检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：时洪艳冯力陈建飞孙东波吴波平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的VP7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切... 详细信息

参照GenBank中所收录的猪轮状病毒OSU株序列设计了一对特异性引物,RT-PCR扩增出1062bp的VP7全长基因,与参考OSU序列的核苷酸同源性达99.8%,克隆到pMD18-T载体中,获得pMD18-T-VP7阳性质粒。以阳性质粒为模板,利用引入BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的表达引物进行PCR扩增得到含有VP7中和抗原表位区域639bp的基因片段,定向克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经酶切PCR鉴定的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(终浓度为1.0mmol/mL)37℃诱导4h后,SDS-PAGE电泳显示表达了大小约50ku带GST标签的融合蛋白,薄层扫描显示表达蛋白量占菌体总蛋白的33.2%。Western blot分析表明该VP7重组蛋白可与PRV阳性血清特异性反应。

关键词：猪轮状病毒 VP7基因克隆原核表达

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中国部分地区猪Hokovirus与猪圆环病毒2型共感染的流行病学调查

中国部分地区猪Hokovirus与猪圆环病毒2型共感染的流行病学调查

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：李胜斌危艳武刘建波唐青海刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

背景香港学者2008年首次发现了一种新型的猪细小病毒,将其命名为猪Hokovirus (PHoV),该病毒与断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)有关,给世界养猪业造成了巨大的损失.一些实验室已经通过试验证明猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)的共...

背景香港学者2008年首次发现了一种新型的猪细小病毒,将其命名为猪Hokovirus (PHoV),该病毒与断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)有关,给世界养猪业造成了巨大的损失.一些实验室已经通过试验证明猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)的共感染能够引起比PCV2单独感染更为严重的疾病.因此,PHoV与PCV2共感染的致病性引起了关注.方法对2005-2012年期间采集自中国15个省份的共485份病料,按其来源和采集时间进行分组.提取病毒DNA为模板,用聚合酶链式反应(PCR)检测样品中PHoV和PCV2核酸.进一步选择了11株来自不同地区的PHoV毒株,对其NS1基因测序和行遗传变异分析.

关键词：

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猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：金美伶成丹孙元李娜彭伍平夏照和仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室延边大学农学院

用PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出1株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从细胞培养物中扩增得到了JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD1... 详细信息

用PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出1株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从细胞培养物中扩增得到了JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD18-T载体中,经测序和拼接后,获得了JL-1(06)株基因组全序列。序列分析表明,JL-1(06)基因组全长12298bp,含有1个大的开放阅读框架(ORF),编码1个由3898个氨基酸组成的多聚蛋白,其5-UTR和3-UTR分别由373和231bp组成。该分离株与与石门株的核苷酸和氨基酸同源性在99.4%以上,表明JL-1(06)属于1基因型中的1.1基因亚型。

关键词：猪瘟病毒病毒分离基因组序列同源性分析

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适应无血清培养的HEK293细胞的建立

适应无血清培养的HEK293细胞的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：孟其麟孙元李红梅王楠田大勇仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 130001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(29SF)，经检测293SF细胞具有稳定的腺病毒增殖能力与外源蛋白表达能力;平均病变时间为97.00 h，比HEK293细胞缩短12.9％;毒价达到107.48TCIDmL，比HEK293细胞提高4... 详细信息

本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(29SF)，经检测293SF细胞具有稳定的腺病毒增殖能力与外源蛋白表达能力;平均病变时间为97.00 h，比HEK293细胞缩短12.9％;毒价达到107.48TCIDmL，比HEK293细胞提高43.3％;并且随着代数的提高稳定性良好，连续传16代后293sF细胞状态与易感性没有发生变化。此细胞系为腺病毒的无血清生产奠定材料基础。

关键词：腺病毒无血清培养蛋白表达稳定性

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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：陈建飞冯力时洪艳孙东波白兴华佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨维科生物技术开发公司

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777... 详细信息

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和ZhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白基因序列同源性重组蛋白免疫学活性

