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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：孟松树张绍杰郭鑫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本研究探讨了CpG DNA佐剂对ILTV基因免疫的影响。将ILTV基因疫苗与细菌DNA联合免疫SPF鸡,以MTT法检测了免疫后鸡胸腺、法氏囊淋巴细胞经ConA、PMA刺激后的增殖反应活性,以间接ELISA法测定血清抗体水平,并观测了攻毒后的发病、死亡及保... 详细信息

本研究探讨了CpG DNA佐剂对ILTV基因免疫的影响。将ILTV基因疫苗与细菌DNA联合免疫SPF鸡,以MTT法检测了免疫后鸡胸腺、法氏囊淋巴细胞经ConA、PMA刺激后的增殖反应活性,以间接ELISA法测定血清抗体水平,并观测了攻毒后的发病、死亡及保护情况。结果显示,与不加CpG DNA的基因免疫组相比,CpG DNA增强了胸腺、法氏囊淋巴细胞的增殖活性,血清抗

关键词：传染性喉气管炎病毒基因免疫 CpG DNA

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传染性喉气管炎病毒gB、gC、gD基因免疫的研究

传染性喉气管炎病毒gB、gC、gD基因免疫的研究

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

本研究探讨了ILTV基因免疫所诱导的细胞与体液免疫应答的动态变化。以表达ILTV王岗株gB、gC、gD的真核表达质粒单独或联合免疫SPF鸡,以MTT法检测鸡胸腺、法氏囊淋巴细胞经丝分裂原ConA、PMA刺激后的增殖反应活性,以间接ELISA法检测血清... 详细信息

本研究探讨了ILTV基因免疫所诱导的细胞与体液免疫应答的动态变化。以表达ILTV王岗株gB、gC、gD的真核表达质粒单独或联合免疫SPF鸡,以MTT法检测鸡胸腺、法氏囊淋巴细胞经丝分裂原ConA、PMA刺激后的增殖反应活性,以间接ELISA法检测血清抗体水平。结果表明,ILTV基因免疫诱导机体产生了较强的淋巴细胞增殖反应,血清抗体在免疫后第2周发生阳转,而对照组无相应变化。这是ILTV基因免疫研究的首次报道。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gB、gC、gD 基因免疫

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马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析

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病毒学报 2000年第4期16卷 361-364页

作者：杨威张宝山刘永刚刘胜旺孔宪刚曹殿军刘相冬卢景良刘宝全刘建华东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学公共卫生学院黑龙江哈尔滨150001

以马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒疫苗株 (DLA)病毒基因组RNA为材料 ,用RT PCR方法扩增出EIAVgag基因 ,经平端连接将其克隆到质粒载体 pUC19中。由于疫苗不是克隆株 ,因此通过 5次单独克隆与测序 ,推导出EIAV DLA gag基因的优势... 详细信息

以马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒疫苗株 (DLA)病毒基因组RNA为材料 ,用RT PCR方法扩增出EIAVgag基因 ,经平端连接将其克隆到质粒载体 pUC19中。由于疫苗不是克隆株 ,因此通过 5次单独克隆与测序 ,推导出EIAV DLA gag基因的优势序列。gag基因全长 145 8个碱基 ,编码一 486个氨基酸残基的前体蛋白。与美国EIAVWyoming 136 9株比较 ,核苷酸同源性为 80 % ,氨基酸同源性为 84 47%。其中 ,衣壳蛋白P2 6的主要同源区 (MHR)、核衣壳蛋白P11的两个CCHC型锌指结构及酸性蛋白P9的YXXL基元为高度保守的结构。为进一步研究马传染性贫血病毒弱毒疫苗的致弱机理提供了理论依据。

关键词：马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒核苷酸序列

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伪狂犬病病毒Bartha-K61株TK基因的分离鉴定

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中国兽医科技 2000年第3期30卷 6-7页

作者：仇华吉周彦君孔令达张绍杰钱平王柳童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018

提取伪狂犬病病毒 (PRV )Bartha K61株基因组DNA ,用限制性内切酶KpnⅠ充分消化 ,回收 5 .9× 10 3 b片段(J片段 ) ,将其克隆于质粒 pUC119KpnⅠ位点上 ,获得pBKJ。用一对针对PRVTK基因的特异性引物对重组质粒进行PCR鉴定 ,证明其... 详细信息

