 内蒙古农业大学
8 篇 华南农业大学
8 篇 河北北方学院
8 篇 中国农业科学院哈...
7 篇 延边大学

作者

163 篇 刘长明
140 篇 危艳武
111 篇 王笑梅
108 篇 高玉龙
106 篇 黄立平
94 篇 高宏雷
86 篇 刘胜旺
85 篇 祁小乐
78 篇 童光志
73 篇 吴洪丽
68 篇 郭龙军
64 篇 冯力
61 篇 陈建飞
58 篇 秦立廷
58 篇 韩宗玺
58 篇 王云峰
58 篇 仇华吉
57 篇 时洪艳
52 篇 崔尚金
51 篇 石星明

语言

746 篇 中文

检索条件"机构=中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物传染病研究室"

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猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救

猪圆环病毒1型感染性克隆的构建与病毒拯救

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘长明危艳武陆月华张朝霞袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

用PCR法扩增猪圆环病毒1型(PCV1)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命名为recPCV1/G株。通... 详细信息

用PCR法扩增猪圆环病毒1型(PCV1)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pUC19质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ酶切位点作为分子靶标,拯救出带有分子标记的克隆病毒,命名为recPCV1/G株。通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)在病毒感染细胞中检出病毒抗原,其抗原性仅与PCV1/Cap蛋白单价特异性抗体发生反应,而与抗PCV2/Cap蛋白抗体无交叉。克隆毒株基因组内插入一个SalⅠ酶切位点,可用PCR结合限制性片断长度多态性分析法(PCR-RFLP)与亲本病毒相鉴别。该毒株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,病毒滴度达104.8TCID50/mL。构建的PCV1感染性克隆,为今后开展该病毒的起源与演化、遗传变异规律、分子鉴别诊断等研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒1型感染性克隆病毒拯救

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猪细小病毒LXB-PPV-20-06株NS1基因的原核表达及免疫活性的鉴定

猪细小病毒LXB-PPV-20-06株NS1基因的原核表达及免疫活性的鉴定

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：戚亭崔尚金张超范中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

利用PCR技术扩增PPV LXB-PPV020-06株NS1基因全序列,将目的基因与原核表达载体pET=32a(+)进行连接并转化,重组质粒经PCR和双酶切鉴定并测序。测序结果表明,目的基因正确地插入到重组质粒当中。通过对表达宿主菌的选择,PPVLXB-PPV-20-06... 详细信息

利用PCR技术扩增PPV LXB-PPV020-06株NS1基因全序列,将目的基因与原核表达载体pET=32a(+)进行连接并转化,重组质粒经PCR和双酶切鉴定并测序。测序结果表明,目的基因正确地插入到重组质粒当中。通过对表达宿主菌的选择,PPVLXB-PPV-20-06株NS1基因在Rosetta(DE)plysS菌中的到良好的表达,并确定了NS1基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导时间为3.5h、诱导温度为37℃。表达产物经SDS-PAGE分析,得到分子量约为97kDa的重组蛋白,除了包涵体形式表达外,一部分重组蛋白以可溶性形式表达。重组蛋白经Western blot检测,可与PPV阳性血清反应。这为NS1蛋白在临床诊断中的应用打下基础。

关键词：猪细小病毒LXB-PPV-20-06株 NS1基因原核表达鉴定

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猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育与鉴定

猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘长明张超范危艳武谭斌陆月华谷守林中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床表现为断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,用猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代,培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞传25代后毒价显... 详细信息

从临床表现为断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,用猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代,培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞传25代后毒价显著提升,第35代毒价可达105.6TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验(IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明:病毒感染细胞后抗原主要分布在细胞核及细胞质中;病毒感染的阳性细胞呈点式分布,阳性细胞数可达50%以上;免疫电镜观察到病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团,单粒子直径约为17nm;病毒基因组由1768核苷酸构成,与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96.2%以上。用剂量为2mL的病毒细胞培养物,接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头,可引起典型的PMWS临床症状。该研究结果为开展PCV2的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型毒株培育分离鉴定