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猪细小病毒分离株感染初孕母猪的病毒组织分布和病理学观察

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养猪 2009年第3期 65-68页

作者：苗岚飞胡守萍张超范张卓崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏... 详细信息

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结,胎猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和小肠,进行组织病毒载量测定和组织病理学检测。实时定量PCR检测结果显示,攻毒组母猪的心脏、脾脏、肺脏、肾脏和子宫内膜存在病毒复制,子宫内病毒含量最高;胎猪的心脏、脾脏、肺脏中存在病毒复制。对照组脏器中无病毒复制。病理切片结果显示,攻毒组母猪肺脏出现细支气管性肺炎,脾脏出现淋巴细胞减少,心脏、肝脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结未见明显的组织病理学变化;胎猪的脏器未见明显的病理损伤。对照组未发现组织病理学变化。

关键词：猪细小病毒病毒组织分布组织病理学变化

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带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究

带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究

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新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会

作者：彭金美王瑜田志军周艳君陈瑾安同庆童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室华中农业大学中国农业科学院上海兽医研究所

本研究通过基因克隆技术以PRV弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源臂,以及绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,然后将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BA... 详细信息

本研究通过基因克隆技术以PRV弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源臂,以及绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,然后将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII。将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC。通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒BarthaK61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度。重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传。本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础。

关键词：伪狂犬病毒 Bartha K61 strain BAC 重组病毒

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新型动物疫苗的研究现状及进展

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畜禽业 2009年第12期20卷 16-18页

作者：姚贵哲祝超张振梅崔尚金钱爱东吉林农业大学吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

近年来,免疫学、分子生物学、微生物学、生物化学和其它一些基础学科的飞速发展,为动物疫苗的研究指明了新的方向,并且提供了相关的技术条件保证,特别是基因工程学和蛋白质组学以及其它一些新的技术为主体的现代生物技术的发展更是大大... 详细信息

近年来,免疫学、分子生物学、微生物学、生物化学和其它一些基础学科的飞速发展,为动物疫苗的研究指明了新的方向,并且提供了相关的技术条件保证,特别是基因工程学和蛋白质组学以及其它一些新的技术为主体的现代生物技术的发展更是大大促进了新型的疫苗研究的步伐,并使新型疫苗的应用朝着实用化迈了一大步。目前,亚单位疫苗、基因缺失疫苗以及载体疫苗被公众认为是可以考虑作为替代传统疫苗的新型疫苗,该文对这些新型动物疫苗的研究现状和进展进行了综述,以期能够进一步促进大家对其了解,并加快其发展,以便早日应用。

关键词：疫苗学动物疫苗疫苗的研究进展

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鸭β-防御素9单克隆抗体的制备和鉴定

鸭β-防御素9单克隆抗体的制备和鉴定

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低碳经济与高效养殖——第六次全国饲料营养学术研讨会暨动物营养学分会成立三十周年大会

作者：李子瑞邵昱昊韩宗玺刘晓丽刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

禽抗菌肽属β-防御素类,为防御素三大亚类(α、β、θ)之一,在禽的先天性免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前为止,禽β-防御素的研究与检测还仅停留在转录水平上,检测的灵敏度和准确性都不是很高,而且检测手段也相当繁琐。因此,需... 详细信息

禽抗菌肽属β-防御素类,为防御素三大亚类(α、β、θ)之一,在禽的先天性免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前为止,禽β-防御素的研究与检测还仅停留在转录水平上,检测的灵敏度和准确性都不是很高,而且检测手段也相当繁琐。因此,需要寻找一种灵敏度高,准确性好,特异性强的检测方法。单克隆抗体的制备无疑是最好的选择。而关于鸭AvBD9蛋白的单抗制备国内外尚未见到报道。本研究首先<正>禽抗菌肽属β-防御素类,为防御素三大亚类(α、β、θ)之一,在禽的先天性免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前为止,禽β-防御素的研究与检测还仅停留在转录水平上,检测的灵敏度和准确性都不是很高,而且检测手段也相当繁琐。因此,需要寻找一种灵敏度高,准确性好,特异性强的检测方法。单克隆抗体的制备无疑是最好的选择。而关于鸭AvBD9蛋白的单抗制备国内外尚未见到报道。本研究首先

