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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：刘丹王一平吴洪丽危艳武唐青海刘建波李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学动物医学院

1引言猪圆环病毒(Porcine circovirus type,PCV)分为PCV1和PCV2两个血清型,其中PCV1广泛存在于猪群不引起临床疾病,PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。PCV2又分为PCV2a、PCV2b和PCV2c亚型,其基因组全长1766～1768核... 详细信息

1引言猪圆环病毒(Porcine circovirus type,PCV)分为PCV1和PCV2两个血清型,其中PCV1广泛存在于猪群不引起临床疾病,PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。PCV2又分为PCV2a、PCV2b和PCV2c亚型,其基因组全长1766～1768核苷酸(nt),由2个大的反义开放阅读框架(ORF1和ORF2)构成。PCV2-ORF2由702nt编码233个氨基酸(aa),Cap蛋白构成病毒核衣

关键词：亚单位疫苗 Cap Rep/Rep PCV 猪圆环病毒免疫保护性

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多重PCR方法用于检测猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断方法的建立

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养猪 2010年第3期 41-44页

作者：岳丰雄崔尚金冉多良戚亭周盛华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

本文建立了一种能够同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重PCR方法(mPCR)。借助于Oligo6.0引物设计软件,设计了4对引物分别用于扩增PCV2ORF2基因353bp片段、PPVNS-... 详细信息

本文建立了一种能够同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重PCR方法(mPCR)。借助于Oligo6.0引物设计软件,设计了4对引物分别用于扩增PCV2ORF2基因353bp片段、PPVNS-1基因271bp片段、PRRSVMN基因美洲型434bp片段、PRVgB基因194bp片段。通过人为混合以上4种病毒进行特异性及敏感性试验,结果表明,该方法具有很好的特异性和敏感性。对猪瘟病毒、大肠杆菌和双蒸水的PCR扩增结果均为阴性;该mPCR方法对PPV的最低检测量为8.64×10-3μg,PRV的最低检测量为2.36×10-3μg,PRRSV的最低检测量为3.68×10-3μg,PCV2的最低检测量为2.90×10-4μg。该方法的建立对临床上PCV2、PPV、PRV、PRRSV的鉴别诊断以及以上这4种病毒的流行病学调查具有十分重要的意义。

关键词：多重PCR方法猪圆环病毒2型猪细小病毒猪伪狂犬病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒

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猪圆环病毒2型与多病原混合感染的致病性研究进展

猪圆环病毒2型与多病原混合感染的致病性研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：袁婧刘长明魏萍东北农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)于1997年首先被发现,并被确认为是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的重要病原。各国学者相继对PCV2病原学进行深入研究发现,除PMWS外,PCV2感染... 详细信息

关键词：混合感染 PRRSV 猪圆环病毒猪肺炎支原体断奶仔猪多系统衰竭综合征

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表达鸡IFN-γ基因重组鸡痘病毒与鸡传染性法氏囊疫苗联合接种对鸡免疫应答的影响

表达鸡IFN-γ基因重组鸡痘病毒与鸡传染性法氏囊疫苗联合接种对鸡...

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：都兴洋石星明王云峰杨春富王玫童光志尹训南王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究将表达鸡IFN-γ的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与鸡传染性法氏囊病MB43活疫苗联合接种SPF鸡,研究重组鸡IFN-γ对传染性法氏囊疫苗免疫效果的影响.结果,rFPV-IFN-γ(103PFU)和MB43活苗联合免疫组(MB43r+FPV-IFN-γ)以及重组干扰素(rI... 详细信息

