检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2018年第9期40卷 795-800页

作者：王莉莉于艳超周长平赵雅芝潘巧张琳郝文君王秀梅辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

为研究鸡毒支原体(MG)重组热休克蛋白DnaK (rDnaK)的免疫反应原性及其作为ELISA方法中诊断抗原的应用价值,本研究将已构建的含有MG DnaK基因的重组质粒p ET-30a-DnaK进行原核表达纯化,以多份MG的标准阳性血清和阴性血清作为一抗,进行wes... 详细信息

为研究鸡毒支原体(MG)重组热休克蛋白DnaK (rDnaK)的免疫反应原性及其作为ELISA方法中诊断抗原的应用价值,本研究将已构建的含有MG DnaK基因的重组质粒p ET-30a-DnaK进行原核表达纯化,以多份MG的标准阳性血清和阴性血清作为一抗,进行western blot分析,结果显示r DnaK与MG的阳性血清发生特异性反应,与MG的阴性血清无反应条带,表明r DnaK具有较好的免疫反应原性。将其作为包被抗原包被酶标板,用HRP标记的兔抗鸡Ig G作为酶标二抗,分别对抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度及工作时间等反应条件进行了优化,建立了一种稳定检测MG抗体的间接ELISA方法。对该方法进行评估,灵敏性试验结果显示该方法与进口试剂盒相当;特异性试验结果显示包被抗原r DnaK不与NDV、IBV、ILTV等几种常见的禽呼吸道疾病的阳性血清发生交叉反应;重复性试验结果显示,批内变异系数为1.6%～5.15%,批间变异系数为2.9%～5.98%;符合率试验结果显示该方法与进口试剂盒的总体符合率为90.4%;抗体持续期试验结果显示该方法最早能在鸡群免疫MG疫苗后一周检测到MG抗体,表明该诊断方法适用于MG感染的早期检测。采用该方法检测了来自全国5个省份的568份临床样品,其结果显示MG的感染率在23%～51%,对我国MG的流行状况做了初步的调查。

关键词：鸡毒支原体 DnaK 免疫原性间接ELISA

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传染性法氏囊病病毒基因组A节段3'-UTR对病毒复制影响的研究

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中国预防兽医学报 2018年第3期40卷 177-180,185页

作者：杨搏陈泽华韩春燕么帅祁小乐高立高玉龙刘长军张艳萍杨玉莹王永强王笑梅长江大学动物科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究团队黑龙江哈尔滨150069

为探究传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组A节段3'-UTR是否影响IBDV的复制,本实验应用融合PCR技术将IBDV弱毒Gt株A节段的3'-UTR替换为超强毒Gx株的相应区段,并利用反向遗传操作系统拯救嵌合病毒r Gt-Gx3'UTR,对拯救病毒进行鉴... 详细信息

为探究传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组A节段3'-UTR是否影响IBDV的复制,本实验应用融合PCR技术将IBDV弱毒Gt株A节段的3'-UTR替换为超强毒Gx株的相应区段,并利用反向遗传操作系统拯救嵌合病毒r Gt-Gx3'UTR,对拯救病毒进行鉴定。结果显示嵌合病毒拯救成功,Gt株的RNA依赖的RNA聚合酶既能识别Gt株的3'-UTR,也能识别超强毒Gx株的3'-UTR。通过比较嵌合病毒与亲本病毒的体外复制曲线,表明3'-UTR能够影响IBDV的复制。3'-UTR二级结构的预测结果表明其可能是以特定的二级结构而非一级序列发挥其功能。本研究为认识IBDV复制特点奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒反向遗传 3'-UTR 病毒复制

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感染马传染性贫血病毒的巨噬细胞差异表达microRNA分析

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中国预防兽医学报 2018年第8期40卷 665-669页

作者：韩亚儒杜承王晓钧内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)感染靶细胞-马单核巨噬细胞(eMDM)后细胞内microRNA (miRNA)表达的变化,本研究采用EIAV强毒株EIAVDLV34感染eMDM,并以未感染组作为对照,提取细胞内总RNA,通过高通量测序分析细胞内miRNA表达谱的变化。结果... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)感染靶细胞-马单核巨噬细胞(eMDM)后细胞内microRNA (miRNA)表达的变化,本研究采用EIAV强毒株EIAVDLV34感染eMDM,并以未感染组作为对照,提取细胞内总RNA,通过高通量测序分析细胞内miRNA表达谱的变化。结果显示,与对照相比,感染EIAVDLV34后eMDM有16个miRNA发生差异表达,其中8个miRNA上调表达,8个miRNA下调表达,通过荧光定量PCR技术对这16个miRNA的表达进行了验证,结果与高通量测序一致,最后利用生物信息学方法对这16个miRNA的靶基因及其参与的生物学过程进行了分析,显示靶基因主要参与转录调控、信号转导、细胞凋亡等生物学过程。本研究为进一步分析EIAV与其宿主相互作用、致病机制以及慢病毒相关疾病的预防提供了参考依据。