关键词：鸭抗菌肽重组鸭β-防御素9蛋白单克隆抗体

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3个新的鹅β-防御素的分离、鉴定及其抗菌机制的初探

3个新的鹅β-防御素的分离、鉴定及其抗菌机制的初探

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会

作者：张名岳张可心韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

本试验应用RT-PCR方法,从鹅的脾脏、骨髓和法氏囊等组织器官中扩增到3个新的鹅AvBDs基因。将其推导的氨基酸序列与其他β-防御素序列分析比较,结果显示这3个AvBDs基因分别为鹅β-防御素1（AvBD1）、鹅β-防御素3（AvBD3）和鹅β-防御素6... 详细信息

本试验应用RT-PCR方法,从鹅的脾脏、骨髓和法氏囊等组织器官中扩增到3个新的鹅AvBDs基因。将其推导的氨基酸序列与其他β-防御素序列分析比较,结果显示这3个AvBDs基因分别为鹅β-防御素1（AvBD1）、鹅β-防御素3（AvBD3）和鹅β-防御素6（AvBD6）。经核苷酸序列测定分析结果表明,鹅AvBD1cDNA由198个碱基组成,编码65个氨基酸残基;鹅AvBD3 cDNA由182个碱基组成,编码60个氨基酸;鹅AvBD6 cDNA由204个碱基组成,编码67个氨基酸残基。鹅AvBD3和鹅AvBD6与对应的鸡AvBD3和鸡AvBD6基因的同源性为100%,鹅AvBD1与鸵鸟AvBD1基因的同源性最高,为70.7%。将鹅AvBD1、3、6基因分别亚克隆到表达载pGEX-6p-1上,构建3个重组表达质粒pGEX-Goose-AvBD1、3、6将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达,后进行蛋白纯化。SDS-PAGE电泳表明,3种重组蛋白分子量为31～32kDa,3个重组菌的表达产物均以包涵体的形式存在。同时,根据这3个多肽的成熟序列,分别合成3个合成多肽（sAvBD1、3、6）。选用4株革兰氏阳性菌（四联球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌）和8株革兰氏阴性菌（奇异变形杆菌、绿脓杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、兔波氏杆菌）做为检测菌,利用菌落计数法测定抗菌活性,结果显示标签蛋白GST对各种细菌没有抑制作用;重组和合成蛋白对所测的12株细菌均具有不同程度的抑菌活性。本试验还以多杀性巴氏杆菌（G）和金黄色葡萄球菌（G）作为试验菌,测定不同盐浓度对重组蛋白以及合成蛋白的影响,结果显示,随着盐浓度的增加,其抗菌活性明显减弱,而在高盐浓度条件下,该重组蛋白仍具有抗菌活性。另外,对该重组、合成鹅AvBD1、3、6蛋白进行了溶血活性的试验,发现鹅AvBDs溶血活性极低,与阴性对照相比,无显著差异（P>0.05）。为探讨这3个鹅AvBDs的抗感染机制,本试验采用肠炎沙门氏菌人工感染15日龄东北籽鹅,分别于感染后6h、24h、48h、72h采取鹅部分组织样品,主要是免疫组织和肠组织,并用荧光定量PCR方法检测这3个基因,部分炎性细胞因子,及其鹅Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）4的表达量。结果表明,受感染后,这3个AvBD基因在不同组织中的表达量变化较大,其中AvBD1基因在骨髓中的表达量显著提高,AvBD3基因在骨髓、脾和大肠中的表达量显著提高,AvBD6基因在免疫组织中的表达量都显著提高。以上结果说明了鹅AvBDs具有可诱导性。同时发现,TLR4,以及鹅白细胞介素（IL）-2,IL-18,γ干扰素（IFN-γ）基因的表达量也相应提高。本研究结果初步表明,受肠炎沙门氏菌感染后,鹅机体可能通过TLR4激活细胞信号转导途径,提供刺激分子,诱导由T细胞分化产生的两种鹅细胞因子（IL-2和IL-18）以及鹅干扰素基因（IFN-γ）和3种鹅AvBDs基因的表达,激活天然免疫反应,协同建立机体获得性免疫防御,共同抵御肠炎沙门氏菌对鹅机体的攻击。

关键词：鹅β-防御素抗菌活性 Toll样受体诱导表达信号转导

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