本研究将表达鸡IFN-γ的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与鸡传染性法氏囊病MB43活疫苗联合接种SPF鸡,研究重组鸡IFN-γ对传染性法氏囊疫苗免疫效果的影响.结果,rFPV-IFN-γ(103PFU)和MB43活苗联合免疫组(MB43r+FPV-IFN-γ)以及重组干扰素(rIFN-γ,200U)和MB43活苗联合免疫组(MB43+rIFN-γ)在免疫后2周即可检出ELISA抗体,比MB43单独免疫组早1周左右.在受到鸡传染性法氏囊病病毒Gx株攻击之后,MB43+rFPV-IFN-γ免疫鸡和MB43+rIFN-γ免疫鸡的脾脏只有个别淋巴细胞核浓缩、核崩解,少数滤泡萎缩变性坏死;胸腺结构清晰,仅有个别胸腺小体变性坏死,损伤程度轻于MB43单独免疫组和非免疫对照组.疫苗免疫后1周,与非免疫对照相比3个免疫组外周血CD8+T淋巴细胞含量均有显著上升,但CD4+T淋巴细胞含量变化却不明显;IBDV Gx株强毒攻击之后2周,3个疫苗免疫组CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量均显著升高,各组之间CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量无明显差异.结果表明,rFPV-IFN-γ和rIFN-γ可较全面地加强疫苗引起的免疫应答,加快疫苗诱导的体液免疫应答.

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒活疫苗 IFN-γ基因免疫应答联合接种痘病毒

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PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：苗岚飞崔尚金张超范胡守萍陈长木周盛华岳丰雄戚亭谢红玲张垚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室东北农业大学动物医学学院

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只.阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID50=107/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第... 详细信息

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只.阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID50=107/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0、7、14、28、35天进行PCV2接种。阴性对照组和一次性攻毒组分别在接种后7、14、28和42天处死,连续攻毒组在首次接种后42天处死.试验过程中每天观察、记录小鼠生活状态并在处死前进行体重测量。脱颈椎法分批处死小鼠并采集心、肝、脾、肺、肾、胸腺、淋巴、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、舌、脑等组织进行病理切片观察。用PCR方法对机体中PCV2病毒的分布和含量进行分析,用ELISA试剂盒检测血清中的抗PCV2抗体水平。通过试验发现:三组试验小鼠体重均有增加,其中阴性对照组小鼠体重增长比率大于一次性攻毒组和连续攻毒组,而一次性攻毒组又明显高于连续攻毒组。PCR检测结果显示一次性攻毒组和连续攻毒组体内存在病毒复制并有其特定的转归规律,对照组体内无病毒复制。ELISA方法证实一次性攻毒组和连续攻毒组均产生抗PCV2抗体,但连续攻毒组抗体水平要明显高于一次性攻毒组,整个实验过程中对照组未检测到抗PCV2抗体。将采集的病料进行组织切片观察发现一次性攻毒组和连续攻毒组有明显的微观病理损伤,损伤最严重的器官是淋巴结,对照组未发现明显病理损伤。据此,根据攻毒组小鼠体重增长比率的差异、淋巴结内持续的病毒复制、血清PCV2抗体阳性,明显的微观病理损伤得到小鼠已经感染了PCV2的结论,并初步探讨了小鼠感染PCV2的检测标准。本试验成功建立了PCV2感染SPF昆明小鼠的动物模型,为PCV2的致病机理研究、疫苗研究等奠定了理论基础。

关键词： SPF昆明小鼠 PCV2 微观病理损伤动物模型

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不同宿主源NDV毒株对SPF鸡致病性研究

不同宿主源NDV毒株对SPF鸡致病性研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘怀然孙敏华葛鑫刘胜旺刘培欣孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室东北农业大学动物医学院

为阐明不同宿主、不同基因型新城疫病毒(NDV)对鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的Ⅶd基因亚型NDV6株,基因Ⅲ型鸡源和基因Ⅵb型鸽源毒株各1株,以及我国标准强毒F48E9,共9株NDV毒株,在15日龄SPF鸡上进行致病性实验,并采取攻毒... 详细信息

