检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2019年第4期50卷 802-810页

作者：许程志吴运谱贾云慧杨时鳗何利昆陈艳周晨阳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 辽宁省动物疫病预防控制中心沈阳110164

为了进一步了解我国辽宁省猪流感(SI)的流行情况及病原的进化规律,对2016年年末在辽宁省某生猪屠宰场进行SI病原学监测时分离到的一株H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Liaoning/FX575/2016(简称FX575)进行全基因组序列测定,通过对其8个... 详细信息

为了进一步了解我国辽宁省猪流感(SI)的流行情况及病原的进化规律,对2016年年末在辽宁省某生猪屠宰场进行SI病原学监测时分离到的一株H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Liaoning/FX575/2016(简称FX575)进行全基因组序列测定,通过对其8个基因片段的基因来源进行分析,确定基因型;构建系统进化树;分析相关分子特征;进一步以6周龄雌性BALB/c小鼠为感染模型,通过测定感染后小鼠的体重变化和脏器病毒含量评估病毒的致病性。结果显示:FX575为一株三重重配型的H1N2病毒,遗传进化分析结果显示病毒的HA基因来自于欧亚类禽型H1N1(EA H1N1)分支的SIV,NA基因来自于北美三重配型H1N2分支的SIV,6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M和NS)均来自于2009/H1N1分支的病毒。以10~6EID_(50)的剂量经鼻腔途径感染小鼠后,能够引起小鼠出现明显的体重下降,其中有1只小鼠在感染后第7天体重下降的比率超过25%,判为死亡;感染后第3天在小鼠肺及鼻甲骨中均检测到较高滴度的病毒,含量分别为4.82、4.20 log_(10)EID_(50)·mL^(-1)。结果表明SIV在不断流行的过程中,不同基因型病毒之间发生重组导致出现基因三重配的病毒,病毒对小鼠呈现中等致病力特征,提示应进一步加强对SI的主动监测,从而降低病毒对兽医及公共卫生学风险。

关键词：猪流感病毒 H1N2亚型进化分析致病性

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2011—2015年环洞庭湖区H3亚型禽流感病毒的分离鉴定与遗传演化

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畜牧兽医学报 2019年第2期50卷 382-389页

作者：何世成彭志王卫国唐小明鲁杏华林源邓国华王昌建湖南省动物疫病预防控制中心长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室哈尔滨150069

为了解环洞庭湖地区家禽H3亚型禽流感病毒的感染情况和进化规律,笔者对2011—2015年湖南省环洞庭湖地区的多个活禽市场与散养鸭场分离的31株H3亚型禽流感病毒进行基因测序和进化分析。结果表明:所有病毒的HA裂解位点不含连续的碱性氨基... 详细信息

为了解环洞庭湖地区家禽H3亚型禽流感病毒的感染情况和进化规律,笔者对2011—2015年湖南省环洞庭湖地区的多个活禽市场与散养鸭场分离的31株H3亚型禽流感病毒进行基因测序和进化分析。结果表明:所有病毒的HA裂解位点不含连续的碱性氨基酸,为低致病性禽流感病毒的分子特征;各基因片段进化树显示部分病毒的PA与PB2基因与H5在相同分支,部分病毒的NP、PA、PB1与H7处于相同分支,表明H3可能与H5、H7亚型的禽流感病毒发生了复杂的基因交换;散养家禽分离的部分H3亚型禽流感病毒内部基因与越南、韩国等周边国家野鸟源的H3、H6、H7、H11等亚型同源性较高,可能有相同的进化来源。进一步将分离的病毒进行全基因比对,可划分出21种不同的病毒基因型。环洞庭湖地区H3亚型禽流感病毒基因来源复杂,表现出明显的遗传多样性。

关键词：洞庭湖区 H3亚型禽流感病毒进化分析基因型

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大肠杆菌鞭毛蛋白不同结构域与F4菌毛主要结构亚单位FaeG嵌合基因的构建及其表达蛋白的功能研究

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中国预防兽医学报 2020年第7期42卷 656-661页

作者：吴文文庞胜美丁雪燕刘思国王晓钧段强德朱国强扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心/教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究大肠杆菌鞭毛蛋白不同结构域与其免疫佐剂活性的相关性,本研究通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)分别构建了出血性大肠杆菌EDL933(O157􀏑H7)鞭毛蛋白FliCH7基因的全长(aa1~aa585)、N端保守区(aa1~aa174)、N端加中间的高变区(a... 详细信息

