检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2019年第2期35卷 216-225页

作者：王翌李淼孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

黏膜是阻止病原入侵的第一道防线,黏膜免疫系统在抵抗感染方面起着至关重要的作用。通过黏膜途径接种疫苗可以同时诱导黏膜和全身免疫反应,因此,理论上针对黏膜的免疫策略是最合理和有效的。但黏膜免疫系统的复杂性和屏障作用造成抗原... 详细信息

黏膜是阻止病原入侵的第一道防线,黏膜免疫系统在抵抗感染方面起着至关重要的作用。通过黏膜途径接种疫苗可以同时诱导黏膜和全身免疫反应,因此,理论上针对黏膜的免疫策略是最合理和有效的。但黏膜免疫系统的复杂性和屏障作用造成抗原诱导的免疫应答水平低下,制约了黏膜疫苗的发展。M细胞(Microfoldcells)是黏膜免疫系统所独有的,其具有捕获腔内抗原和启动抗原特异性免疫应答的功能。M细胞摄取抗原的多少直接关系到黏膜疫苗的免疫效力,而利用M细胞配体可将抗原靶向递呈给M细胞,从而实现高效的黏膜免疫应答。靶向M细胞的抗原递送策略及其应用可以提高黏膜免疫应答水平,促进黏膜疫苗的研制。尽管如此,要成功研制安全高效的黏膜疫苗,今后依然有漫长的路要走,这可能有赖于进一步探究M细胞的特性和功能及黏膜免疫机制。

关键词：靶向性抗原递送 M细胞黏膜免疫黏膜疫苗

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宿主因子ZFAT影响抗流感病毒固有免疫因子MxA表达的研究

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1201-1206,1213页

作者：黄海翔宋洋铭施建忠赵东明杨孝朴陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

黏病毒抵抗蛋白A(MxA)是哺乳动物体内对H5N1高致病性禽流感病毒有着较高敏感度的固有免疫因子,本实验首先对BioGrid数据库的蛋白质互作组学信息进行分析,结果显示包含AT钩结构域锌指蛋白(ZFAT)可能影响MxA的表达活性。为了探究ZFAT对抗... 详细信息

黏病毒抵抗蛋白A(MxA)是哺乳动物体内对H5N1高致病性禽流感病毒有着较高敏感度的固有免疫因子,本实验首先对BioGrid数据库的蛋白质互作组学信息进行分析,结果显示包含AT钩结构域锌指蛋白(ZFAT)可能影响MxA的表达活性。为了探究ZFAT对抗流感病毒因子MxA表达调节的分子机制,本实验利用siRNA干扰技术下调A549细胞中ZFAT蛋白的表达,再通过流感病毒滴定试验检测ZFAT沉默对流感病毒复制的影响,荧光定量PCR和蛋白免疫印迹试验检测ZFAT沉默对MxA和干扰素等其他固有免疫因子表达活性的影响。结果显示:下调ZFAT蛋白表达可以显著降低流感病毒的复制能力(p<0.05),且无论流感病毒感染与否,下调ZFAT蛋白表达均可以显著激活A549细胞中MxA的转录与翻译活性(p<0.01);此外,对MxA表达具有严密调控作用的I型(IFNA1、IFNB1)和III型干扰素(IFNL1)以及下游信号分子的转录活性在6 hpi也因ZFAT表达的下调而显著提升(p<0.05)。以上结果表明下调ZFAT蛋白的表达可以提高宿主细胞抗病毒因子的转录水平,并且激活抗流感病毒因子MxA的蛋白表达。本实验为探寻宿主固有免疫系统抵抗流感病毒侵入的分子机制提供了新的视角和依据。

关键词： H5N1高致病性禽流感病毒含AT钩结构域锌指蛋白黏病毒抵抗蛋白固有免疫调节

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结核分枝杆菌TetR家族蛋白Rv3295新调控靶点及辅助因子的初步研究

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中国预防兽医学报 2020年第7期42卷 643-649页

作者：吕明月崔莹莹唐祎依党光辉崔子寅刘思国宋宁宁黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝... 详细信息

为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝胶迁移试验(EMSA)和染色质免疫沉淀(ChIP)试验结果显示,Rv3295与rv3229c(desA3)启动子在体外与体内均能够结合。DNA大沟小沟结合试验表明,Rv3295与rv3229c DNA的大沟结合。通过EMSA小分子筛选,结果显示,小分子(VB1、VB3、VB6、VC)和金属离子(Fe3+和Zn2+)在体外均可降低Rv3295与rv3229c启动子区域的结合,而氨基酸及其它小分子对该结合无影响。分子对接试验表明Rv3295的Glu 67和Glu 105氨基酸残基在该蛋白质与小分子及金属离子的相互作用中起重要作用。以上试验结果表明rv3229c为TetR家族蛋白Rv3295新的调控靶点。本研究首次揭示了MTB中的Rv3295调控蛋白可直接调控rv3229c(desA3)的表达,进而参与油酸合成的调控。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3295 转录调控 rv3229c

