检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2019年第3期35卷 549-556页

作者：尹航周末仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

疱疹病毒为双股线性DNA病毒,是引起人与动物疾病的一类重要病原,成熟的病毒粒子由核心、衣壳、间层及囊膜组成。近年来,对以单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)及伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)等为代表的α疱疹病毒在病毒... 详细信息

疱疹病毒为双股线性DNA病毒,是引起人与动物疾病的一类重要病原,成熟的病毒粒子由核心、衣壳、间层及囊膜组成。近年来,对以单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)及伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)等为代表的α疱疹病毒在病毒复制和增殖、毒力、神经系统侵染机制以及对机体免疫应答影响等方面的研究取得了显著进展,在病毒基因组编码的多种蛋白中,gE和gI蛋白在上述各方面均发挥关键作用。本文就gE和gI蛋白在α疱疹病毒中的多样化功能的最新研究成果进行了总结,并指出其未来研究趋势。

关键词：疱疹病毒 gE和gI蛋白功能

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抗菌肽Sublancin对蛋鸡免疫功能的影响研究

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 268-273页

作者：田丽娜王秀荣李广兴东北农业大学动物医学学院/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究抗菌肽Sublancin对蛋鸡免疫功能的调节作用,本研究将216只海兰褐壳蛋鸡随机分为对照组(饲喂基础饲粮,C组)、低剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+100 mg/kg Sublancin,L组)、中剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+200 mg/kg Sublancin,M组)和高... 详细信息

为研究抗菌肽Sublancin对蛋鸡免疫功能的调节作用,本研究将216只海兰褐壳蛋鸡随机分为对照组(饲喂基础饲粮,C组)、低剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+100 mg/kg Sublancin,L组)、中剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+200 mg/kg Sublancin,M组)和高剂量抗菌肽组(饲喂基础饲粮+300 mg/kg Sublancin,H组)进行抗菌肽调控蛋鸡免疫的实验。实验持续30 d,分别在饲喂Sublancin后第1 d、15 d和30 d用ELISA试剂盒检测每组鸡血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量;检测肝脏和脾脏指数;利用免疫印迹法检测每组鸡脾脏中干扰素γ(IFN-γ)表达;利用ELISA试剂盒检测每组鸡血清中IL-2、IL-4和IL-6含量。结果显示:与C组比较,L组、M组和H组鸡血清中IgA、IgG和IgM含量、肝脏和脾脏指数、脾脏中IFN-γ的表达、血清中IL-2、IL-4和IL-6的含量在饲喂Sublancin后第1 d均无显著变化(p>0.05),在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均显著升高(p<0.05);与L组比较,M组和H组中上述检测指标在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均显著升高(p<0.05);与M组比较,H组中上述检测指标在饲喂Sublancin后第15 d和第30 d均无显著变化(p>0.05)。实验表明饲粮中添加抗菌肽Sublancin可以显著增强蛋鸡免疫力,其添加浓度在100 mg/kg^200 mg/kg时,作用效果有剂量依赖性;但添加浓度在200 mg/kg^300 mg/kg时,作用效果与浓度无关。本研究为家禽养殖业中功能性饲料添加剂的开发及抗菌肽Sublancin在养殖业中的应用提供了新的参考依据。

关键词：抗菌肽 Sublancin 蛋鸡免疫功能

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NLRC5基因在SPF大白猪不同器官中的表达与分布

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黑龙江畜牧兽医 2020年第15期 23-27,32页

作者：王有祺刘英华马丽娜李昌文陈洪岩高彩霞于天飞齐齐哈尔大学生命科学与农林学院黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

为了研究NLRC5基因在SPF大白猪不同组织中的表达和分布,试验以稀释的标准重组质粒为模板绘制标准曲线,建立实时荧光定量PCR方法,检测SPF大白猪肺脏、颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、空肠、胃、小肠、直肠、肾脏、心脏、回肠、肝脏、... 详细信息

为了研究NLRC5基因在SPF大白猪不同组织中的表达和分布,试验以稀释的标准重组质粒为模板绘制标准曲线,建立实时荧光定量PCR方法,检测SPF大白猪肺脏、颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、空肠、胃、小肠、直肠、肾脏、心脏、回肠、肝脏、结肠、盲肠、扁桃体、肠系膜淋巴结等16种器官中NLRC5基因mRNA的表达差异和分布,并用Western-blot方法检测16种器官中NLRC5基因编码蛋白表达差异和分布。结果表明:NLRC5基因在SPF大白猪16种器官中均能表达,mRNA和蛋白表达水平大体一致,其中在淋巴结、脾脏和扁桃体等免疫器官中的表达量均较高,在胃和肠道等具有黏膜免疫功能的器官中表达量次之,在心脏和肝脏等非免疫器官中的表达量相对较低。说明试验获得了SPF大白猪不同器官中NLRC5基因的天然表达量,并且在免疫器官和具有黏膜器官中有较高的表达。