关键词：马传染性贫血病毒 microRNA 差异表达生物信息学

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以胸膜肺炎放线杆菌菌影作为佐剂的猪圆环病毒亚单位疫苗的研究

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中国预防兽医学报 2018年第1期40卷 55-59页

作者：徐胜奎李婷婷赵谦李大鹏李刚刘思国刘长明冯力王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设P... 详细信息

为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设PCV2灭活苗组和对照组,在加强免疫14 d后攻毒。结果显示,r Cap+APP-ghost组仔猪的抗体水平显著高于r Cap+ISA61组(p<0.05);攻毒后,r Cap+APP-ghost组仔猪未检测到病毒血症,而对照组仔猪在攻毒后14 d^28 d检测到病毒血症;攻毒后28 d,r Cap+APP-ghost组仔猪腹股沟淋巴结中的病毒载量显著低于r Cap+ISA61组和对照组仔猪的病毒载量(p<0.05);同时,r Cap+APP-ghost组仔猪相对体质量增长率显著高于对照组仔猪的相对体质量增长率(p<0.05)。以上结果表明,APP ghost可以作为有效的佐剂增强机体免疫反应,提高机体的抗病原感染能力。

关键词： APP菌影 Cap蛋白佐剂猪圆环病毒亚单位疫苗

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高通量测序一株天鹅源H5N8亚型流感病毒遗传演化分析

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中国预防兽医学报 2018年第9期40卷 771-774页

作者：赵璐刘建文李月辉昝亚楠李玉磊刘丽娜刘丽玲田国彬曾显营李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 天津市动物疫病预防控制中心天津300400

为研究一株天鹅源H5N8亚型禽流感病毒(AIV)的遗传演化规律,本研究对2016年从山西省疾控中心送检天鹅样品中分离到的一株H5N8亚型流感病毒(A/swan/Shanxi/6/2016)的全基因组序列进行高通量测序及遗传演化分析。结果显示,分离的病毒为Clad... 详细信息

为研究一株天鹅源H5N8亚型禽流感病毒(AIV)的遗传演化规律,本研究对2016年从山西省疾控中心送检天鹅样品中分离到的一株H5N8亚型流感病毒(A/swan/Shanxi/6/2016)的全基因组序列进行高通量测序及遗传演化分析。结果显示,分离的病毒为Clade 2.3.4.4分支高致病禽流感病毒(HPAIV);BLAST分析显示该分离株的NP基因与H3N8亚型AIV的NP基因具有较高同源性,而其它基因节段则分别与来自其它国家的H5N8亚型AIV的相应基因节段同源性较高,进一步选取与各基因节段核苷酸同源性较高的病毒株作参考序列构建其系统进化树,推测该分离株为一株重组病毒株。特殊氨基酸位点分析显示,其具有典型的禽型受体结合位点和典型的人型受体结合位点。并且M1蛋白、NS1蛋白和PB2蛋白具有H5N1亚型AIV对鼠致病性增强的分子标志,提示该株野鸟源流感病毒可能具备感染哺乳动物的能力。本研究对H5N8亚型AIV的综合防控具有一定的指导意义。

关键词：禽流感病毒 H5N8亚型高通量测序进化分析

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黏附与聚集、抗肿瘤及抗菌特性乳杆菌的筛选

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中国预防兽医学报 2018年第11期40卷 986-991页

作者：宋雨心王文骞张园刘琳琳王婷婷祁小乐高玉龙王永强高宏雷李凯刘长军张艳萍高立王笑梅崔红玉何高明石河子大学动物科技学院新疆石河子832002 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为获得具有高黏附与聚集、抗肿瘤及抗菌特性的益生乳杆菌,本研究以10株经16s r DNA鉴定的乳杆菌为候选菌,以结肠癌HT-29细胞为体外模型研究其黏附能力和抗肿瘤特性及其黏附能力与自聚集能力的相关性。将乳杆菌与致病性大肠埃希氏菌、鸡... 详细信息

