检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2019年第10期41卷 987-992页

作者：黄山雨梁立滨李俊平王倩赵青青周陈陈赵玉辉王广文李奇兵孔凡迪李呈军陈化兰姜丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

A型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用。NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达。为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相... 详细信息

A型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用。NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达。为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相互作用关系,本研究利用重组质粒p CAGGS-V5-DOK6、p CAGGS-Flag-NS1共转染293T细胞,利用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测,结果显示沉淀NS1蛋白后能够检测到DOK6蛋白条带,表明DOK6蛋白与NS1蛋白存在相互作用;将二者共转染A549细胞后利用激光共聚焦显微镜观察,发现二者在细胞质中存在共定位,表明两种蛋白在细胞质中发生相互作用。通过双分子荧光互补试验(BiFC)检测,结果显示NS1蛋白能够与DOK6蛋白的磷酸化酪氨酸结合结构域(Phosphotyrosine binding domain,PTB)结合从而发出较强荧光,表明NS1蛋白能够与DOK6蛋白(PTB)结构域发生相互作用。本研究进一步完善了A型流感病毒NS1蛋白参与的复杂分子间相互作用网络,为深入理解流感病毒在宿主体内复制的分子调控机制奠定了基础。

关键词：流感病毒 NS1蛋白 DOK6蛋白蛋白相互作用

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猪瘟兔化弱毒疫苗(C株)——10年回眸

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中国预防兽医学报 2019年第6期41卷 654-659页

作者：韩玉莹李永锋谢利豹仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

1猪瘟及C株疫苗概况猪瘟(Classical swine fever,CSF)是猪的一种以高热稽留和广泛性出血为主要特征的高度传染性疾病,给许多国家的养猪业造成了重大的经济损失[1]。世界动物卫生组织(OIE)将其列入须申报(Notifiable)的动物疫病名录。在... 详细信息

1猪瘟及C株疫苗概况猪瘟(Classical swine fever,CSF)是猪的一种以高热稽留和广泛性出血为主要特征的高度传染性疾病,给许多国家的养猪业造成了重大的经济损失[1]。世界动物卫生组织(OIE)将其列入须申报(Notifiable)的动物疫病名录。在国务院印发的《国家中长期动物疫病防治规划(2012~2020年)》中,将猪瘟列为5种优先防治的“一类动物疫病”之一。

关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗 C株世界动物卫生组织动物疫病防治规划传染性疾病经济损失养猪业

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金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因敲除菌株的构建及生长特性分析

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中国预防兽医学报 2020年第11期42卷 1104-1108页

作者：刘文宇祝瑶王长珍杨亲栾天王凌利刘思国周学章张万江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 宁夏大学生命科学学院宁夏银川750021

为构建金黄色葡萄球菌杀白细胞素(PVL)基因敲除的菌株,本研究以pBT2温敏型质粒为载体,构建金黄色葡萄球菌PVL基因敲除质粒pBT2-ΔPVL,并经酶切鉴定。将其转化至金黄色葡萄球菌RN4220中经其修饰后电转化至金黄色葡萄球菌ATCC 49775中,在3... 详细信息

为构建金黄色葡萄球菌杀白细胞素(PVL)基因敲除的菌株,本研究以pBT2温敏型质粒为载体,构建金黄色葡萄球菌PVL基因敲除质粒pBT2-ΔPVL,并经酶切鉴定。将其转化至金黄色葡萄球菌RN4220中经其修饰后电转化至金黄色葡萄球菌ATCC 49775中,在30℃和42℃多次交替传代并经红霉素抗性筛选,构建PVL基因敲除菌株,经PCR和测序鉴定后命名为ΔPVL。以pLI50穿梭质粒为载体,构建金黄色葡萄球菌PVL基因回补质粒pLI50-PVL,按照同样方法将其转化至敲除菌株ΔPVL中,构建PVL基因回补菌株CΔPVL。将ΔPVL在TSB培养基中连续传代培养后,经PCR检测敲除菌株体外的遗传稳定性;分别绘制敲除菌株ΔPVL和回补菌株CΔPVL的生长曲线,检测其体外生长特性。结果显示,正确构建了两种质粒pBT2-ΔPVL、pLI50-PVL和两种菌株ΔPVL、CΔPVL。敲除菌株ΔPVL连续传代未发生回复突变,具有良好的遗传稳定性。生长特性结果显示敲除菌株生长速率显著低于野生菌株,表明PVL基因在金黄色葡萄球菌的生长调节中发挥着一定的作用。本研究为进一步研究金黄色葡萄球菌PVL的功能及致病机制奠定了基础。

