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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

作者：刘丹王一平吴洪丽危艳武唐青海刘建波李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep和-rRep’蛋白及PCV2-rCap蛋白制备亚单位苗，同时利用PCV2全病毒制备的灭活苗，在相同条件下进行鼠体免疫攻毒试验，旨在比较各自的免疫原性和攻毒保护性。以PCV2-rRep和-rRep’蛋白亚单位疫苗免... 详细信息

本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep和-rRep’蛋白及PCV2-rCap蛋白制备亚单位苗，同时利用PCV2全病毒制备的灭活苗，在相同条件下进行鼠体免疫攻毒试验，旨在比较各自的免疫原性和攻毒保护性。以PCV2-rRep和-rRep’蛋白亚单位疫苗免疫应答结果表明，这2种复制酶蛋白均具有良好的免疫原性，能够诱导机体产生高水平的抗体滴度，但在鼠体攻毒模型中对PCV2感染无任何保护性，用各自的免疫血清进行的体外中和试验也证明这些抗体无中和病毒活性，研究证明PCV2-rRep和-rRep’蛋白不是病毒保护性抗体，其功能可能仅限于病毒复制。比较而言，PCV2-rCap亚单位疫苗和全病毒灭活苗均能够有效刺激机体产生较强的体液免疫反应，在攻毒后抗体滴度得到进一步提升，对免疫攻毒鼠体病毒载量检测显著低于攻毒对照组水平，表明Cap蛋白抗原在抗病毒感染过程中起关键作用。由此可见，PCV2疫苗都是Cap蛋白刺激机体产生的抗体起免疫保护作用，而且针对Cap蛋白的抗体具有中和活性。

关键词：猪圆环病毒2型亚单位疫苗免疫保护蛋白表达

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猪圆环病毒2型Rep′蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位分析

猪圆环病毒2型Rep′蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位分析

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：刘丹刘建波吴洪丽王一平危艳武唐青海李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

背景猪圆环病毒2型(PCV2)基因组由单股负链闭合环状DNA构成,包含2个大的反义开放阅读框架(ORF1和ORF2),其中ORF1编码Rep蛋白,参与病毒的复制,是病毒的非结构蛋白;ORF2编码的Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白.PCV2-Rep蛋白编码基因全长945 ...

背景猪圆环病毒2型(PCV2)基因组由单股负链闭合环状DNA构成,包含2个大的反义开放阅读框架(ORF1和ORF2),其中ORF1编码Rep蛋白,参与病毒的复制,是病毒的非结构蛋白;ORF2编码的Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白.PCV2-Rep蛋白编码基因全长945 nt,含有314个氨基酸(aa),分子量为36ku,预测有3个潜在糖基化位点.在病毒复制过程中PCV2-ORF1转录本mRNA第417～799 nt处含有剪接位点,经剪接后产生一个截断的Rep′蛋白,其共编码178个aa,预测分子量为20.4 ku.由于剪接过程中Rep′蛋白C-末端阅读框发生移位,导致了Rep′与Rep蛋白第140位后C末端氨基酸序列完全不同.目前对Rep蛋白抗原表位分析报道较少.

关键词：

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驴感染马流感病毒的现状与危害

驴感染马流感病毒的现状与危害

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第三届(2017)中国驴业发展大会暨第七届驴产业发展高峰论坛

作者：孙金辉郭巍胡哲王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室马传染病与慢病毒研究团队吉林农业大学动物科技学院

2016年以来,随着养驴业的蓬勃发展,各地养殖户不断的引种,导致驴群中各种疾病的发生,其中最常见的为驴感染马流感病毒。马流感(Equine influenza),是由正粘病毒科(Orthom yxoviridae)流感病毒属(Influenza virus)A型流感病毒引起马属动... 详细信息

2016年以来,随着养驴业的蓬勃发展,各地养殖户不断的引种,导致驴群中各种疾病的发生,其中最常见的为驴感染马流感病毒。马流感(Equine influenza),是由正粘病毒科(Orthom yxoviridae)流感病毒属(Influenza virus)A型流感病毒引起马属动物的一种急性暴发式流行的传染病。马流感传播迅速,在马群中发病率高,但病死率低,世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties,OIE)将其列为法定报告传染病。到目前为止,马流感仅有

关键词：马流感病毒亚单位疫苗马属动物

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种鸡禽肺病毒感染的血清学调查

种鸡禽肺病毒感染的血清学调查

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第三届(2012)中国白羽肉鸡产业发展大会暨第二届全球肉鸡产业论坛

