检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 915-920页

作者：王冬雪穆国冬侯玉杰李斌邓国华崔鹏飞施建忠陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 吉林省动物疫病预防控制中心吉林长春130000

为了解野鸟源H1N1亚型禽流感病毒(AIV)的分子特征及其对哺乳动物小鼠模型的致病风险,本研究对2020年分离到的一株H1N1亚型AIV A/wildbird/Jilin/SM199/2020(H1N1)(简称WB/JL/SM199/2020)进行基因组序列及遗传演化分析,并评估了其对BALB/... 详细信息

为了解野鸟源H1N1亚型禽流感病毒(AIV)的分子特征及其对哺乳动物小鼠模型的致病风险,本研究对2020年分离到的一株H1N1亚型AIV A/wildbird/Jilin/SM199/2020(H1N1)(简称WB/JL/SM199/2020)进行基因组序列及遗传演化分析,并评估了其对BALB/c小鼠的致病力。序列分析结果显示,分离株的8个基因节段分别与GISAID数据库中的野鸟源H1N1、H6N1、H11N9、H7N7、H1N2、H12N8和H3N8亚型AIV各基因节段的同源性较高,达98%以上,表明该病毒基因来源复杂,具有明显的遗传多样性。系统发育分析结果显示,该病毒的HA和NA基因均属于欧亚分支。各蛋白氨基酸序列分析结果显示,该病毒HA蛋白裂解位点基序为^(324)PSIQSR↓GLFG^(333),符合低致病性AIV(LPAIV)特征;其内部蛋白氨基酸序列存在多处对小鼠致病力增强的氨基酸突变,如PB1蛋白的D^(622)G、NS1蛋白的I^(106)M、C_(138)F和V^(149)A突变、M1蛋白的I^(43)M和T^(215)A突变。小鼠致病性试验结果显示,该病毒仅能在小鼠的鼻甲和肺脏中有效复制,病毒滴度均在3log_(10)EID_(50)/mL以上。而在小鼠的脑、脾脏和肾脏中均未检测到该病毒,且感染组与阴性对照组小鼠均无相应临床症状,体质量均无明显降低。以上结果表明该H1N1亚型AIV对小鼠呈低致病力。本研究为野鸟源H1N1亚型AI的防控提供了数据参考,并为其生物学特征的进一步研究奠定了基础。

关键词： H1N1亚型禽流感病毒野鸟遗传演化分析致病性

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鸭源新城疫病毒强毒株感染对番鸭致病性和β-防御素基因表达的影响

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中国动物传染病学报 2021年

作者：侯雨彤陈玉秋张莉莉马得莹东北农业大学动物科学技术学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为了探讨鸭源新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）感染对番鸭β-防御素（Avianβ-Defensin，AvBD）基因表达的影响，本实验选取80只15日龄SPF番鸭，将其随机分为两组，每组40只。其中一组以滴鼻点眼方式接种10;EID;/0.2mL的鸭源... 详细信息

为了探讨鸭源新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）感染对番鸭β-防御素（Avianβ-Defensin，AvBD）基因表达的影响，本实验选取80只15日龄SPF番鸭，将其随机分为两组，每组40只。其中一组以滴鼻点眼方式接种10;EID;/0.2mL的鸭源基因Ⅶ型NDVMd/CH/LGD/1/2005毒株。另一组以相同途径接种等量灭菌的磷酸盐缓冲液，作为对照组。攻毒后持续观察临床症状25d。并在攻毒后36h、72h、7d和25d每组分别剖杀10只番鸭，采集五个免疫器官的样品，包括骨髓、脾脏、盲肠扁桃体、哈德氏腺和法氏囊，运用real-timeRT-PCR方法检测其中11种防御素基因表达量的变化差异。并在攻毒后36h、72h、7d以及16d、20d和25d每组各采集10只番鸭的血清，用血凝抑制试验（Hemagglutinationinhibition，HI）检测新城疫病毒特异性抗体水平。结果表明，番鸭感染该鸭源NDV强毒株后出现新城疫病毒感染的典型临床症状，死亡率为7.5%。感染番鸭体内组织中AvBD1、2、5、10 在广泛表达，且AvBD3、5、7 在法氏囊内均有不同程度表达上调。番鸭感染该鸭源NDV强毒株后72 h开始抗体开始转阳，第7 d即达到高峰，之后16 d、20 d和25 d的抗体水平趋于平稳。以上结果表明，该鸭源NDV强毒株感染可在番鸭体内诱导产生抗病毒免疫应答反应。