关键词：杀白细胞素同源重组遗传稳定性

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表达EGFP标签的重组血清4型禽腺病毒的构建及评价

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中国兽医科学 2019年第8期49卷 998-1005页

作者：柴冬华邵昱昊李慧昕刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

我国当前流行的禽腺病毒血清4型(FAdV-4)毒株与国外毒株相比存在自然缺失。为了解我国流行的FAdV-4毒株的复制能力和特点以及病毒毒力的增强机制,本研究以我国当前流行的基因组3′端自然缺失株HN/151025为亲本病毒,采用同源重组技术,在H... 详细信息

我国当前流行的禽腺病毒血清4型(FAdV-4)毒株与国外毒株相比存在自然缺失。为了解我国流行的FAdV-4毒株的复制能力和特点以及病毒毒力的增强机制,本研究以我国当前流行的基因组3′端自然缺失株HN/151025为亲本病毒,采用同源重组技术,在HN/151025毒株基因组35430~35431自然缺失位点插入EGFP表达盒,构建带有EGFP标签的重组病毒rHN-△35430-EGFP。获得的重组病毒在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,重组病毒在LMH细胞连续传代5代,EGFP基因随病毒的传代而稳定遗传,且EGFP蛋白稳定表达。病毒生长曲线测定结果显示,带有EGFP标签的重组病毒与亲本病毒的生长动力学趋势基本一致,均在接种后第96小时病毒滴度达到高峰,但是重组病毒滴度与亲本病毒差异显著(P<0.05)。对重组病毒感染细胞能力进行评价,结果表明,表达荧光信号的细胞比例从感染后第24小时逐渐增多,至感染后第96小时达到高峰,该结果与病毒生长曲线结果一致。本研究结果表明,FAdV-4病毒基因组3′端可作为标签基因插入位点,为进一步研究病毒复制和感染机制奠定基础。

关键词：禽腺病毒血清4型重组病毒绿色荧光蛋白标签

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动物病毒宏基因组数据分析平台的建立及应用

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中国预防兽医学报 2019年第10期41卷 1041-1046页

作者：史智宾王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

病毒宏基因组学(Viral metagenomics)是一门新兴的用于研究环境及宿主中病毒多样性及其生物学特性学科。为了能够更高效、科学地实现宏病毒组数据分析,本研究建立了一个动物病毒宏基因组数据分析平台。该平台的主要功能包括数据质控、... 详细信息

病毒宏基因组学(Viral metagenomics)是一门新兴的用于研究环境及宿主中病毒多样性及其生物学特性学科。为了能够更高效、科学地实现宏病毒组数据分析,本研究建立了一个动物病毒宏基因组数据分析平台。该平台的主要功能包括数据质控、数据的预处理、序列拼接和序列注释等,并根据应用需求,建立了两种基因序列注释策略:基于读长序列分析和基于重叠序列分析。应用该分析平台对一个猪源鼻拭子的混合样品中病毒基因组数据进行了分析,结果显示该样品中存在环状病毒、冠状病毒、细小病毒等60多种病毒,证明该平台可满足动物病毒宏基因组数据分析的需求。动物病毒宏基因组数据分析平台的建立为动物病毒流行病学监测及疾病防控提供有效的技术手段。

关键词：动物病毒宏基因组读长序列分析重叠序列分析

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基于生长素诱导降解系统条件性敲除弓形虫ATG6蛋白的研究

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中国预防兽医学报 2019年第10期41卷 1015-1020页

作者：陈运通陈赫明付佳雯庞宇郑君贾洪林中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

为构建生长素诱导降解系统的弓形虫条件性基因缺失虫株,本研究首先利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选获得Tg Ku80基因缺失虫株,然后采用该缺失虫株,利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选,将生长素诱导降解因子(AID)插入该弓形虫Tg A... 详细信息