关键词： NLRC5基因 SPF 大白猪器官表达差异

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我国首次牛结节性皮肤病病毒的分离鉴定

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中国预防兽医学报 2020年第10期42卷 1058-1061页

作者：张敏敏孙亚杰刘文兴刘任强王喜军步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

牛结节性皮肤病(LSD)是由羊痘病毒属牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的牛的烈性传染病。2019年8月,我国首次在新疆伊犁地区发现疑似LSD疫情。本研究采集伊犁疫情临床症状典型病牛病变皮肤组织,接种羊睾丸(LT)细胞,对出现典型细胞病变的培... 详细信息

牛结节性皮肤病(LSD)是由羊痘病毒属牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的牛的烈性传染病。2019年8月,我国首次在新疆伊犁地区发现疑似LSD疫情。本研究采集伊犁疫情临床症状典型病牛病变皮肤组织,接种羊睾丸(LT)细胞,对出现典型细胞病变的培养物进行了系列鉴定。透射电镜观察到典型痘病毒形态的砖型粒子;山羊痘高免血清间接免疫荧光检测培养病变细胞显示阳性反应;LSDV基因组特异引物PCR检测结果为阳性;二代测序(De novo)全基因组分析显示与LSDV/Russia/Saratov/2017(MH646674.1)同源性最高(99.42%);系统进化分析显示与LSDV/Russia/Saratov/2017株相似,介于疫苗株和野毒株分支之间;病毒生长曲线测定显示感染LT细胞的生长特性与已报道的山羊痘病毒相似。上述结果表明,本实验分离得到引起我国首次LSD疫情的病毒株,命名为LSDV/China/Xinjiang/2019株(Xinjiang/2019),本研究为牛结节性皮肤病的防治奠定了基础。

关键词：牛结节性皮肤病病毒分离鉴定进化分析

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基于ASFV转录报告系统的高通量筛选将臭椿酮鉴定为一种广谱抗病毒化合物

基于ASFV转录报告系统的高通量筛选将臭椿酮鉴定为一种广谱抗病毒...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：张宇航张振江张帆张继文焦俊侯敏钱年超赵东明郑晓峰谭旭湖南农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室清华大学医学院传染病研究中心清华大学药学院北京市结构生物学高精尖创新中心清华大学-北京大学生命科学联合中心合肥综合性国家科学中心大健康研究院

非洲猪瘟(ASF)是一种急性、高度传染性和致命的猪病毒性疾病,正在严重危害全球养猪业。但是,目前为止没有可用于ASF防控的权威疫苗和抗病毒药物。非洲猪瘟病毒(ASFV)是ASF的病原体,在ASFV蛋白中,p72是病毒体中最丰富的成分,不仅占病毒...