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猪细小病毒LXB-PPV-20-06株NS1基因的原核表达及免疫活性的鉴定

猪细小病毒LXB-PPV-20-06株NS1基因的原核表达及免疫活性的鉴定

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：戚亭崔尚金张超范中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

利用PCR技术扩增PPVLXB-PPV-20-06株NS1基因全序列,将目的基因与原核表达载体pET-32a(+)进行连接并转化,重组质粒经PCR和双酶切鉴定并测序。测序结果表明,目的基因正确地插入到重组质粒当中。通过对表达宿主菌的选择,PPV LXB-PPV-20-06... 详细信息

利用PCR技术扩增PPVLXB-PPV-20-06株NS1基因全序列,将目的基因与原核表达载体pET-32a(+)进行连接并转化,重组质粒经PCR和双酶切鉴定并测序。测序结果表明,目的基因正确地插入到重组质粒当中。通过对表达宿主菌的选择,PPV LXB-PPV-20-06株NS1基因在Rosetta(DE)plysS菌中的到良好的表达,并确定了NS1基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导时间为3.5h、诱导温度为37℃。表达产物经SDS-PAGE分析,得到分子量约为97ku的重组蛋白,除了包涵体形式表达外,一部分重组蛋白以可溶性形式表达。重组蛋白经Western blot检测,可与PPV阳性血清反应。这为NS1蛋白在临床诊断中的应用打下基础。

关键词：猪细小病毒LXB-PPV-20-06株 NS1基因原核表达鉴定

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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析

表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙元祁巧芬梁冰冰成丹李娜于墨洋王宇飞刘霓虹朱庆虎仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

本研究旨在构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗。通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2,测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blot检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用兔化弱毒... 详细信息

本研究旨在构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗。通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2,测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blot检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用兔化弱毒疫苗进行攻击,攻毒后3d取其脾脏,用荧光定量RT-PCR检测兔化弱毒RNA。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010TCID50/mL;外源基因可在其中得到稳定表达;rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体,免疫后5周抗体达到峰值,攻毒后rAdV-E2免疫兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到猪瘟兔化弱毒RNA,而野生型腺病毒免疫家兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测出大量病毒RNA,其含量达到了103拷贝/μL以上。这表明rAdV-E2可望发展成为猪瘟疫苗的候选疫苗。

关键词：猪瘟病毒 E2基因重组腺病毒免疫原性家兔

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猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：张朝霞刘长明危艳武袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测.昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%... 详细信息

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测.昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%(143/150),特异性为91.2%(31/34),敏感性为96.5% (112/116);与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5周抗体阳转,第8～9周抗体水平达到高峰;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%。研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型重组蛋白间接ELISA 抗体检测试剂盒

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猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,血清稀释倍数≥1:100可消除两种病毒间存在的低水平交叉反应。该方法与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA检测符合率为88.9%,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、辽宁等地猪场送检的257份血清样品进行检测,PCV1和PCV2血清抗体阳性检出率分别为19.1%、80.5%。PCV1抗体阳性猪中有95.9%为PCV2阳性,表明我国猪群已存在PCV1感染,在临床上PCV1与PCV2多以混合感染形式存在。本研究建立的PCV1-IPMA方法具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV1流行病学调查及血清抗体检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒1型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测

