检索结果-内蒙古大学图书馆

鸡gga-miR-7b靶基因VDAC1-3’UTR双荧光素酶报告基因质粒的构建

基因组学与应用生物学 2020年第2期39卷 533-538页

作者：肖春婷廉传江易诚陈洪岩东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

本研究以鸡gga-miR-7b作为研究对象,为了明确与肿瘤形成相关的关键基因VDAC1(Voltage-dependent anion channel 1)是否为gga-miR-7b的靶基因,深入研究gga-miR-7b对VDAC1基因的调控作用,本研究运用TargetScan和miRBD生物学软件预测了gga-miR-7b与VDAC1 m RNA的3’端非编码区(3’UTR)存在种子结合位点(GTCTTCC),并使用PCR克隆以及同源重组突变的方法构建VDAC1-3’UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因重组质粒,经SacⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定及测序结果显示,片段大小符合且序列正确;成功构建了VDAC1-3’UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因重组质粒并命名为pmirGLOVDAC1-wt3’UTR和pmirGLO-VDAC1-mut3’UTR。本研究结果进一步为gga-miR-7b候选靶基因VDAC1的鉴定以及功能研究提供理论依据。

关键词：马立克氏病 gga-miR-7b VDAC1基因 pmirGLO-VDAC1-wt-3’UTR pmirGLO-VDAC1-mut-3’UTR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江某规模化牛场副结核分枝杆菌的分离与鉴定

引用

中国预防兽医学报 2020年第11期42卷 1177-1180页

作者：蔡珠明党光辉臧鑫鑫邵明珠唐阳阳崔子寅宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

为检测黑龙江某规模化牛场副结核病的感染情况,本研究采集了35头副结核分枝杆菌(MAP)抗体阳性牛(有腹泻表现)的直肠刮取物,采用IS900-PCR鉴定样品中的MAP,将该PCR扩增为阳性的样品通过细菌分离培养、菌落形态学观察、多重PCR鉴定MAP的亚... 详细信息

为检测黑龙江某规模化牛场副结核病的感染情况,本研究采集了35头副结核分枝杆菌(MAP)抗体阳性牛(有腹泻表现)的直肠刮取物,采用IS900-PCR鉴定样品中的MAP,将该PCR扩增为阳性的样品通过细菌分离培养、菌落形态学观察、多重PCR鉴定MAP的亚型,通过IS1311基因序列同源性比对并对分离菌进行遗传进化分析,同时对其进行多态性分型鉴定,进一步确定分离株的亚型。结果显示,35份直肠刮取物样本中,31份经IS900-PCR扩增阳性,分离培养得到的3株分离菌菌落形态与分枝杆菌相似,多重PCR的鉴定谱型均与MAP K-10参考株一致,其在遗传进化上与多株MAP具有高度的亲缘性,经IS1311多态性分型鉴定3株分离菌均为牛型MAP,分别命名为MAP-HLJB160、MAP-HLJB175、MAP-HLJB177。本研究为黑龙江地区副结核病的预防和流行病学调查提供数据支撑。

关键词：牛副结核分枝杆菌 IS1311 亚型鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪德尔塔冠状病毒BJ株的分离鉴定与致病性分析

引用

中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1287-1291页

作者：刘秋歌王洪峰范前进冯力陈建飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司黑龙江哈尔滨150069

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新出现的猪冠状病毒。本研究将北京某猪场PDCoV阳性仔猪腹泻样品无菌处理后接种猪睾丸(ST)细胞并连续传代培养,通过电镜、间接免疫荧光和基因序列测定对病毒培养物进行鉴定。结果表明分离到一株PDCoV,并... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新出现的猪冠状病毒。本研究将北京某猪场PDCoV阳性仔猪腹泻样品无菌处理后接种猪睾丸(ST)细胞并连续传代培养,通过电镜、间接免疫荧光和基因序列测定对病毒培养物进行鉴定。结果表明分离到一株PDCoV,并将其命名为BJ株。基于全基因组序列的系统发育树分析结果表明BJ株与我国PDCoV参考株的亲源关系较近。利用105 TCID50/mL的病毒液2 mL口服接种3日龄仔猪并观察临床症状,结果显示BJ株能够引起3日龄仔猪发病,出现典型的腹泻症状。此外,病理组织学结果表明感染仔猪的小肠绒毛损伤,免疫组化结果表明在感染仔猪的小肠组织中检测到PDCoV抗原。本研究证实了PDCoV BJ株具有致病力,丰富了与PDCoV相关的流行病学、致病性和分子进化的信息。

关键词：猪德尔塔冠状病毒分离鉴定致病性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用杆状病毒表达系统表达猪IFN-L3及其抗PEDV活性的研究