提取伪狂犬病病毒 (PRV )Bartha K61株基因组DNA ,用限制性内切酶KpnⅠ充分消化 ,回收 5 .9× 10 3 b片段(J片段 ) ,将其克隆于质粒 pUC119KpnⅠ位点上 ,获得pBKJ。用一对针对PRVTK基因的特异性引物对重组质粒进行PCR鉴定 ,证明其中含有PRVTK基因。然后用KpnⅠ、PstⅠ和BamHⅠ等限制性内切酶对其进行酶切分析 ,确定了克隆片段的物理图谱。进一步研究证实TK基因位于其中的KpnⅠ BamHⅠ或KpnⅠ PstⅠ片段中。然后亚克隆此KpnⅠ PstⅠ片段 ,并进行了序列测定。

关键词：伪狂犬病病毒 TK基因病毒活载体分离鉴定

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鸡贫血病毒荷兰弱毒株基因序列比较研究

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中国预防兽医学报 2000年第2期22卷 116-119页

作者：辛九庆宋秀龙周方红杨雨辉于健陈奖励中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所哈尔滨150070

用CA5、CA6和CA7、CA8两对引物对鸡贫血病毒荷兰弱毒株进行PCR扩增。将扩增产物 1 .5kb和 0 .8kb的DNA片段分别克隆到pUC1 1 9、pBluescript(SK +)载体质粒中 ,并进行核苷酸序列分析。通过与 2 6P4毒株进行核苷酸序列比较发现二者有 32... 详细信息

用CA5、CA6和CA7、CA8两对引物对鸡贫血病毒荷兰弱毒株进行PCR扩增。将扩增产物 1 .5kb和 0 .8kb的DNA片段分别克隆到pUC1 1 9、pBluescript(SK +)载体质粒中 ,并进行核苷酸序列分析。通过与 2 6P4毒株进行核苷酸序列比较发现二者有 32个核苷酸的差异。荷兰和 2 6P4两毒株间VP1蛋白质同源率为 97% ,没有发生特异性变化 ;VP3蛋白质同源率为 95 % ,在 1～ 30个氨基酸之间发生了特异性变化 ,我们推测这些变化可能是 2 6P4致弱的主要原因。

关键词：鸡贫血病毒荷兰弱毒株基因序列分析

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猪不同直径卵泡中卵母细胞体外培养的成熟潜力

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中国兽医学报 2000年第2期20卷 183-187页

作者：韩毅冰施维民秦鹏春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省家畜繁育指导站黑龙江哈尔滨150000 东北农业大学生物工程系黑龙江哈尔滨150030

比较研究了猪卵巢表面直径 0 .5～ 1 mm、1～ 2 mm、2～ 6mm、>6mm卵泡中卵母细胞所处的生发泡阶段。结果表明 ,0 .5～ 1 mm卵泡中卵母细胞主要处于 GV- 期和 GV- 期 2个阶段 ,比例分别为 67.2 %和2 0 .6%;而 1～ 2 mm和 2～ 6mm直... 详细信息

比较研究了猪卵巢表面直径 0 .5～ 1 mm、1～ 2 mm、2～ 6mm、>6mm卵泡中卵母细胞所处的生发泡阶段。结果表明 ,0 .5～ 1 mm卵泡中卵母细胞主要处于 GV- 期和 GV- 期 2个阶段 ,比例分别为 67.2 %和2 0 .6%;而 1～ 2 mm和 2～ 6mm直径卵泡中 ,卵母细胞大部分则处于 GV- 期 ,比例分别为 91 .9%和89.6%;>6mm直径卵泡中 ,卵母细胞逐渐发生老化 ,GV- 期比例仅为 53 .2 %,一部分处于 GV- 期和GVBD期。体外培养试验表明 ,1～ 2 mm卵泡中卵母细胞的体外成熟率比较低 ,其中一部分卵母细胞不能发生 GVBD( 2 5.1 %) ,另有一部分卵母细胞 ( 3 9.8%)达到第 1次减数分裂中期后 ,不能继续向前发育。培养 0～ 2 0 h时 ,添加 1 mmol/ L dbc AMP,能够显著抑制 1～ 2 mm和 2～ 6mm直径卵泡中卵母细胞发生 GVBD。培养 2 0 h后 ,去除 dbc AMP,显著增加了培养到 4 4h阶段的 M- 期比率。 dbc AMP主要是降低了培养 4 4h阶段 GV期阻滞的比率 ,而对 M- 期阻滞的比例没有影响。因此 ,dbc

关键词：卵泡卵母细胞减数分裂体外成熟 dbcAMP 猪

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表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