为阐明不同宿主、不同基因型新城疫病毒(NDV)对鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的Ⅶd基因亚型NDV6株,基因Ⅲ型鸡源和基因Ⅵb型鸽源毒株各1株,以及我国标准强毒F48E9,共9株NDV毒株,在15日龄SPF鸡上进行致病性实验,并采取攻毒后不同时间段组织样品,以Real-time PCR检测其中病毒载量。结果表明,基因Ⅶd亚型NDV均为对15日龄SPF鸡高致病性毒株,发病率100%,死亡率90%以上;基因Ⅲ、Ⅵb型为导致SPF鸡发病但不死亡的中等毒力毒株。根据攻毒鸡的病程综合判断,Ⅶd亚型毒株毒力并未高于F48E9株,攻毒后病理变化、组织嗜性及病毒载量与F48E9也没有显著差异,提示这些毒株的流行不是毒力增强的结果。健康野鸟携带高致病性NDV强毒具有重要的生态学意义,警示应该进一步加强对野鸟的流行病学监控及相关研究。

关键词：新城疫病毒基因型致病性病毒载量

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PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID=10～7/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于... 详细信息

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID=10～7/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0、7、14、28、35天进行PCV2接种。阴性对照组和一次性攻毒组分别在接种后7、14、28和42天处死,连续攻毒组在首次接种后42天处死。试验过程中每天观察、记录小鼠生活状态并在处死前进行体重测量。脱颈椎法分批处死小鼠并采集心、肝、脾、肺、肾、胸腺、淋巴、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、舌、脑等组织进行病理切片观察。用PCR方法对机体中PCV2病毒的分布和含量进行分析,用ELISA试剂盒检测血清中的抗PCV2抗体水平。通过试验发现:三组试验小鼠体重均有增加,其中阴性对照组小鼠体重增长比率大于一次性攻毒组和连续攻毒组,而一次性攻毒组又明显高于连续攻毒组。PCR检测结果显示一次性攻毒组和连续攻毒组体内存在病毒复制并有其特定的转归规律,对照组体内无病毒复制。ELISA方法证实一次性攻毒组和连续攻毒组均产生抗PCV2抗体,但连续攻毒组抗体水平要明显高于一次性攻毒组,整个实验过程中对照组未检测到抗PCV2抗体。将采集的病料进行组织切片观察发现一次性攻毒组和连续攻毒组有明显的微观病理损伤,损伤最严重的器官是淋巴结,对照组未发现明显病理损伤。据此,根据攻毒组小鼠体重增长比率的差异、淋巴结内持续的病毒复制、血清PCV2抗体阳性、明显的微观病理损伤得到小鼠已经感染了PCV2的结论,并初步探讨了小鼠感染PCV2的检测标准。本试验成功建立了PCV2感染SPF昆明小鼠的动物模型,为PCV2的致病机理研究、疫苗研究等奠定了理论基础。

关键词： SPF昆明小鼠 PCV2 微观病理损伤动物模型

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PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：苗岚飞崔尚金张超范胡守萍陈长木周盛华岳丰雄戚亭谢红玲张垚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学动物医学学院

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0d分别接种1640培养液1mL和PCV2细胞培养毒1mL(107TCID50/mL),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0... 详细信息