作者：贠炳岭 YUN Bing-ling LIU Zai-si 刘在斯 WU Guan 吴关 LI Jiukuan 李久宽 QIN Li-tin 秦立廷 QI Xiao-le 祁小乐 WANG Yong-qiang 王永强 GAO Hong-lei 高宏雷高玉龙 GAO Yu-long WANG Xiao-mei 王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 Division of Avian Infectious Diseases State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Vete

禽肺病毒(Avian pneumovirus,APV)感染火鸡称为火鸡支气管炎(TRT),能够感染火鸡上呼吸道,并继发细菌感染。除感染火鸡以外,APV与鸡的肿头综合征(SHS)有关,能够引起蛋鸡产蛋量短期下降和轻微呼吸道症状。许多国家对该病毒都有报道。为明... 详细信息

禽肺病毒(Avian pneumovirus,APV)感染火鸡称为火鸡支气管炎(TRT),能够感染火鸡上呼吸道,并继发细菌感染。除感染火鸡以外,APV与鸡的肿头综合征(SHS)有关,能够引起蛋鸡产蛋量短期下降和轻微呼吸道症状。许多国家对该病毒都有报道。为明确该病对中国家禽的影响,收集2011年-2012年黑龙江、吉林、河北、山东、湖北等地区种鸡群的血清。通过禽肺病毒抗体检测,发现种鸡群中普遍存在禽肺病毒感染,多个鸡群血清阳性率达到100％。

关键词：禽肺病毒抗体检测血清学流行病学调查

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牛病毒性腹泻病毒1型、猪瘟病毒野毒株和猪瘟病毒疫苗株多重SYBR Green-1实时荧光PCR方法的建立

牛病毒性腹泻病毒1型、猪瘟病毒野毒株和猪瘟病毒疫苗株多重SYBR ...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会

作者：王伟符芳陈欣李雪松郎越坤田华彬张兴娟李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨 150001

立可同时检测牛病毒性腹泻病毒-1型(BVDV-1)、猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与CSFV野毒株的快速检测方法。根据GenBank中登录的上述3种病毒的全基因组序列，设计3对特异性多重引物，建立了同时检测BVDV-1、C株和CSFV野毒株的多重SYBR...

立可同时检测牛病毒性腹泻病毒-1型(BVDV-1)、猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与CSFV野毒株的快速检测方法。根据GenBank中登录的上述3种病毒的全基因组序列，设计3对特异性多重引物，建立了同时检测BVDV-1、C株和CSFV野毒株的多重SYBR Green-I实时荧光PCR方法。敏感性试验结果表明，本方法能检测到3种病毒的最低病毒含量均为100拷贝/μL;特异性实验结果表明，猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PrV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、乙型脑炎病毒(JEV)，均呈阴性;通过批内及批间的重复试验，其变异系数<1％。该方法具有很强的特异性、很高的灵敏度、很好的重复性。

关键词：

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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

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第三届(2012)中国白羽肉鸡产业发展大会暨第二届全球肉鸡产业论坛

作者：贠炳岭 YUN Bing-ling LIU Wen 刘文 LI De-long 李德龙 QIN Li-ting 秦立廷 L1U Zai-si 刘在斯 WU Guan 吴关 QI Xiao-le 祁小乐 WANG Yong-qiang 王永强 GAO Hong-lei 高宏雷高玉龙 GAO Yu-long WANG Xiao-mei 王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 Division of Avian Infectious Diseases State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Vete

本文为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法.该方法对p27的最小检出量... 详细信息

本文为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法.该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML,且与禽类常见的病毒(IBV,MDV,ILTV等)无交叉反应.动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12天后有效检测泄殖腔分泌物中的ALV.利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法符合率分别为96.5％和93.8％.结果表明,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具.

关键词：禽白血病病毒早期诊断抗体检测双抗体夹心法

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中国马传染性贫血病毒疫苗株FDDV穿膜蛋白TM的截短突变

中国马传染性贫血病毒疫苗株FDDV穿膜蛋白TM的截短突变

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：马建郭巍赵立平张萍郭亮王登峰孔宪刚沈荣显周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组，黑龙江哈尔滨 150001 东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨 150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组，黑龙江哈尔滨 150001 东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨 150040

本研究中，我们使用PCR方法，对FDDV感染的FDD细胞中前病毒DNA的env进行了扩增，将PCR产物进行T-A克隆，挑取，阳性克隆用于序列分析。结果表明，，在囊膜蛋白穿膜亚单位TM对应的gp45基因区，病毒基因组env的第2230核苷酸位点出现G→A... 详细信息