表达禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会

作者：贾永清乔传玲张建林于康震刘宝全中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学动物医学院

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分... 详细信息

将AIV广东分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)HA基因正向克隆于pSY538的EcoR Ⅰ位点,将LacZ报告基因插入Sma Ⅰ位点,然后切取含外源基因和报告基因的Not Ⅰ片段克隆于pSY681的Not Ⅰ位点,构建AIV HA基因重组禽痘病毒转移载体,经酶切分析和PCR鉴定后,利用脂质体转染试剂盒在鸡胚成纤维细胞上与F-017禽痘病毒弱毒疫苗株进行共转染。经重组病毒筛选与纯化,获得遗传性状稳定的AIV HA基因重组禽痘病毒。

关键词：禽流感 HA基因重组禽痘病毒

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鸡贫血病病毒套式PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 220-223页

作者：宋秀龙陈奖励辛九庆周方红杨雨辉章金刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国人民解放军军需大学动医系传染病室长春130062

鸡贫血病病毒不仅引起鸡的传染性贫血 ,而且也是引起鸡免疫抑制病的主要病原。本研究首次在国内建立了鸡贫血病病毒的套式PCR检测方法。试验证明此方法具有高度的特异性和敏感性 ,以鸡马立克氏病毒、鸡网状内皮组织增生病毒、鸡传染性... 详细信息

鸡贫血病病毒不仅引起鸡的传染性贫血 ,而且也是引起鸡免疫抑制病的主要病原。本研究首次在国内建立了鸡贫血病病毒的套式PCR检测方法。试验证明此方法具有高度的特异性和敏感性 ,以鸡马立克氏病毒、鸡网状内皮组织增生病毒、鸡传染性法氏囊病毒、正常MDCC_MSB1细胞DNA作为模板扩增时均未出现可见带 ,在检测鸡的各种组织病料时均未出现假阳性结果 ,该法比一次性PCR的敏感性高约 1 0 0 0倍 ,能检测到约一个拷贝的鸡贫血病病毒DNA ,而一次性PCR只能检测到3.6× 1 0 3 个拷贝。此方法已成功地应用于临床试验。对于鸡贫血病毒的许多鸡胚分离物和细胞分离物 ,一次性PCR不能扩增出可见电泳条带 ,而套式PCR都能扩增出特异的DNA片段 ,从而说明 ,套式PCR的敏感性大大高于一次性PCR 。

关键词：鸡套式PCR 贫血病病毒检测方法敏感性特异性

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传染性喉气管炎病毒gB、gC、gD基因免疫的研究

传染性喉气管炎病毒gB、gC、gD基因免疫的研究

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十次学术研讨会

作者：孟松树张绍杰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

该研究探讨了ILTV基因免疫所诱导的细胞与体液免疫应答的动态变化。以表达ILTV王岗株gB、gC、gD的真核表达质粒单独或联合免疫SPF鸡，以MTT法检测鸡胸、法氏囊淋巴细胞经丝分裂原ConA、PMA刺激后的增殖反应活性，以间接ELISA法检测血清... 详细信息

该研究探讨了ILTV基因免疫所诱导的细胞与体液免疫应答的动态变化。以表达ILTV王岗株gB、gC、gD的真核表达质粒单独或联合免疫SPF鸡，以MTT法检测鸡胸、法氏囊淋巴细胞经丝分裂原ConA、PMA刺激后的增殖反应活性，以间接ELISA法检测血清抗体水平。结果表明，ILTV基因免疫诱导机体产生了较强的淋巴细胞增殖反应，血清抗体在免疫后第2周发生阳转，而对照组无相应变化。这是ILTV基因免疫研究的首次报道。

关键词：喉气管炎病毒鸡家禽传染病

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鸡传染性喉气管炎病毒王岗株糖蛋白gB基因在重组杆状病毒中的表达

鸡传染性喉气管炎病毒王岗株糖蛋白gB基因在重组杆状病毒中的表达

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十次学术研讨会

作者：张绍杰倪健强中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室(哈尔滨)

将克隆到pUC119中的鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因，通过EcoRI位点再亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中，构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac-N-Blue DNA)共转Sf9昆虫细胞，经三轮蚀斑纯... 详细信息

将克隆到pUC119中的鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因，通过EcoRI位点再亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中，构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac-N-Blue DNA)共转Sf9昆虫细胞，经三轮蚀斑纯化，获得的重组病毒命名为rpVL-ILTVgB。PCR方法鉴定证明，gB基因正确插入到杆状病毒基因组中，直接免疫荧光试验和Dot-ELISA结果均表明gB基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得表达，表达的gB蛋白将作为鸡传染性喉气管炎的亚单位疫苗和诊断抗原。

关键词：喉气管炎病毒鸡杆状病毒重组病毒糖蛋白基因

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