为探究大肠杆菌鞭毛蛋白不同结构域与其免疫佐剂活性的相关性,本研究通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)分别构建了出血性大肠杆菌EDL933(O157􀏑H7)鞭毛蛋白FliCH7基因的全长(aa1~aa585)、N端保守区(aa1~aa174)、N端加中间的高变区(aa1~aa496)与产肠毒素大肠杆菌F4ac+国内标准株C83902(O8􀏑K88􀏑H19)主要亚单位FaeG串联表达的嵌合基因,即FliC-FaeG、FliCN-FaeG和FliCNV-FaeG,分别将其克隆至pET-28a(+)表达载体中经IPTG诱导表达;经SDS-PAGE和western blot分别对表达的融合蛋白进行鉴定。PCR结果显示3个嵌合基因分别约为2600 bp、1300 bp和2300 bp;SDS-PAGE结果显示融合蛋白的大小分别约为:90 ku、48 ku和80 ku,均与预期大小一致。Western blot结果表明3种融合蛋白均能被抗FaeG的单克隆抗体识别;表明融合蛋白中FaeG仍维持其独立的结构和生物学活性。抗FliCH7的抗体可识别FliC-FaeG和FliCNV-FaeG融合蛋白,而FliCN-FaeG融合蛋白不含鞭毛蛋白高变区,所以不能被识别;TLR5受体活性检测结果表明,仅FliC-FaeG融合蛋白能激活TLR5受体,引起IL-8、TNF-α炎性因子的分泌,以上结果表明TLR5受体活性的激活需要完整的鞭毛蛋白结构,本研究以FaeG为模型抗原,构建了大肠杆菌鞭毛蛋白不同结构域与其相结合的融合蛋白,为进一步研究大肠杆菌鞭毛蛋白不同结构域免疫佐剂活性的差异性和深入研究鞭毛蛋白发挥其免疫佐剂活性的机理提供了参考依据。

关键词：鞭毛蛋白结构域免疫佐剂嵌合基因

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DENND1B蛋白对AP2B1蛋白细胞中表达及分布影响的研究

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中国预防兽医学报 2019年第9期41卷 940-944页

作者：李奇兵赵玉辉王广文温霞梁立滨李俊平黄山雨孙楠姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室

为探究含DENN结构域蛋白1B (DENND1B)对网格蛋白依赖性内吞接头蛋白复合体(AP-2)的β亚基(AP2B1)的影响,本实验利用si RNA干扰技术以及慢病毒包装过表达系统改变DENND1B蛋白的表达水平,通过荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及激光共... 详细信息

为探究含DENN结构域蛋白1B (DENND1B)对网格蛋白依赖性内吞接头蛋白复合体(AP-2)的β亚基(AP2B1)的影响,本实验利用si RNA干扰技术以及慢病毒包装过表达系统改变DENND1B蛋白的表达水平,通过荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及激光共聚焦技术研究DENND1B蛋白对AP2B1蛋白的表达以及细胞内定位的影响。结果显示:DENND1B蛋白沉默后能够下调AP2B1蛋白的表达,而过表达DENND1B后能够上调AP2B1蛋白的表达,并且干扰DENND1B蛋白表达后能够显著性地改变AP2B1在细胞内的定位(p<0.05),使AP2B1蛋白由核周聚集改变为胞质弥散分布。上述结果表明DENND1B蛋白能够调控AP2B1蛋白的表达以及细胞定位。本实验为研究接头蛋白以及网格蛋白依赖性的质膜内吞途径提供了新的切入点。

关键词： DENND1B siRNA干扰过表达 AP-2 AP2B1

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猪CISH基因过表达对IL-6和TNF-α基因mRNA的表达调控研究

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黑龙江畜牧兽医 2019年第7期 61-66页

作者：邢桂玲高晓雯寇明星郭东春王希彪牛步月东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

为了分析猪细胞因子诱导的含SH2结构域蛋白(CISH)基因对白细胞介素6(IL-6)和α肿瘤坏死因子(TNF-α)等基因表达的调控,深入研究CISH基因的生物学功能,试验采用猪CISH基因过表达质粒pcDNA-CISH瞬时转染PK-15细胞,利用Real-time PCR技术... 详细信息

为了分析猪细胞因子诱导的含SH2结构域蛋白(CISH)基因对白细胞介素6(IL-6)和α肿瘤坏死因子(TNF-α)等基因表达的调控,深入研究CISH基因的生物学功能,试验采用猪CISH基因过表达质粒pcDNA-CISH瞬时转染PK-15细胞,利用Real-time PCR技术分析了CISH过表达对相关基因表达量的影响。结果表明:在PK-15细胞中,CISH基因过表达并没有引起TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α等基因相对表达量的显著改变;细菌脂多糖(LPS)刺激PK-15细胞后,IL-6、TNF-α和TLR4等基因的相对表达量极显著上调(P<0.01);LPS刺激CISH基因过表达的PK-15细胞后,IL-6基因的相对表达量显著上调(P<0.05)。说明在LPS的刺激下,CISH过表达可以上调IL-6基因的相对表达量。