关键词：新城疫病毒番鸭防御素基因表达

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B亚型禽偏肺病毒的分离鉴定及致病性研究

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畜牧兽医学报 2022年第10期53卷 3540-3549页

作者：于蒙蒙包媛玲王素艳辛子琪刘鹏冯笑艳孟令宅郭茹张艳萍刘长军祁小乐李俊平王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队哈尔滨150069 中国兽医药品监察所北京100081 扬州大学江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心扬州225009

旨在确定我国部分养鸡场的鸡出现甩头、精神萎靡和肿头综合征是否由禽偏肺病毒(aMPV)引起,本研究从山东、福建、黑龙江等地的发病蛋鸡和肉鸡场采集鼻甲骨、气管和肺等样品,首先利用aMPV特异性的RT-PCR方法对临床样品进行初步检测,将RT-... 详细信息

旨在确定我国部分养鸡场的鸡出现甩头、精神萎靡和肿头综合征是否由禽偏肺病毒(aMPV)引起,本研究从山东、福建、黑龙江等地的发病蛋鸡和肉鸡场采集鼻甲骨、气管和肺等样品,首先利用aMPV特异性的RT-PCR方法对临床样品进行初步检测,将RT-PCR检测阳性样品接种Vero细胞进行病毒分离,然后利用G/F基因序列分析及间接免疫荧光试验(IFA)等鉴定病毒的亚型,最后将分离株感染SPF鸡进行致病性分析。结果显示:在采集的220份样品中,RT-PCR检测结果显示,有3份鼻甲骨样品在228bp左右出现特异性条带,将阳性病料接种Vero细胞盲传5代后,细胞出现变圆、聚集和融合等aMPV特征性细胞病变(CPE),表明成功分离到3株aMPV,将其分别命名为SD2001、SD2002和HLJ2101。G和F基因同源性分析显示,来自蛋鸡的SD2001、SD2002和来自肉鸡的HLJ2101分离株的G和F基因与其他B亚型aMPV毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性均较高,核苷酸的相似性分别为93.4%~98.6%和95.6%~100.0%,氨基酸的相似性分别为88.7%~97.8%和97.6%~100.0%;而与A、C和D亚型的G和F基因同源性较低,核苷酸的相似性分别为27.1%~61.8%和66.8%~74.8%,氨基酸的相似性分别为16.1%~36.7%和72.5%~86.5%,这些结果表明,SD2001、SD2002和HLJ2101分离株属于B亚型aMPV。进一步利用B亚型aMPV特异性的阳性血清进行IFA检测,接种SD2001、SD2002和HLJ2101的Vero细胞均可以观察到特异性的绿色荧光信号,进一步证实3个分离株属于B亚型aMPV。选择SD2001感染3周龄SPF鸡进行了致病性研究,结果发现SPF鸡感染后3~6d出现精神萎靡、甩头和流鼻涕等症状,鼻甲骨、气管和肺也出现病理性损伤,其发病率为90%(18/20)。3株B亚型aMPV的分离不仅有助于明确我国部分养鸡场出现肿头综合征的发病原因,同时也证实B亚型aMPV流行毒株对鸡有明显的致病性,这些结果为我国家禽疫病的诊断和有效防控提供了重要理论依据。

关键词： B亚型禽偏肺病毒分离鉴定致病性

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SPF鸡福利伦理指南团体标准的制定和解读

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实验动物与比较医学 2022年第6期42卷 572-576页

作者：于海波周洁李剑虹李昌文高彩霞夏长友中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家禽类实验动物资源库黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 上海实验动物研究中心上海201203 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

SPF鸡是一种主要的禽类实验动物,主要用于生物医学、畜牧兽医等领域,是科学研究和多种人、畜、禽生物制品的生产、检验中不可缺少的实验动物和原材料。本文介绍了中国实验动物学会团体标准《实验动物SPF鸡福利伦理指南》的编制背景、编... 详细信息

SPF鸡是一种主要的禽类实验动物,主要用于生物医学、畜牧兽医等领域,是科学研究和多种人、畜、禽生物制品的生产、检验中不可缺少的实验动物和原材料。本文介绍了中国实验动物学会团体标准《实验动物SPF鸡福利伦理指南》的编制背景、编制目的、SPF鸡福利伦理的范围、SPF鸡福利伦理的内容、标准实施的意义等主要内容。此标准中规定SPF鸡在组织机构、动物设施、动物环境、日常管理、实验操作、运输过程等方面必须满足的福利条件。新编制的SPF鸡福利标准旨在规范SPF鸡实验动物管理,提高SPF鸡实验动物整体质量,更好地为科研和生产服务,促进科学发展、保障人民健康,并且使我国SPF鸡实验动物行业与国际接轨。