非洲猪瘟(ASF)是一种急性、高度传染性和致命的猪病毒性疾病,正在严重危害全球养猪业。但是,目前为止没有可用于ASF防控的权威疫苗和抗病毒药物。非洲猪瘟病毒(ASFV)是ASF的病原体,在ASFV蛋白中,p72是病毒体中最丰富的成分,不仅占病毒颗粒总质量的32%,还是病毒组装过程中的关键衣壳蛋白,因此是抗ASFV药物设计的潜在靶标。本研究中,我们构建了一个由p72启动子驱动的荧光素酶报告系统(p72-Fluc),该系统由共转染的ASFV RNA聚合酶复合物驱动转录。使用该系统,我们筛选了3000多种化合物并获得了三种有效的抗ASFV化合物。我们进一步评估了三种化合物抗ASFV的效果,并证明在三个候选物中,臭椿酮(AIL)在纳摩尔浓度下能有效抑制p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的复制(IC50=15 nmol/L)。此外,采用中国流行毒株ASFV-HLJ-2018毒株进一步评估AIL对野生毒株ASFV的抗病毒作用,血细胞吸附试验和蛋白质印迹试验结果表明,AIL可以剂量依赖性方式有效抑制该野生型ASFV毒株的复制。据报道,AIL会抑制HSP90与其辅助伴侣蛋白p23之间的相互作用,并导致HSP90的客户蛋白错误折叠或降解。我们在体外实验中,通过过表达和敲低HSP90的辅助伴侣蛋白p23,发现过表达p23能显著上调p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的感染比例,而敲低p23会下调p72-Fluc系统的荧光强度和ASFV的复制,表明AIL的抗病毒作用与其抑制HSP90-p23辅助伴侣蛋白有关,p23促进ASFV的复制并缓解AIL的抑制作用。近百种病毒蛋白已被报道为HSP90伴侣循环的客户蛋白,由于p23既是HSP90伴侣循环的重要元件也是AIL的靶标,我们推测AIL有可能成为一种广谱抗病毒药物,并评估了其对寨卡病毒(Zika)和乙型肝炎病毒(HBV)的抗病毒能力。结果表明,AIL对寨卡病毒和乙型肝炎病毒具有显著的抗病毒活性,进一步证明AIL是一种潜在的广谱抗病毒剂。据我们所知,这是第一份关于AIL广谱抗病毒作用的报告。未来的研究可能探索AIL作为抗病毒药物的精确分子机制和临床效果。

关键词：

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雪山草鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定

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中国动物检疫 2021年第5期38卷 119-125页

作者：姜楠王雨龙张文英牛鑫鑫刘长军高玉龙高立崔红玉李凯潘青张艳萍刘爱晶王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所世界动物卫生组织传染性法氏囊病参考实验室黑龙江哈尔滨150069 扬州大学江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进行了基因测序及序列分析。结果显示,引起该鸡群发病的病原是IBDV新型变异株,属于A2dB1基因型;这3个毒株的VP2高变区编码蛋白上含有IBDV变异株的特征性氨基酸,也具有IBDV新型变异株的独特氨基酸。结果提示,我国地方品种鸡群中也有IBDV新型变异株的流行,现有的部分商品化IBDV疫苗已不能有效预防IBDV新型变异株的流行。

关键词：传染性法氏囊病病毒新型变异株 A2dB1基因型雪山草鸡

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犬瘟热病毒N和H蛋白拮抗IFN-β信号通路的研究

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特产研究 2021年第2期43卷 1-7页

作者：龚成燕李连峰陈杰胡博赵建军中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 西北农林科技大学陕西杨凌712100 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 ... 详细信息

为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 h、12 h和24 h后通过双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定IFN-β启动子的活性。将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3 N和H基因克隆到pCI真核表达载体。重组表达质粒分别转染HEK293T细胞,应用Western blot检测蛋白能否正确表达。将N和H蛋白重组表达质粒连同pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒共转染至HEK293T细胞后,经Poly(I:C)刺激细胞,利用双荧光素酶报告系统检测系统测定IFN-β启动子活性。结果显示3种不同毒力的CDV在感染MDCK细胞后,只有CDV 3疫苗株感染后能观察到IFN-β启动子短暂激活。Western blot实验证实,3种毒株N和H蛋白在HEK293T细胞中均能正确表达。双荧光素酶报告系统对IFN-β启动子检测活性结果显示,Poly(I:C)成功激活了IFN-β信号通路,而这种激活作用在表达CDV不同毒株的N或H蛋白时均受到显著抑制(P <0.01),但不同毒株N或H蛋白对IFN-β信号通路的调控与CDV毒力无关。本研究证实了CDV野毒株和疫苗株N、H蛋白可抑制宿主IFN-β信号通路,为进一步研究CDV与宿主分子互作奠定基础。

关键词：犬瘟热病毒 N蛋白 H蛋白 IFN-β 双荧光素酶报告系统

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K亚群禽白血病病毒细胞受体的鉴定

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中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 802-808页

作者：邢立晓俞燕于蒙蒙常方方包媛玲王素艳高立祁小乐王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069 江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125

禽白血病病毒(ALV)进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合。K亚群ALV(ALV-K)是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群。为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实... 详细信息