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欧亚类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白的表达及免疫原性评估

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中国农业科学 2019年第5期52卷 930-938页

作者：贾云慧许程志隋金钰吴运谱许榜丰陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),将其转染293T细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测和Western blot检测HA蛋白在体外的表达;将重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)经肌肉注射途径、以100μg/只剂量免疫16只6周龄BALB/c小鼠(I组和II组),间隔3周后进行加强免疫(二免);同等数量的小鼠以相同方式注射100μL无菌PBS作为非免疫对照组(III组和IV组)。首免和二免每周采血,分别采用血凝抑制(HI)试验和病毒中和(VN)试验两种方法测定不同类型的血清抗体效价;二免2周后,其中两组小鼠(I组和III组)用50μL(106.0EID50)的ZJ245病毒经滴鼻感染途径进行攻毒,另外两组(II组和IV组)用A/swine/Heilongjiang/44/2009(H1N1)(HLJ44)病毒进行攻毒。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状、统计发病与死亡情况,且每天称量小鼠体重,在体重下降比率超过25%时判定为小鼠死亡。攻毒后第3天,每组随机剖杀3只小鼠,分别采集脑、鼻甲、肺、脾和肾等脏器,匀浆处理后通过接种10日龄的非免疫鸡胚测定脏器的病毒含量。通过小鼠体重变化以及脏器滴定的病毒含量评估重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫保护效果。【结果】经酶切鉴定和测序验证表明ZJ245的HA基因的已正确克隆至真核表达质粒p CAGGS中获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),经体外转染293T细胞后,IFA和Western blot证实了病毒的HA蛋白能够正确表达,并具有良好的生物学活性;小鼠的免疫与攻毒试验结果表明,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)首免后一周可检测到针对同源病毒ZJ245的低水平HI和VN抗体,加强免疫后抗体水平明显升高,HI抗体达到76.88、VN抗体达到152.5;同时针对异源病毒HLJ44也产生了较低水平的HI和VN抗体。106.0 EID50的同源病毒ZJ245攻毒时,与非免疫组小鼠相对比,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫完全阻止了因病毒攻击而导致的小鼠体重下降以及肺脏和鼻甲内病毒的复制;106.0 EID50的异源病毒HLJ44攻毒时,相比非免疫组小鼠,质粒免疫组小鼠体重的下降比率、以及肺脏和鼻甲内的病毒滴度均显著降低(P<0.0001、P <0.001、P <0.05)。【结论】重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)能够有效表达病毒HA蛋白,免疫后可使小鼠获得完全抵抗ZJ245感染及部分抵御HLJ44感染的免疫保护力,表明重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)具有良好的免疫原性。

关键词：欧亚类禽型H1N1猪流感病毒 HA蛋白重组质粒免疫原性 DNA疫苗

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杆菌七肽抗菌谱和溶血性的研究

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中国畜牧杂志 2020年第4期56卷 159-164页

作者：张江李火明蔡文通周晓容安杰利(重庆)生物科技有限公司重庆402460 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 重庆市畜牧科学院重庆402460

本试验旨在研究杆菌七肽抗菌谱和体外对人工肠液和胃液的稳定性、溶血性,为其在饲料中替代抗生素提供理论依据。试验采用管碟法测定抑菌圈来研究杆菌七肽对18株微生物的抑制作用,并研究高温水浴、人工肠液、人工胃液处理后的抑菌活性以... 详细信息

本试验旨在研究杆菌七肽抗菌谱和体外对人工肠液和胃液的稳定性、溶血性,为其在饲料中替代抗生素提供理论依据。试验采用管碟法测定抑菌圈来研究杆菌七肽对18株微生物的抑制作用,并研究高温水浴、人工肠液、人工胃液处理后的抑菌活性以及不同浓度杆菌七肽对红细胞的溶血率。结果表明:杆菌七肽对大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、布氏杆菌(Brucella melitensis)、嗜水气假单胞菌(Pseudomonas hydrophila)等具有明显的抑制作用,对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)没有抑制作用,且抑菌活性不受热处理、人工胃液和肠液的影响;不同浓度的(12.5~100μg/mL)杆菌七肽处理红细胞的溶血率都低于5%。结果显示,杆菌七肽抗菌谱主要为革兰氏阴性菌;杆菌七肽对热处理、人工胃液和人工肠液具有很好的耐受性,而且对受试红细胞溶血性低。