引用

中国兽医科学 2019年第10期49卷 1269-1276页

作者：郭珊珊陈伟业薛美尹灵丹罗毅冯力刘平黄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞上表达重组猪干扰素L3(rPoIFN-L3)进行抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的研究。首先通过间接免疫荧光和Western-blot验证rPoIFN-L3表达,并用Protein A亲和层析柱进行蛋白纯化;采用表达绿色荧光蛋白... 详细信息

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在昆虫细胞上表达重组猪干扰素L3(rPoIFN-L3)进行抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的研究。首先通过间接免疫荧光和Western-blot验证rPoIFN-L3表达,并用Protein A亲和层析柱进行蛋白纯化;采用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(VSV*GFP)检测rPoIFN-L3的抗病毒活性,含rPoIFN-L3的细胞上清的抗病毒活性为1×10^3AU/mL,纯化的rPoIFN-L3抗病毒活性为5×10^5AU/mg。进一步对纯化的rPoIFN-L3蛋白在IPEC-J2细胞上进行抗PEDV活性探究,结果显示,rPoIFN-L3可呈剂量依赖性抑制PEDV复制,并且上调相关干扰素-刺激基因(ISGs)的表达。由此证明,本研究表达的rPoIFN-L3具有抗病毒活性,并可有效抑制PEDV在IPEC-J2上的复制,对预防和治疗PEDV感染有重要意义。

关键词：猪干扰素L3 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统昆虫细胞猪流行性腹泻病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

γ干扰素通过上调I型干扰素表达协同抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制

引用

中国兽医科学 2019年第6期49卷 723-729页

作者：单玲玲符芳薛美李亮刘平黄中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为探索干扰素(IFN)在猪消化道冠状病毒的预防和治疗中的作用,通过反转录定量PCR(reverse transcription-q PCR,RT-qPCR)和间接免疫荧光试验,分别检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)拷贝数和TGEV核衣壳蛋白的表达,发现猪源IFN-γ能够显著抑制T... 详细信息

为探索干扰素(IFN)在猪消化道冠状病毒的预防和治疗中的作用,通过反转录定量PCR(reverse transcription-q PCR,RT-qPCR)和间接免疫荧光试验,分别检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)拷贝数和TGEV核衣壳蛋白的表达,发现猪源IFN-γ能够显著抑制TGEV在猪睾丸细胞中的复制,并且相同质量浓度的IFN-γ比IFN-α能更有效地抑制TGEV的复制,与猪源IFN-α有明显的协同抑制作用。对其机制进一步探索,发现IFN-γ能够不依赖于I型干扰素发挥直接抗病毒活性,但是能够通过诱导I型干扰素表达水平的上调,增加其抗病毒活性。结果表明,IFN-γ通过诱导I型干扰素的表达与I型干扰素协同抑制TGEV的复制,对预防和治疗TGEV感染有重要意义。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 γ干扰素 α干扰素

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

检测猪鼻支原体抗原的ELISA方法的建立及其应用

引用

中国兽医科学 2019年第7期49卷 828-833页

作者：朱红振危艳武黄立平刘丹夏德利吴洪丽边海桥冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为了建立检测猪鼻支原体(Mhr)抗原的ELISA方法,本研究采用杂交瘤技术制备了抗Mhr菌体的特异性单克隆抗体(MAb),经亲和层析纯化后标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了一种能够检测Mhr抗原的ELISA方法。ELISA反应条件优化结果为:HRP标记的MAb... 详细信息

为了建立检测猪鼻支原体(Mhr)抗原的ELISA方法,本研究采用杂交瘤技术制备了抗Mhr菌体的特异性单克隆抗体(MAb),经亲和层析纯化后标记辣根过氧化物酶(HRP),建立了一种能够检测Mhr抗原的ELISA方法。ELISA反应条件优化结果为:HRP标记的MAb最适稀释度为1∶1000,该方法的批内和批间变异系数均小于6%,经超声波处理Mhr抗原效果更佳,最低抗原检出量为25ng。用该方法对已知猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)抗原检测无交叉反应。本研究建立的检测Mhr抗原的ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为Mhr体外培养物抗原定量检测提供可靠的技术手段。

关键词：猪鼻支原体单克隆抗体抗原检测 ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒3’-UTR碱基缺失对病毒复制影响的初步研究