关键词： SPF鸡福利伦理组织机构动物环境日常管理

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基于病毒载体的非洲猪瘟疫苗研究进展及展望

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中国预防兽医学报 2022年第8期44卷 903-909页

作者：张新王秋霞李文霞袁梦淇赵小天杨晓柯刘兴友李永锋仇华吉河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 新乡学院河南新乡453003 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染引起的一种急性、高度传染性、致死性动物传染病[1],临床上以高热、皮肤发绀和脏器广泛性出血为主要特征[2]。世界动物卫生组织(WOAH)将ASF列为法定报告动物疫病,我国将其列为... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染引起的一种急性、高度传染性、致死性动物传染病[1],临床上以高热、皮肤发绀和脏器广泛性出血为主要特征[2]。世界动物卫生组织(WOAH)将ASF列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病[3]。ASFV可感染所有品种和年龄的家猪和野猪,持续感染的野猪和软蜱是家猪感染ASFV的重要传染源。

关键词：高度传染性世界动物卫生组织动物传染病一类动物疫病猪瘟疫苗非洲猪瘟法定报告软蜱

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1例猫肾上腺皮质癌脾转移的病理及免疫组化分析

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畜牧兽医学报 2021年第12期52卷 3669-3674页

作者：邓朝阳王峥张佳韧何希君郑家三黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

猫的肾上腺皮质癌转移至脾在兽医临床非常罕见。在本报告中,描述了1例10岁田园猫,其症状表现为腹部疼痛,频繁呕吐,消瘦,有慢性肾上腺功能损伤病史,影像学检查脾肿大。对患猫进行脾摘除手术,并对摘除的组织进行组织病理学检查和免疫组化... 详细信息

猫的肾上腺皮质癌转移至脾在兽医临床非常罕见。在本报告中,描述了1例10岁田园猫,其症状表现为腹部疼痛,频繁呕吐,消瘦,有慢性肾上腺功能损伤病史,影像学检查脾肿大。对患猫进行脾摘除手术,并对摘除的组织进行组织病理学检查和免疫组化分析。病理组织学结果显示,肿瘤细胞具有丰富的脂质样空泡,细胞体积大,有丝分裂象多见,且肿瘤细胞已发生血管侵袭,细胞核浓染;免疫组织化学结果显示,synaptophysin、S-100和GATA4阳性表达。根据病理组织学和免疫组织化学及病史和实验室检查,最后诊断为肾上腺皮质癌的脾转移。首次报道了猫肾上腺皮质癌脾转移临床病例及病理学诊断,对于临床相关疾病诊疗有一定的参考价值和借鉴意义。

关键词：猫肾上腺皮质癌病理学免疫组织化学

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马流产沙门氏菌的分离鉴定及其微量凝集抗体检测方法的建立与应用

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中国农业科学 2020年第10期53卷 2112-2121页

作者：郭奎王宁王金慧初晓雨赵语婷郭巍刘荻萩胡哲王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测。【方法】利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进... 详细信息