关键词：猪细胞因子诱导的含SH2结构域蛋白过表达白细胞介素6 α肿瘤坏死因子

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人工感染鸭源新城疫病毒对绍鸭β-防御素和细胞因子基因表达的影响

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中国畜牧兽医 2019年第2期46卷 536-547页

作者：许丽文王秋玲王芳芳刘诚刚马得莹东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

试验旨在探讨人工感染鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对绍鸭β-防御素(avianβ-defensins,AvBDs)和细胞因子基因表达的影响。选用45只20日龄SPF绍鸭,随机分为攻毒组(27只)和对照组(18只),攻毒组采用滴鼻点眼的途径(108.38... 详细信息

试验旨在探讨人工感染鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对绍鸭β-防御素(avianβ-defensins,AvBDs)和细胞因子基因表达的影响。选用45只20日龄SPF绍鸭,随机分为攻毒组(27只)和对照组(18只),攻毒组采用滴鼻点眼的途径(108.38 EID50)接种鸭源NDV强毒株(Md/CH/LGD/1/2005),对照组接种磷酸盐缓冲液。在攻毒后24和48h,从对照组及攻毒组各随机取6只鸭屠宰,分别采集肾脏、肺脏、气管、腺胃、骨髓、脾脏、盲肠扁桃体、哈德氏腺、法氏囊9个组织,运用实时荧光定量PCR法检测组织样品中9种AvBDs和细胞因子的表达量;剩余鸭每天持续观察,每隔4d采血1次,直至24d,检测血清抗体水平;于攻毒后24、48、72和120h采集咽喉及泄殖腔拭子,以确定排毒周期。结果表明,感染该NDV毒株后,鸭没有临床发病症状和死亡情况发生;感染后鸭排毒开始于攻毒后第1天,到第5天停止,在攻毒组咽喉及泄殖腔拭子中均检测到NDV。抗体水平检测结果显示,该NDV能够诱导鸭体内产生抗NDV特异抗体。实时荧光定量PCR结果发现,与对照组相比,感染后24h,部分鸭组织中AvBD1、AvBD2、AvBD5、AvBD6、AvBD9和AvBD16表达量均显著升高(P<0.05);感染后48h,AvBD1和AvBD6在部分鸭组织中表达量均显著上调(P<0.05);感染后48h法氏囊中白细胞介素6(IL-6)和脾脏中干扰素γ(IFN-γ)的表达量明显低于感染后24h的表达量。综上所述,该鸭源NDV毒株感染可诱导绍鸭体内在早期产生天然免疫反应,这些反应可能与病毒在机体内复制有关。

关键词：绍鸭新城疫病毒(NDV) 禽β-防御素(AvBDs) 细胞因子

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M蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及生物学特性鉴定

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中国预防兽医学报 2019年第8期41卷 777-782页

作者：范振孙军峰赵冉韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队

基质蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的结构蛋白。为监测NDV感染后M蛋白在细胞中的动态分布,本研究利用反向遗传操作技术,在NDV La Sota株全长c DNA中M基因编码区的C端插入由18个核苷酸编码的TC (Tetracysteine)标签,转染细胞经筛选获得携... 详细信息

基质蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的结构蛋白。为监测NDV感染后M蛋白在细胞中的动态分布,本研究利用反向遗传操作技术,在NDV La Sota株全长c DNA中M基因编码区的C端插入由18个核苷酸编码的TC (Tetracysteine)标签,转染细胞经筛选获得携带TC标签的重组病毒La Sota-M-CTC。生长曲线测定结果显示,La Sota-M-CTC能够在鸡胚中有效复制,其生长曲线与亲本病毒La Sota相似。通过接种鸡胚测定鸡胚平均死亡时间检测La Sota-M-CTC的毒力。结果显示,La Sota-M-CTC的毒力与La Sota基本一致。此外,TC标签能够在重组病毒中稳定存在。将La Sota-M-CTC感染的细胞用双砷绿色染料FlAsH-EDT2染色后经激光共聚焦检测M蛋白在细胞中的分布。结果显示,在La Sota-M-CTC感染细胞后1 h^2 h时,M蛋白主要分布于细胞质中,而在病毒感染4 h后M蛋白进入细胞核中,并持续存在至病毒感染后的12 h。本研究为监测M蛋白在NDV感染过程中的动态分布以及阐明M蛋白在NDV感染中的作用机制提供了实验依据。

关键词：新城疫病毒 TC标签 M蛋白细胞定位

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MDA5基因敲除小鼠的构建

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新疆农业大学学报 2020年第4期43卷 270-274页

作者：田璐张子博史鑫琪郭慧娟陈洪岩王金泉孟庆文新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

MDA5作为RLRs蛋白家族成员,能特异性的识别较长的双链RNA,激活体内的信号通路,促进Ⅰ型干扰素的表达,在天然免疫系统中发挥着重要作用。本研究利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠MDA5基因第一外显子区域选择一段序列作为靶序列,将含有靶序列的s... 详细信息