关键词：杆菌七肽抗菌谱饲用抗生素溶血性

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小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用

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中国动物检疫 2021年第12期38卷 91-98页

作者：杨鸣发马云云于志亚刘家森康洪涛姜骞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/自然疫源性人畜共患病团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 b... 详细信息

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 bp片段,构建pMD^(TM)18-N标准质粒并优化反应条件,建立了PPRV N基因cdPCR检测方法,并与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果显示:当质粒标准品浓度在1.22×(10^(5)~10^(2))copies/μL范围时,cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1000倍,且稳定性好,特异性强;当标准品浓度在1.22×(10^(5)~10^(-3))copies/μL范围时,cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性,但灵敏性比RT-qPCR高100倍;与RT-qPCR测定结果(13.29±6.74)copies/μL相比,cdPCR的最低检测限更低,约为(0.44±0.14)copies/μL;cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率(25.5%)高于RT-qPCR(17.0%)。结果表明,建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法。

关键词：小反刍兽疫病毒(PPRV) 芯片式数字PCR(cdPCR) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)

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三株美洲驼源狂犬病病毒N基因遗传进化分析

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野生动物学报 2021年第1期42卷 120-123页

作者：王金玲郑秉武曹霞杨龙峰葛金英卢爱桃内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010010 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010010 呼和浩特市园林管理局动物园管理处呼和浩特010050 北京市延庆区动物疫病预防控制中心北京102100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 内蒙古自治区综合疾病预防控制中心呼和浩特010031

为阐明2015年在内蒙古呼和浩特地区3株美洲驼源狂犬病病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,经基因扩增和测序获得3株美洲驼源RABV N基因序列,并进行遗传进化分析。结果显示3株RABV之间N基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为100%,且都与201... 详细信息

为阐明2015年在内蒙古呼和浩特地区3株美洲驼源狂犬病病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,经基因扩增和测序获得3株美洲驼源RABV N基因序列,并进行遗传进化分析。结果显示3株RABV之间N基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为100%,且都与2011年呼和浩特奶牛源和犬源毒株、2013年内蒙古牛源毒株、2007年湖北犬源毒株、2016和2018年北京犬源毒株、2006年天津犬源毒株和2009年福建犬源毒株的亲缘性最高,同源率为100%。这些毒株位于同一个遗传进化群内,均属于CTN-1(Asian谱系)。研究结果说明3株美洲驼源RABV的N基因与参考的内蒙古、湖北、北京、福建和天津毒株起源于共同的祖先。

关键词：美洲驼狂犬病病毒 N基因遗传进化

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人工感染禽腺病毒血清4型对鹅天然免疫反应的影响

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中国兽医科学 2020年第2期50卷 222-232页

作者：李雪峰姜磊孙金艳李慧昕马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院畜牧研究所黑龙江哈尔滨150086

将50只30日龄的健康鹅随机分为攻毒组、观察组和对照组,观察并采集样品,检测抗体水平、病毒血症、病毒载量,应用real-time PCR(RT-PCR)方法检测肝、心脏组织中β-防御素(Av BDs)、Toll样受体(TLRs)、细胞因子(cytokines)等基因表达量。... 详细信息

将50只30日龄的健康鹅随机分为攻毒组、观察组和对照组,观察并采集样品,检测抗体水平、病毒血症、病毒载量,应用real-time PCR(RT-PCR)方法检测肝、心脏组织中β-防御素(Av BDs)、Toll样受体(TLRs)、细胞因子(cytokines)等基因表达量。初探人工感染鸡源禽腺病毒血清4型(FAdV-4)对鹅的致病性及机体对该病毒形成的天然免疫反应机制。结果显示,感染该FAdV-4毒株后,鹅均没有明显病症和死亡发生。宿主产生特异性抗体,并且肝、心脏组织出现病理学变化,宿主排毒率和病毒载量呈上升趋势。感染早期(36 h和72 h),Av BD1、2、5、9、16,TLR2、3、7、15,IL-1β、2、6、8、18以及髓样分化因子(My D88)在肝中的基因表达量显著上调(P<0.05)或有上调趋势。证实,鸡源FAdV-4对鹅的致病性较弱,可能与实验动物品种、日龄差异或感染途径等条件有关。宿主可通过TLRs-My D88途径引起机体产生大量的免疫因子,参与机体抗病毒免疫反应。本试验结果为深入研究FAdV-4与宿主早期天然免疫间的相互作用提供了新的参考。