为构建生长素诱导降解系统的弓形虫条件性基因缺失虫株,本研究首先利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选获得Tg Ku80基因缺失虫株,然后采用该缺失虫株,利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选,将生长素诱导降解因子(AID)插入该弓形虫Tg ATG6基因序列的5’端得到TgATG6条件性敲除虫株TgATG6-i KD。PCR扩增及测序结果显示,以TgATG6-iKD虫株为模板可扩增出AID标签,而在野生型虫株中,不能有效扩增该靶序列,经测序验证也得到相符结果,表明AID标签序列能够高效定点插入到弓形虫Tg Ku80基因缺失虫株中;通过蛋白免疫印迹试验能够在TgATG6条件性敲除虫株检测到AID标签和TgATG6蛋白的融合表达;蛋白免疫印迹试验及间接免疫荧光实验结果显示,利用生长素(NAA)能够快速诱导融合表达蛋白的降解。本研究通过蛋白N端融合AID共表达,建立了高效条件性敲除弓形虫基因的方法,为进一步研究弓形虫相关基因的功能奠定基础。

关键词：弓形虫植物生长激素条件性敲除 TgATG6

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牛副流感病毒3型核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2019年第5期41卷 495-500页

作者：李德栋向文杰林俊朱远茂薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室

为建立以牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)为包被抗原的间接ELISA方法,本研究扩增BPIV3的NP基因并克隆于原核表达载体,获得重组表达质粒p ET30-NP。将其转化至表达菌BL21(DE3),获得了可溶性表达的重组N蛋白,用镍柱在非变性条件下... 详细信息

为建立以牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)为包被抗原的间接ELISA方法,本研究扩增BPIV3的NP基因并克隆于原核表达载体,获得重组表达质粒p ET30-NP。将其转化至表达菌BL21(DE3),获得了可溶性表达的重组N蛋白,用镍柱在非变性条件下纯化后将其作为包被抗原,建立了检测BPIV3抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示作为包被抗原的重组N蛋白仅与BPIV3阳性牛血清发生特异性反应,与牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒等牛的常见病原无血清学交叉反应,表明其特异性较强。牛BPIV3阳性血清在1:640倍稀释时按该方法检测仍为阳性,显示该方法具有较高的敏感性。重复性试验显示批内变异系数小于6%,批间变异系数小于12%,表明该方法具有较好的稳定性。对94份牛血清的比较试验显示,本研究建立的间接ELISA方法与病毒中和试验的符合率为98%。利用该方法检测了394份采自接种过BPIV3灭活苗牛场的血清样品和95份未接种疫苗牛场的血清样品,结果接种疫苗的牛血清均呈强阳性,而95份未接种疫苗牛血清的阳性率为80%。本研究建立的间接ELISA方法可以试用于国内BPIV3的流行病学调查和免疫监测,为国内BPIV3的防控提供技术支持。

关键词：牛副流感病毒3型重组N蛋白间接ELISA

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新城疫病毒通过候鸟途径跨境传入我国的风险定量评估

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农业大数据学报 2020年第4期2卷 55-62页

作者：王世达魏丽丽王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150069 兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 国家动物疫病数据中心哈尔滨150069

为评估我国家禽经候鸟途径导致感染新城疫病毒的风险,为疫病发生提供预警,本研究基于情景树方法,以斑头雁、白枕鹤及宗头鸥3种候鸟做为传播媒介,以候鸟携带病毒概率、候鸟存活概率、候鸟在目标区域出现/停留概率、候鸟与家禽有接触概率... 详细信息