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猪圆环病毒2型灭活疫苗的研制

猪圆环病毒2型灭活疫苗的研制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：刘长明危艳武中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪圆环病毒2型（PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的重要病原,以进行性消瘦、咳嗽、呼吸困难、腹泻、皮肤苍白、淋巴结肿大、肾脏灰白水肿为主要特征,给养猪业造成了巨大的经济损失。此外,猪皮炎与肾炎综合征（PNDS）、猪... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的重要病原,以进行性消瘦、咳嗽、呼吸困难、腹泻、皮肤苍白、淋巴结肿大、肾脏灰白水肿为主要特征,给养猪业造成了巨大的经济损失。此外,猪皮炎与肾炎综合征（PNDS）、猪繁殖障碍（PRF）、猪呼吸道疾病复合征（PRDC）、猪的间质性肺炎及先天性震颤（CT）等疾病也与PCV2感染相关,现统称为猪圆环病毒病（PCVD）。在PCV2疫苗研制过程中,遇到的主要问题有:该病毒体外繁殖能力差,培养物病毒含量低;病毒接种细胞不产生病变,病毒含量不易测定;病毒感染动物临床反应不一,免疫效力评价困难。本研究采用临床分离的PCV2毒株,通过细胞培养传代,获得细胞培养适应毒株,病毒繁殖能力也随病毒传代毒价显著提高,实验室制备了5批次病毒液滴度达10TCID50/ml,具备了疫苗种毒的条件。按现行《中国兽药典》标准对疫苗毒种进行了细菌、霉菌、支原体及其他外源病毒检验均符合规定要求。PCV2培养液经甲醛灭活后,用5种佐剂乳化制备灭活疫苗,经动物免疫试验比较确定了疫苗制造规程。用实验室制备的5批次疫苗对本动物进行了单剂量、单剂量重复和大剂量安全性试验,证明疫苗安全性良好,无毒副作用。用本动物进行的攻毒试验结果表明,该疫苗免疫保护率达96%。该疫苗主要用于预防PCV2感染引起的断奶仔猪多系统衰竭综合征,适用于3周龄以上猪只使用。免疫程序为仔猪断奶前1周进行首次免疫,间隔3周加强免疫1次,剂量均1ml/头;成猪每半年免疫1次,剂量为2ml/头;母猪配种前免疫1次,产前20日加强免疫1次,剂量均为2ml/头。该疫苗于2-8℃下保存,有效期为12个月,免疫持续期为6个月。目前该疫苗已完成实验室研究,进入临床试验阶段。

关键词：猪圆环病毒灭活疫苗研制

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基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立

基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：赵和平孙元袁远仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

本研究旨在建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。用终浓度分别为3μg/mL、6μg/mL、9μg/mL和12μg/mL的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3d、5d和7d,然后用荧... 详细信息

本研究旨在建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。用终浓度分别为3μg/mL、6μg/mL、9μg/mL和12μg/mL的刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3d、5d和7d,然后用荧光标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记,最后利用流式细胞术分析。结果表明,不同浓度ConA刺激后,猪PBMC增殖能力不同,ConA浓度为6μg/mL时CD4+和CD8+细胞的细胞分裂指数最大,用MTT试验也获得相似结果。对PBMC刺激5d后进行分析相对较好。本研究建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法,该方法可以在单个细胞水平上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平,进而评价细胞免疫水平。

关键词：猪淋巴细胞细胞免疫 CFSE染色淋巴细胞增殖试验

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猪流行性腹泻病毒S蛋白中和表位区单克隆抗体的制备与鉴定

猪流行性腹泻病毒S蛋白中和表位区单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙东波冯力时洪艳陈建飞崔晓辰佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

以纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白中和表位(S1D)重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了6株稳定分泌抗S1D区特异性的单克隆抗体细胞株,分别命名为2C4、3G3、5F8、3G5、6E6和3C... 详细信息

以纯化的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白中和表位(S1D)重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术获得了6株稳定分泌抗S1D区特异性的单克隆抗体细胞株,分别命名为2C4、3G3、5F8、3G5、6E6和3C3。6株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:51200、1:6400、1:12800、1:6400、1:51200和1:25600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为κ链。Western blot试验结果显示,6株单克隆抗体均能特异性地识别天然PEDV中的S蛋白。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白中和表位区单克隆抗体

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