关键词：禽腺病毒血清4型禽β-防御素 Toll样受体细胞因子天然免疫反应

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新中国成立70周年兽医科学研究进展

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中国科学：生命科学 2019年第11期49卷 1441-1456页

作者：李慧昕刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本文从兽医学发展历史沿革,各时期国家对兽医事业的规划,国家对兽医科学研究的支持,兽医科研人员在基础研究,基础应用和应用研究方面的进展,取得的重大成果以及在党中央的领导下对动物疾病的综合防控效果等方面,对我国兽医事业取得的研... 详细信息

本文从兽医学发展历史沿革,各时期国家对兽医事业的规划,国家对兽医科学研究的支持,兽医科研人员在基础研究,基础应用和应用研究方面的进展,取得的重大成果以及在党中央的领导下对动物疾病的综合防控效果等方面,对我国兽医事业取得的研究进展进行简要总结和回顾,并对未来兽医工作进行了展望,以期对兽医领域从业人员提供借鉴和参考.

关键词：新中国成立70周年兽医科学研究进展

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表达山羊SLAM受体的重组腺病毒的构建及在增强PPRV感染羊源原代细胞中的应用

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1207-1213页

作者：陈合凤张帅王喜军王金良温志远葛金英陈伟业步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

由于目前用于小反刍兽疫病毒(PPRV)相关研究的羊源细胞均为原代细胞,其对PPRV的敏感性较差,而信号淋巴细胞激活分子(SLAM)作为PPRV的重要受体可以促进病毒的感染与复制。因此,为构建表达山羊SLAM(gSLAM)的重组腺病毒,为羊源原代细胞提供... 详细信息

由于目前用于小反刍兽疫病毒(PPRV)相关研究的羊源细胞均为原代细胞,其对PPRV的敏感性较差,而信号淋巴细胞激活分子(SLAM)作为PPRV的重要受体可以促进病毒的感染与复制。因此,为构建表达山羊SLAM(gSLAM)的重组腺病毒,为羊源原代细胞提供SLAM受体,本研究将gSLAM基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,转化至含有5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞中,获得重组腺病毒载体pAd-gSLAM,转染293A细胞,经PCR鉴定表明获得了重组腺病毒rAd-gSLAM。以MOI 3 rAd-gSLAM感染Vero细胞后,采用western blot检测SLAM的表达。结果显示,rAd-gSLAM能够感染Vero细胞并表达SLAM蛋白。将PPRV疫苗株rPPRV/GFP和中国流行株PPRV/CN/HLJ/13分别以MOI 0.1感染rAd-gSLAM预先感染后的Vero(Vero/rAd-gSLAM)细胞,24 h经荧光显微镜观察,并采用荧光定量PCR检测两株病毒在感染后不同时间点的拷贝数,绘制病毒的生长曲线。荧光显微镜观察可见,rPPRV/GFP感染的Vero/rAd-gSLAM细胞出现较大量绿色荧光且形成明显的细胞融合;PPRV/CN/HLJ/13感染的Vero/rAd-gSLAM细胞形成明显的细胞融合且出现红色荧光。病毒的生长曲线结果显示,rPPRV/GFP在Vero/rAdgSLAM细胞中的拷贝数与其在Vero和Vero/Ad对照细胞中的拷贝数在感染后各时间点差异却均不显著;PPRV/CN/HLJ/13的拷贝数在感染Vero/rAd-gSLAM细胞后24 h即达到峰值,且其在感染该细胞后72 h的拷贝数约为其感染Vero及Vero/Ad细胞在该时间点的48倍。将rAd-gSLAM(MOI 3)感染原代羊源睾丸(LT)细胞后,再以MOI 0.1分别感染rPPRV/GFP和PPRV/CN/HLJ/13,72 h后经荧光显微镜观察可见,前者感染的LT细胞出现绿色荧光,且有明显的细胞融合;后者感染的LT细胞出现明显的细胞融合和CPE。上述结果表明,本研究构建了表达gSLAM的重组腺病毒rAd-gSLAM,其感染Vero细胞系和原代LT细胞后均能够表达gSLAM,增强了PPRV对Vero细胞系和原代LT细胞的感染与复制。本研究为PPRV在羊源细胞中的生长、复制研究提供了重要的工具,同时为其感染与免疫机制的研究奠定了基础。

关键词：小反刍兽疫 SLAM 重组腺病毒 Vero 羊源细胞

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