为评估我国家禽经候鸟途径导致感染新城疫病毒的风险,为疫病发生提供预警,本研究基于情景树方法,以斑头雁、白枕鹤及宗头鸥3种候鸟做为传播媒介,以候鸟携带病毒概率、候鸟存活概率、候鸟在目标区域出现/停留概率、候鸟与家禽有接触概率、候鸟与家禽有效接触概率、免疫覆盖率及免疫保护效率7个因素为主要风险节点构建了新城疫病毒通过候鸟途径传入我国家禽的风险评估模型。针对情景树中的关键风险节点进行数据采集及评估,以县级行政区划为空间单元、月份为时间单元对新城疫病毒通过候鸟途径引入风险进行了定量分析。分析结果表明,每年1—2月以及11—12月相对高风险区域主要集中在我国南部沿海地区,3—4月以及9—10月,处于候鸟迁徙路线上的中部东部地区家禽感染新城疫病毒的相对风险较高;5—6月我国东北地区以及中部地区为家禽通过候鸟途径感染新城疫病毒的相对高风险地区,7—8月,在我国华东地区出现了一个集中的相对高风险区域。整体而言,我国东部及中部地区风险高于西部地区。敏感性分析显示疫苗免疫是降低候鸟将新城疫病毒传播至家禽风险的主要因素。该研究为以风险评估为基础的疫病监测提供技术方案,为基于风险预警的新发新城疫疫情防控提供了理论依据。

关键词：风险评估新城疫候鸟病毒

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表达PCV-2 Cap和PPV-1 VP2蛋白的重组PRV的构建及鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2019年第5期 16-22,175页

作者：谢永兴夏德利黄立平危艳武吴洪丽朱红振冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

为了构建表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白和猪细小病毒1型(PPV-1)VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒(PRV)及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2_(opti))和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2_(opti)... 详细信息

为了构建表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白和猪细小病毒1型(PPV-1)VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒(PRV)及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2_(opti))和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2_(opti)基因分别构建重组质粒pMD18T-LR(TK)-VP2_(opti)和pMD18T-LR(TK)-VP2_(opti)(SP)。用已构建的重组病毒rPRV-TK^-/gE^-/gG^-/3Cap^+为骨架,以EGFP为标签经同源重组获得重组病毒。采用IPMA法鉴定Cap蛋白和VP2蛋白抗原在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达,采用IFA法鉴定VP2蛋白在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达与定位。用这2株重组病毒免疫小鼠,通过检测血清中PRV、PCV-2和PPV-1抗体水平对构建的重组病毒在小鼠体内的免疫原性进行评价。结果表明:经同源重组获得重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+/gE^-/gG^-/2Cap^+和rPRV-TK^-/VP2^+(SP)/gE^-/gG^-/2Cap^+;在重组病毒感染的PK-15细胞中均能检测到阳性Cap蛋白和VP2蛋白抗原;重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+/gE^-/gG^-/2Cap^+表达的VP2蛋白定位于细胞浆和细胞核,而重组病毒rPRV-TK^-/VP2^+(SP)/gE^-/gG^-/2Cap^+表达的VP2蛋白定位于细胞浆;用这2株重组病毒免疫小鼠能够检测到PRV中和抗体;用灭活的重组病毒免疫小鼠后可产生低水平的Cap和VP2抗体,而重组病毒活毒免疫的小鼠未检测到相应抗体。说明这2株重组病毒在体外能够表达Cap蛋白和VP2蛋白,PRV gG蛋白信号肽序列的加入促进了VP2蛋白从细胞核的释放。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白猪细小病毒1型 VP2蛋白重组伪狂犬病病毒重组质粒免疫原性

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A型流感病毒感染雪貂造模的研究进展

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中国实验动物学报 2019年第2期27卷 254-260页

作者：马树杰张博孔宇飞关云涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

A型流感病毒(influenza A virus,IAV)感染人和动物,严重威胁公共卫生安全。动物模型在IAV研究中发挥着重要作用,不同的动物模型具有不同的优点和限制性。本文比较了雪貂与小鼠、豚鼠和非人灵长类动物模型的优点和限制性,突出说明雪貂在... 详细信息

A型流感病毒(influenza A virus,IAV)感染人和动物,严重威胁公共卫生安全。动物模型在IAV研究中发挥着重要作用,不同的动物模型具有不同的优点和限制性。本文比较了雪貂与小鼠、豚鼠和非人灵长类动物模型的优点和限制性,突出说明雪貂在IAV研究中的重要性,并就雪貂在IAV致病性、传播和疫苗研发中的研究进展做了总结,以期为IAV的基础和应用研究提供参考。

关键词： A型流感病毒雪貂动物模型致病性传播疫苗研发

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