引用

中国预防兽医学报 2019年第8期41卷 783-788页

作者：熊俊垚赵款于芳杨勇博田志军蔡雪辉安同庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)3’-非编码区(UTR)在病毒复制过程中具有重要作用,本研究经序列比对发现,与经典PRRSV相比,高致病性PRRSV(HP-PRRSV)3’-UTR中第17位碱基G(鸟嘌呤)发生缺失。为进一步探究3’-UTR中该碱基缺失对3’-UTR二... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)3’-非编码区(UTR)在病毒复制过程中具有重要作用,本研究经序列比对发现,与经典PRRSV相比,高致病性PRRSV(HP-PRRSV)3’-UTR中第17位碱基G(鸟嘌呤)发生缺失。为进一步探究3’-UTR中该碱基缺失对3’-UTR二级结构和PRRSV复制效率的影响,本研究在HP-PRRSV HuN 4感染性克隆株的基础上,将缺失碱基补平,得到突变病毒HuN 4-3’-UTR-(17+G)。复制动力学结果显示突变病毒HuN 4-3’-UTR-(17+G)在48 h和96 h病毒滴度均较亲本病毒HuN 4株显著降低(p<0.05),表明3’-UTR第17位碱基G的缺失增强了HP-PRRSV的复制能力;同时第17位碱基对应的茎环区域的缺失不影响病毒拯救,其还可以作为标记疫苗的分子标签。本研究结果为进一步探究PRRSV复制的分子机制奠定了基础。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 3’-UTR 复制缺失

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪流行性腹泻病毒IgA抗体间接ELISA方法的建立

引用

中国预防兽医学报 2019年第9期41卷 918-923页

作者：刘烨张家林王潇博石达时洪艳陈建飞张鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清特异性IgA抗体的间接ELISA方法,本研究利用融合PCR的方法,将PEDV G2型LNct2a株S蛋白的S1基因片段与人源IgG分子的Fc基因片段融合,克隆于真核表达质粒pAAV-IRES-hr GFP中,构建真核表达质粒pAAV-LNCT... 详细信息

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清特异性IgA抗体的间接ELISA方法,本研究利用融合PCR的方法,将PEDV G2型LNct2a株S蛋白的S1基因片段与人源IgG分子的Fc基因片段融合,克隆于真核表达质粒pAAV-IRES-hr GFP中,构建真核表达质粒pAAV-LNCT2-S1-Fc并转染293T细胞,表达并纯化了S1蛋白。以纯化的S1蛋白作为包被抗原,以羊抗猪IgA-HRP为二抗,通过优化反应条件,建立了检测PEDV G2型特异性IgA抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行了特异性、敏感性及重复性试验。特异性试验结果显示该方法对猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪德尔塔冠状病毒和圆环病毒的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示该方法能够检测出400倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性变异系数均小于10%。利用该间接ELISA方法和间接免疫荧光方法(IFA)同时对临床样品检测,结果显示二者总符合率为98.6%。本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,能够用于检测及评价血清中PEDV特异性IgA抗体的水平,为PEDV流行情况及免疫效果评价提供了有效的手段。

关键词： PEDV 间接ELISA S1蛋白 IgA抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用CRISPR/Cas9技术构建OAS2敲除的PK-15细胞系及敲除OAS2对CSFV复制的影响

引用

中国预防兽医学报 2019年第11期41卷 1094-1098,1105页

作者：张越秀张华伟李连峰仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为研究猪源2’-5’寡腺苷酸合成酶2(OAS2)对CSFV复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除OAS2的PK-15细胞系(PK-OAS2-KO)。在构建PK-OAS2-KO细胞系时,设计2条分别靶向OAS2基因第1和第2外显子的特异性sg RNAs,将sg RNA插入LentiCRISPRv2载体获得重组质粒plentiCRISPRv2-sgRNA;将重组质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装获得携带sg RNA的慢病毒后以MOI 1转导PK-15细胞,通过嘌呤霉素药物筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,经基因测序和western blot鉴定OAS2敲除效果。利用MOI 0.01r CSFV-Rluc株(报告病毒)或CSFV Shimen株分别感染PK15细胞获得的PK-OAS2-KO细胞系,经荧光素酶活性检测和q RT-PCR证实敲除OAS2基因能够促进CSFV复制。综上,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了OAS2基因敲除的PK-15细胞系,并发现OAS2具有抑制CSFV复制的作用,本研究为进一步研究OAS2抗CSFV作用的分子机制提供了依据。

关键词： CRISPR/Cas9 2’-5’寡腺苷酸合成酶2 PK-15 猪瘟病毒

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

非洲猪瘟诊断技术发展现状与需求分析

引用

中国农业科技导报 2019年第9期21卷 1-11页

作者：张丽罗玉子王涛孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)引起猪的一种出血性、高度接触性传染病,其临床症状与猪瘟极其相似。该病于2018年8月在我国辽宁省沈阳市首次发生,随后在31个省份爆发,造成直接经济损失达数百亿元... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)引起猪的一种出血性、高度接触性传染病,其临床症状与猪瘟极其相似。该病于2018年8月在我国辽宁省沈阳市首次发生,随后在31个省份爆发,造成直接经济损失达数百亿元。由于目前尚无有效的商品化疫苗,快速、灵敏、简便的诊断技术对于防控和根除该病至关重要。总结了目前应用的ASFV检测技术,比较分析了他们的性能,同时探讨了ASFV诊断技术未来的发展方向及趋势,旨在为我国ASF检测及综合防控提供技术参考。

关键词：非洲猪瘟病毒诊断技术需求分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：