本研究中，我们使用PCR方法，对FDDV感染的FDD细胞中前病毒DNA的env进行了扩增，将PCR产物进行T-A克隆，挑取，阳性克隆用于序列分析。结果表明，，在囊膜蛋白穿膜亚单位TM对应的gp45基因区，病毒基因组env的第2230核苷酸位点出现G→A的突变，gp45基因区提前出现了一个终止密码子TGA，即出现过早停止编码突变(Premature stop codon)，造成gp45基因对应的TM蛋白的截短。Western blot检测FDDV的裂解产物中有截短型TM的存在;用FDDV接种了3匹经琼脂免疫扩散检测确定为EIA阴性的马匹，在免疫后第15d和40d，分别对免疫马匹外周血单个核细胞中EIAV前病毒DNA和血浆中游离病毒粒子的基因组gp45核酸序列进行了分析。研究结果定性地说明gp45基因出现的过早停止编码突变并非致死性突变，其对应表达的胞浆区截短型TM蛋白可参与构成完整的病毒粒子。且这种病毒颗粒可以对马造成感染，并可在体内进行长时间复制。

关键词：马贫血病毒穿膜蛋白 PCR方法序列分析 gp45基因编码突变

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新城疫疫苗的研究进展

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现代农业科技 2012年第2期 325-327页

作者：杨煦刘玉芬刘怀然哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150025 东北农业大学农业生物功能基因重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

综述了常规疫苗和基因工程疫苗2种类型新城疫疫苗的研究进展,分析新城疫疫苗的发展方向,以促进新城疫疫苗的研究。

关键词：新城疫病毒疫苗研究进展

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乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定

乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定

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2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会

作者：闫丽萍华荣虹亓文宝童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院广东广州510642

流行性乙型脑炎是一种由蚊虫传播的病毒性人兽共患病，乙型脑炎病毒是该病毒的病原E蛋白是乙型脑炎病毒的主要结构蛋白，它在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。而E蛋白结构域Ⅲ是诱导中... 详细信息

流行性乙型脑炎是一种由蚊虫传播的病毒性人兽共患病，乙型脑炎病毒是该病毒的病原E蛋白是乙型脑炎病毒的主要结构蛋白，它在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用。而E蛋白结构域Ⅲ是诱导中和抗体的重要区域。为了分析鉴定乙型脑炎E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位，首先克隆并用pGEX-6P-1载体融合表达了乙型脑炎病毒疫苗株sA14-14-2的该区域，通过免疫印迹分析表明，该区域融合蛋白能被JEV阳性血清所识别。为了对这一区域进行抗原表位作图，进一步设计了一套14个覆盖该区域的部分重叠短肽，并进行了GST融合表达，用JEV阳性血清对14个融合蛋白进行免疫印迹和ELISA免疫反应性分析，鉴定出4个线性抗原表位E39(305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、FA5-1(355VTVNPFVATSSA 366)、E48-l(377PFGDSYIV384)、E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)。本试验结果对进一步分析乙脑病毒E蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究有重要意义。

关键词：乙型脑炎病毒抗原表位人兽共患病免疫反应

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腺病毒/日本脑炎病毒复制子嵌合载体的构建

腺病毒/日本脑炎病毒复制子嵌合载体的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李红梅孙元亓文宝孟其麟田大勇廖明仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室，广东广州 510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室，广东广州 510642

日本脑炎病毒(JEV)复制子被证实是一种有前景的DNA疫苗栽体，但因其不稳定和递送效率低使得免疫效力不理想。本研究的目的是利用人复制缺陷型腺病毒(AdV)这个高效的递送系统来递送JEV复制子从而构建一个嵌合载体。将之前构建的含有增强... 详细信息

日本脑炎病毒(JEV)复制子被证实是一种有前景的DNA疫苗栽体，但因其不稳定和递送效率低使得免疫效力不理想。本研究的目的是利用人复制缺陷型腺病毒(AdV)这个高效的递送系统来递送JEV复制子从而构建一个嵌合载体。将之前构建的含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的J1三V复制子插入到经过改造后带有SwaI位点的的pShuttle-CMV载体中，再将来自pCI载体的嵌合内含子插入JEV复制子中，得到转移载体DSh-JEV-In-EGFP，经SwaI线形化后转化BJ5183感受态细胞，将所得重组腺粒经PacI线形化后转染HEK293细胞。传代直至出现细胞病变，得到含有表达EGFP的JEV复制子的重组腺病毒，命名为rAdV-JEV-In-EGFP。结果表明，pSh-JEV-In-EGFP在细菌中传20代仍然保持稳定，EGFP蛋白在rAdV-JEV—In—EGFP感染的HEK293细胞中稳定、高效地表达。腺病毒／日本脑炎病毒复制子嵌合载体有望用于开发能同时预防日本脑炎和其它传染性疾病的二价疫苗。

关键词：日本脑炎病毒复制子腺病毒嵌合载体内含子稳定性

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