MDA5作为RLRs蛋白家族成员,能特异性的识别较长的双链RNA,激活体内的信号通路,促进Ⅰ型干扰素的表达,在天然免疫系统中发挥着重要作用。本研究利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠MDA5基因第一外显子区域选择一段序列作为靶序列,将含有靶序列的sgRNA和Cas9质粒的体外转录产物显微注射至C57BL/6近交系小鼠的受精卵中,8只F0代首建鼠中5号小鼠为MDA5基因敲除纯合小鼠;将其与野生型(WT)小鼠合笼繁育出MDA5^(+/-)小鼠,再通过全同胞合笼交配的方式获得纯合子小鼠。基因组PCR后检测显示F2代小鼠中有4只纯合小鼠,进一步RT-PCR结果显示MDA5敲除小鼠各脏器中MDA5基因均未表达,表明基于CRISPR/Cas9技术的MDA5基因敲除小鼠模型构建成功。为进一步研究MDA5在天然免疫应答机制和抗病毒感染等方面提供有价值的模型。

关键词： MDA5 CRISPR/Cas9 基因敲除动物模型

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STAT3在猪流行性腹泻病毒感染的作用及机制初步探索

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中国兽医杂志 2019年第7期55卷 3-7页

作者：杨丽君张健许嘉宇张璐冯力陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为探究信号传导及转录激活因子3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染过程中的作用,采用STAT3特异性siRNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和Western Blot试验显示,其能够明显降低STAT3的mRNA水平和蛋白水平;在此条件下接种PEDV,通过荧光定量PCR试验,显示当STAT3的mRNA水平降低时能够显著抑制PEDV的RNA水平,Western Blot试验结果也证实抑制STAT3内源性表达能够显著抑制PEDV复制。为进一步研究STAT3的作用机制,采用STAT3特异性siRNA处理这两种细胞,24 h后经过荧光定量PCR检测发现敲低STAT3后,干扰素刺激基因MxA、ISG15以及IFN-β,IFN-λ的mRNA水平均显著升高。本研究对于进一步阐明STAT3参与PEDV感染引发的IFN抗病毒反应提供了试验依据。

关键词： STAT3 PEDV IFN

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马属动物主要传染病疫苗和诊断技术的研制与推广应用

马属动物主要传染病疫苗和诊断技术的研制与推广应用

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作者：王晓钧胡哲郭巍戚亭刘荻中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家马传染性贫血参考实验室国家马鼻疽参考实验室

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所马传染病和慢病毒病研究创新团队70年来专注马传染病的研究，是国家认定的国家马传染性贫血参考实验室、国家马鼻疽参考实验室，世界动物卫生组织OIE认定的马传染性贫血参考实验室。在历史上，团队早期... 详细信息

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所马传染病和慢病毒病研究创新团队70年来专注马传染病的研究，是国家认定的国家马传染性贫血参考实验室、国家马鼻疽参考实验室，世界动物卫生组织OIE认定的马传染性贫血参考实验室。在历史上，团队早期领导人兽医免疫学家中国工程院沈荣显院士研制成功了马传染性贫血病毒弱毒疫苗，成功控制了该病在国内的流行。随着我国经济的高速发展和全面迈入小康社会，现代马业快速发展，马成为重要的竞技、娱乐、伴侣动物，驴作为经济动物的需求日益增长，马业、驴业已然发展成为重要的一种经济和文化产业。我国现有马匹350余万匹，驴300余万头，近年来在新需求的推动下，养殖数量逐步增大，动物交易和调运频繁，导致各种传染病发生增多，给现代马业带来的巨大威胁。哈兽研马病团队面向产业疫病控制重大需求，针对重要马属动物传染病的诊断和疫苗开展集中攻关，研发出一系列国际先进的科技成果，为马业的健康发展和绿色养殖提供了可靠的、高效的科技支撑。该文主要介绍团队研发的3项疫苗、多项诊断试剂、标准化实验室认证下的检测系统、重大疫病监测现场快速诊断产品。马流行性感冒(Equine innuenza)简称马流感，是由流行性感冒病毒引起的马属动物的一种急性暴发式流行的传染病，临床特征为发热、咳嗽、流鼻液、母马流产等，世界动物卫生组织已将其列为B类疫病。马流产沙门氏菌病又称为马副伤寒，是由马流产沙门氏菌引起的以马属动物流产为特征的传染病，只对马属动物具有致病性。驴副伤寒是由马流产沙门氏杆菌引起的马属动物的一种传染病。临床特征是孕畜发生流产；公畜表现为睾丸炎、髻甲肿；幼驹主要表现为关节肿大、下痢，有时还见支气管肺炎。

关键词：马属动物传染病疫苗临床诊断

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