【目的】对流产马驹组织进行马流产沙门氏菌的分离和鉴定,以分离株制备凝集抗原,旨在建立一种敏感、特异、操作简便和高通量的微量凝集方法,实现对马流产沙门氏菌抗体进行快速检测。【方法】利用沙门氏菌显色培养基对流产的马驹脏器进行细菌分离,对紫色菌落进行革兰氏染色鉴定;提取细菌全基因组,利用16S rRNA进行PCR扩增和测序鉴定,并对菌株进行生化鉴定和血清型鉴定,对病因进行综合诊断。利用分离获得的阳性菌株进行灭活后作为凝集抗原,以马流产沙门氏菌标准阳性血清作为阳性对照,通过反应条件优化,建立微量凝集试验方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证。与国家行业标准中的试管凝集试验方法进行对比,同时利用微量凝集对华北和西北各3个地方的共151份血清样品进行检测,并随机选取30份样品,利用微量凝集和试管凝集进行检测,并对两种方法检测的敏感性进行比较分析。【结果】各流产马驹组织在沙门氏菌显色培养基上划线结果,均可以获得大量紫色目标菌落;革兰氏染色结果表明,分离的菌株为革兰氏阴性短杆菌,16S rRNA测序证实分离株为沙门氏菌属,生化鉴定结果表明,分离的17株菌均符合马流产沙门氏菌的生化特性,但相比上世纪强毒株马流产沙门氏菌C77-1,均不能发酵鼠李糖;血清型鉴定证实分离株均为马流产沙门氏菌,将分离的17株马流产沙门氏菌分别命名为E.S-1—17。因此证实马匹流产均为马流产沙门氏菌感染所致。利用甲醛对E.S-1菌株进行了灭活处理,成功制备了马流产沙门氏菌凝集抗原,并建立了一种快速敏感的微量凝集检测方法,其中优化了最佳反应凝集抗原浓度为4亿/mL。其敏感性比试管凝集高1个滴度,其特异性与其他常见马传染病病原阳性血清无交叉反应,并且具有良好的重复性。利用微量凝集方法,对华北3个疫情区进行检测,阳性率分别为28.6%、42.9%和27.3%,西北3个无疫情区阳性率均为0%。此外,利用两种方法对相同的30份临床血清进行检测,微量凝集和试管凝集方法阳性份数分别为10份和3份,阳性率分别为33.3%和10%。与试管凝集相比,微量凝集诊断敏感性为100%,诊断特异性为74.1%,总体符合率为76.7%。【结论】分离鉴定获得了17株马流产沙门氏菌,建立了马流产沙门氏菌微量凝集抗体检测方法,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,简便、快速、高通量,可以广泛应用于马属动物中马流产沙门氏菌抗体的检测,是该病诊断及疫苗评估的重要依据之一。

关键词：马流产沙门氏菌分离鉴定微量凝集应用马

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STAG2基因敲除的IPEC-J2细胞系构建及其对PDCoV复制影响的研究

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 550-554页

作者：张洪玲陈建飞石照蓉李明蔚吴洋郭龙军冯力黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪消化道团队黑龙江哈尔滨150069

为探究猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中基质抗原2(STAG2)因子对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)复制的影响,本研究针对STAG2基因设计并合成sgRNA,将其克隆至lentiCRISPR v2载体构建重组表达质粒。将重组质粒转染至IPEC-J2细胞后,利用嘌呤霉素(Puromy... 详细信息

为探究猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中基质抗原2(STAG2)因子对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)复制的影响,本研究针对STAG2基因设计并合成sgRNA,将其克隆至lentiCRISPR v2载体构建重组表达质粒。将重组质粒转染至IPEC-J2细胞后,利用嘌呤霉素(Puromycin)采用有限稀释法进行亚克隆,筛选STAG2基因缺失的单克隆细胞株,并经western blot鉴定后最终获得一株STAG2缺失的单克隆稳定细胞系IPEC-J2-STAG2-/-(KO)。利用western blot方法鉴定不同代次STAG2敲除细胞的遗传稳定性,结果显示,IPEC-J2-STAG2-/-细胞具有良好的遗传稳定性。为探究STAG2基因对PDCoV复制的影响,本研究将PDCoV分别感染IPEC-J2-STAG2-/-细胞和野生型IPECJ2细胞(WT),采用荧光定量PCR、western blot方法检测细胞中PDCo V N基因m RNA转录及其蛋白表达水平。结果显示,与WT组相比,IPEC-J2-STAG2-/-细胞中PDCo V N基因m RNA转录水平及其蛋白表达水平均极显著降低(P<0.01),表明STAG2缺失会抑制PDCoV在IPEC-J2细胞中的复制。为探究STAG2缺失是否刺激宿主细胞产生天然免疫应答,本研究利用荧光定量PCR方法检测敲除细胞中3种天然免疫应答相关干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平,结果显示,与WT相比,IPEC-J2-STAG2-/-细胞内相关ISGs转录水平显著升高(P<0.01),表明STAG2缺失后宿主细胞启动天然免疫应答进而抑制PDCoV的复制。本研究首次发现STAG2基因缺失后显著上调了IPEC-J2细胞天然免疫抗病毒基因的转录水平,从而抑制PDCoV的复制,为研究PDCoV和宿主因子相互作用提供了新思路。

关键词：猪德尔塔冠状病毒基质抗原2 CRISPR/Cas9 敲除细胞系

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野猪粪便中乳酸菌的分离鉴定及特性研究

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中国农业科学 2020年第14期53卷 2964-2973页

作者：王翌李淼李永锋孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】筛选安全的、具有优良特性的乳酸菌菌株,进一步研发益生制剂,为饲料添加剂等动物相关产品提供资源。【方法】从我国黑龙江省大兴安岭地区采集野猪粪便样品13份,编号后置于4℃保温箱迅速运回实验室,利用MRS培养基分离纯化乳酸菌... 详细信息