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0d分别接种1640培养液1mL和PCV2细胞培养毒1mL(107TCID50/mL),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0d、7d、14d、28d、35d进行PCV2接种。阴性对照组和一次性攻毒组分别在接种后7d、14d、28d和42d迫杀,连续攻毒组在首次接种后42d迫杀。试验过程中每天观察、记录小鼠生活状态并在迫杀前进行体重测量。脱颈椎法分批处死小鼠并采集心、肝、脾、肺、肾、胸腺、淋巴、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、舌、脑等组织进行病理切片观察。用PCR方法对机体中PCV2病毒的分布和含量进行分析,用ELISA试剂盒检测血清中的抗PCV2抗体水平。通过试验发现:三组试验小鼠体重均有增加,其中阴性对照组小鼠体重增长比率大于一次性攻毒组和连续攻毒组,而一次性攻毒组又明显高于连续攻毒组。PCR检测结果显示一次性攻毒组和连续攻毒组体内存在病毒复制并有其特定的转归规律,对照组体内无病毒复制。ELISA方法证实一次性攻毒组和连续攻毒组均产生抗PCV2抗体,但连续攻毒组抗体水平要明显高于一次性攻毒组,整个实验过程中对照组未检测到抗PCV2抗体。将采集的病料进行组织切片观察发现一次性攻毒组和连续攻毒组有明显的微观病理损伤,损伤最严重的器官是淋巴结,对照组未发现明显病理损伤。据此,根据攻毒组小鼠体重增长比率的差异、淋巴结内持续的病毒复制、血清PCV2抗体阳性、明显的微观病理损伤得到小鼠已经感染了PCV2的结论,并初步探讨了小鼠感染PCV2的检测标准。本试验成功建立了PCV2感染SPF昆明小鼠的动物模型,为PCV2的致病机理研究、疫苗研究等奠定了理论基础。

关键词： SPF昆明小鼠 PCV2 微观病理损伤动物模型

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乙型脑炎病毒E蛋白的分段表达与免疫性分析

乙型脑炎病毒E蛋白的分段表达与免疫性分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：闫丽萍华荣虹亓文宝童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室华南农业大学兽医学院

流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)可导致中枢神经系统损伤,且人畜共患,是世界范围内急性病毒型脑炎流行的最主要形式之一。猪患流行性乙型脑炎的主要表现为怀孕母猪流产、产死胎或弱仔,公猪则患睾丸炎,仔猪呈神经症状,常使养... 详细信息

流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)可导致中枢神经系统损伤,且人畜共患,是世界范围内急性病毒型脑炎流行的最主要形式之一。猪患流行性乙型脑炎的主要表现为怀孕母猪流产、产死胎或弱仔,公猪则患睾丸炎,仔猪呈神经症状,常使养猪业遭受巨大损失。目前尚无简便快速的诊断方法和特效的治疗药物。E蛋白是主要的毒粒抗原,参与病毒复制的许多重要过程,包括受体结合、膜融合、毒粒包装等。E蛋白上有特异性抗体的中和表位,可诱导免疫动物产生中和抗体。E蛋白在体外进行高效表达不仅有利于该蛋白结构与功能的深入研究,而且有利于开发新型疫苗(亚单位疫苗)和诊断试剂的开发。为了对JEV E蛋白的免疫特性进行分析,本试验依据E蛋白的空间结构特点把全长E基因分成3段,成功地在***中高效融合表达EF1、EF2、EF3蛋白,通过Western blot和ELISA鉴定确定EF1、EF2融合蛋白与JEV阳性血清反应。且GST-EF2反应信号最强,而对照GST和GST-EF3没有反应。由于EF1片段长为873bp,所以将其进一步细分(EF1-1、EF1-2、EF1-3、EF1-4),每段间约有20bp的重叠,进行融合表达及检测,结果发现4段均与JEV阳性血清有强的反应性。通过本实验证明了EF1、EF2片段1～402aa是E蛋白中的免疫优势决定区,包括了12个Cys的保守区及域I、域П和域Ⅱ3个主要抗原域。通过Western blot和ELISA鉴定证明了表达的蛋白具有较好的抗原性。本研究结果对进一步进行鉴定E蛋白的抗原表位和基于这些抗原表位序列的应用研究具有重要意义。

关键词：乙型脑炎病毒 ELISA Western 抗原表位阳性血清分段表达免疫性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫荧光诊断方法的建立及其应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫荧光诊断方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：袁婧刘长明魏萍危艳武张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学动物医学院

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),异硫氰酸荧光素(FITC)标记IgG,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(DIFA),... 详细信息

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),异硫氰酸荧光素(FITC)标记IgG,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(DIFA),用于病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中抗原检测。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16h检测到抗原阳性细胞,于60h～72h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,以腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR法检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。DIFA为PRRSV的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感和特异的检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光抗原检测

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