禽白血病病毒(ALV)进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合。K亚群ALV(ALV-K)是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群。为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实验室前期拯救的重组病毒RCAS-A-GFP和RCAS-K-GFP进行病毒受体的交叉干扰试验,结果显示A亚群ALV(ALV-A)gp85蛋白能够抑制ALV-K的感染,同样ALV-Kgp85蛋白也能够抑制ALV-A的感染,存在受体交叉干扰现象,因而推测二者可能共用细胞受体。已有研究表明Tva是ALV-A的细胞受体,本研究利用Co-IP和Pull-down试验检测了ALV-Kgp85与Tva的互作,结果显示ALV-Kgp85蛋白能与可溶性的Tva(sTva)相互作用。进一步的流式细胞术结果显示ALV-Kgp85能够高效结合Tva,结合率在90%以上。为进一步验证Tva是否能介导ALV-K进入细胞,利用ALV的非易感细胞HEK293T进行了Tva受体重建试验,结果显示RCAS-K-GFP能够进入表达Tva的293T细胞并复制产生较强的绿色荧光。以上结果充分表明Tva也是ALV-K的细胞受体,能够介导ALV-K进入宿主细胞,启动其感染。该研究为阐明ALV-K侵入宿主细胞机制及抗病毒靶点筛选奠定了基础。

关键词： K亚群禽白血病病毒细胞受体 Tva蛋白结合进入

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中国预防兽医学报 2020年第5期42卷 500-505页

作者：赵雅芝潘巧王显兵郝文君刘桐王秀梅辛九庆吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探究宿主TRIM9基因通过调控牛支原体(Mycoplasma bovis,***)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β的相关机制,本研究通过*** LAMPs刺激EBL细胞后,利用荧光定量PCR(qPCR)方法检测细胞中TRIM9和IL-1β基因... 详细信息

为探究宿主TRIM9基因通过调控牛支原体(Mycoplasma bovis,***)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β的相关机制,本研究通过*** LAMPs刺激EBL细胞后,利用荧光定量PCR(qPCR)方法检测细胞中TRIM9和IL-1β基因的转录水平,结果显示TRIM9基因转录水平上调2.9倍,IL-1β基因转录水平上调2.5倍。构建pEGFP-C1-TRIM9荧光报告质粒并转染EBL细胞,利用共聚焦显微镜观察TRIM9在EBL细胞中的定位,结果显示TRIM9蛋白能够瞬时表达于EBL细胞浆。通过将构建的pCMV-C-HA-TRIM9重组质粒和si-TRIM9干扰质粒共转染EBL细胞,经2μg/mL *** LAMPs刺激12 h后,采用qPCR和ELISA检测IL-1β的转录水平和表达情况,结果显示,与*** LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,过表达TRIM9组中IL-1β在转录水平和蛋白表达水平均无明显变化,而敲低TRIM9组中IL-1β转录水平和蛋白表达水平均显著上调(分别上调33倍和30倍)。同时利用western blot检测p65蛋白磷酸化水平,分析NF-κB信号通路激活情况,结果显示,与*** LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,TRIM9蛋白过表达组NF-κB信号通路激活水平无明显变化,而敲低TRIM9组p65磷酸化水平提高,促进NF-κB信号通路激活。综上结果表明敲低TRIM9基因能够促进*** LAMPs通过NF-κB信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β。本研究为进一步明确宿主蛋白参与抗牛支原体天然免疫应答的机制奠定基础。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白 TRIM9 NF-κB信号通路 IL-1β

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鸡gga-miR-7b靶基因VDAC1-3’UTR双荧光素酶报告基因质粒的构建

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基因组学与应用生物学 2020年第2期39卷 533-538页

作者：肖春婷廉传江易诚陈洪岩东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

本研究以鸡gga-miR-7b作为研究对象,为了明确与肿瘤形成相关的关键基因VDAC1(Voltage-dependent anion channel 1)是否为gga-miR-7b的靶基因,深入研究gga-miR-7b对VDAC1基因的调控作用,本研究运用TargetScan和miRBD生物学软件预测了gga-miR-7b与VDAC1 m RNA的3’端非编码区(3’UTR)存在种子结合位点(GTCTTCC),并使用PCR克隆以及同源重组突变的方法构建VDAC1-3’UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因重组质粒,经SacⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定及测序结果显示,片段大小符合且序列正确;成功构建了VDAC1-3’UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因重组质粒并命名为pmirGLOVDAC1-wt3’UTR和pmirGLO-VDAC1-mut3’UTR。本研究结果进一步为gga-miR-7b候选靶基因VDAC1的鉴定以及功能研究提供理论依据。

关键词：马立克氏病 gga-miR-7b VDAC1基因 pmirGLO-VDAC1-wt-3’UTR pmirGLO-VDAC1-mut-3’UTR

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