【目的】筛选安全的、具有优良特性的乳酸菌菌株,进一步研发益生制剂,为饲料添加剂等动物相关产品提供资源。【方法】从我国黑龙江省大兴安岭地区采集野猪粪便样品13份,编号后置于4℃保温箱迅速运回实验室,利用MRS培养基分离纯化乳酸菌。使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取分离菌株的基因组DNA,利用细菌16S rDNA通用引物进行PCR鉴定,将扩增得到的序列测序后在NCBI上使用BLAST与GenBank数据库中序列进行对比分析,确定各菌株的分类学地位。将鉴定后的乳酸菌菌株分别接种于酸性(pH 3.0)和含胆盐(0.3%)的MRS培养基,在不同条件下评价乳酸菌菌株的耐酸、耐胆盐特性。将过夜培养的乳酸菌于室温条件下静置,在不同时间测定其OD600nm,进行自凝集能力评价;过夜培养的菌株分别与致病性埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌3种致病菌混合后于室温静置,进行共凝集能力检测。在体外,分别进行乳酸菌菌株对Caco-2细胞和IPEC-J2细胞的黏附能力测定,评价不同菌株的黏附能力。通过测定乳酸菌菌株对致病性埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌3种致病菌的抑菌环直径,评价分离菌株的抑菌活性。通过体内外试验评价乳酸菌菌株的安全性。在体外,分别以模式菌株嗜酸乳杆菌和金黄色葡萄球菌作为阴性对照和阳性对照,将3株乳酸菌菌株和对照菌株在血平板上划线,37℃厌氧孵育18—24 h,观察细菌菌落周围是否形成溶菌环,评价分离菌株的溶血特性。使用文献中已报道的毒力因子引物对分离的乳酸菌菌株进行PCR扩增,检测是否存在毒力因子的编码基因,评估分离菌株的安全性。在体内,将过夜培养的乳酸菌连续饲喂7周龄的BALB/c小鼠21 d,分别测定小鼠的初始体重和最终体重,观察计算体重变化情况;饲喂21 d后,解剖获取小鼠的脾脏、肝脏和肾脏计算器官指数,评价分离乳酸菌菌株的体内安全性。【结果】从野猪粪便中分离得到3株对酸和胆盐具备一定耐受力的乳酸菌,经鉴定分别为蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii)、耐久肠球菌(Enterococcus durans)和黏膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae)。3株乳酸菌菌株均表现出较强的自凝集能力和对致病菌的共凝集能力,同时对Caco-2细胞和IPEC-J2细胞均表现出较强的黏附能力,抑菌试验结果显示黏膜乳杆菌对3种致病菌均具备较强的抑菌活性。经体内外安全性评价,3株乳酸菌菌株无溶血性,且均未检测到毒力基因,经其连续饲喂的小鼠行为表现正常、状态良好,其中,与对照组相比,黏膜乳杆菌饲喂后小鼠增重显著。【结论】从大兴安岭野猪粪便中分离的3株乳酸菌(特别是黏膜乳杆菌)具有良好的特性和安全性,具备进一步开发益生菌制剂的潜力。

关键词：野猪乳酸菌凝集能力黏附能力安全性

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蓝舌病在全球的分布概况

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畜牧兽医学报 2021年第4期52卷 881-890页

作者：李茂林张七斤徐青元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018

蓝舌病为OIE规定的需通报疫病,我国将其列为一类动物疫病。该病已经给全球大部分流行地区造成巨大经济损失。我国于1979年首次证明该病存在,且在我国流行初期即造成大量易感动物死亡,给我国畜牧业带来了重大经济损失。但蓝舌病在我国仍... 详细信息

蓝舌病为OIE规定的需通报疫病,我国将其列为一类动物疫病。该病已经给全球大部分流行地区造成巨大经济损失。我国于1979年首次证明该病存在,且在我国流行初期即造成大量易感动物死亡,给我国畜牧业带来了重大经济损失。但蓝舌病在我国仍属冷门研究方向,我国到底分离鉴定出多少个血清型的蓝舌病病毒,该病在我国的分布范围到底有多广?许多畜牧兽医工作者对这些问题并不是非常清楚。特别是在近年来鲜有蓝舌病引起动物发病死亡报道的前提下,人们对蓝舌病的重视程度进一步降低。本文对蓝舌病在全球的流行概况进行简要阐述,同时,对蓝舌病在我国40年的流行情况进行回顾,希望该病在我国能够得到足够的重视。

关键词：蓝舌病疫病监测病毒分离疫病流行

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