为获得具有高黏附与聚集、抗肿瘤及抗菌特性的益生乳杆菌,本研究以10株经16s r DNA鉴定的乳杆菌为候选菌,以结肠癌HT-29细胞为体外模型研究其黏附能力和抗肿瘤特性及其黏附能力与自聚集能力的相关性。将乳杆菌与致病性大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌及金黄色葡萄球菌分别共孵育,探究了乳杆菌的共聚集能力与抗菌能力。结果显示:有6株乳杆菌的自聚集能力在20%以上;4株乳杆菌粘附内化HT-29细胞的内化率超过5%,经荧光显微镜观察,菌株Lac.99对HT-29细胞具有最强的黏附特性;菌株Lac.117和Lac.56对HT-29细胞的生长具有较好的抑制作用;4株乳杆菌对指示致病菌具有较强的拮抗作用,其中Lac.117菌株作用最强。综上所述,候选菌株中Lac.56在黏附、抗菌和抗肿瘤方面均表现出良好的益生特性,本实验为进一步研究和开发具有潜在应用价值的益生菌制剂提供了依据。

关键词：乳杆菌黏附抗肿瘤抗菌活性

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湖南省2015～2017年主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒监测情况

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中国家禽 2018年第23期40卷 70-72页

作者：何世成彭志王卫国唐小明鲁杏华林源邓国华王昌建湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解湖南省主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的流行情况,将采集的拭子样品接种鸡胚培养后,进行病毒分离,并结合血凝抑制试验和RT-PCR鉴定禽流感病毒的亚型。结果显示:在2015～2017年采样的3 208份拭子中分离出397株低致病性禽流感... 详细信息

为了解湖南省主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的流行情况,将采集的拭子样品接种鸡胚培养后,进行病毒分离,并结合血凝抑制试验和RT-PCR鉴定禽流感病毒的亚型。结果显示:在2015～2017年采样的3 208份拭子中分离出397株低致病性禽流感病毒,总分离率为12.37%,其中环境拭子中的低致病性禽流感病毒的分离率最高,达22.22%,其次是鸭拭子为11.62%,鸡拭子为10.70%。本试验共分离出H1、H3、H4、H6、H9、H10和H11共7种亚型的低致病性禽流感病毒,其中H9、H6和H3亚型分离率分别达到6.51%、2.21%和1.96%。监测表明:湖南省活禽批发市场中低致病性禽流感病毒隐性感染情况普遍存在。

关键词：活禽批发市场低致病性禽流感病毒监测分离率湖南

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具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：王怡平张忠伟蒲路莎赵丽丽陈洪岩吉林省松原市宁江区畜牧业管理局吉林松原 138001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间... 详细信息

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选,获得了 1株稳定分泌抗DEV MAb的杂交瘤细胞株2E3.鉴定结果显示,该MAb为IgM亚类,ELISA效价可达到1∶105以上;间接免疫荧光试验(IFA)中MAb可与细胞中增殖的DEV结合,Western Blot试验中MAb不与变性病毒蛋白作用,表明该MAb可能是构象表位的单抗;病毒中和试验表明,该MAb具有较强的病毒中和活性.本试验获得的一株具有DEV中和活性的MAb杂交瘤细胞株,为建立DEV的检测方法和DEV的相关研究提供了材料支持.

关键词：鸭肠炎病毒单克隆抗体中和活性

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鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌多重PCR检测方法的建立及初步应用

鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌多重PCR检测方法的建...

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：王怡平孙畅赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江 157011

为建立一种快速鉴别禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)和禽非致病性大肠杆菌(Avian non-pathogenic Escherichia coli,ANPEC)的多重PCR检测方法,本研究针对APEC的iss、cvaC、irp2、iucD、iroN和tsh共6个毒力基因的序列进行分析,分别设计合成6对特异性引物,通过正交组合法优化引物比例和梯度法确定最佳退火温度,并进一步完善了方法的敏感性、特异性和判定标准,建立了一种快速灵敏检测APEC的多重PCR检测方法,并初步应用该方法对本实验室102株大肠杆菌样本鉴定和分群。结果显示：该多重PCR方法对菌液最低检测浓度为5×107 cfu/mL;对其他种属的4株革兰氏阳性菌和5株革兰氏阴性菌无扩增。检测实验室保存的鸭源APEC和ANPEC各10株,通过比较两者所含毒力基因的分布情况及数量,建立多重PCR判定标准即所含毒力基因数大于等于3者为APEC阳性菌株。初步应用该方法检测实验室分离保存的23株APEC和79株ANPEC,同时进一步验证了其准确性。结果表明：APEC检出率为100％,ANPEC的检出率亦为100％。以上结果充分说明本研究建立的多重PCR方法特异性强、灵敏度高、简便快捷,可进一步应用于禽类的APEC和ANPEC快速鉴别诊断和APEC的分子流行病学调查。

关键词： APEC ANPEC 多重PCR

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猫细小病毒抗体ELISA检测方法建立与初步应用

猫细小病毒抗体ELISA检测方法建立与初步应用

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：闫文卓周洁胡建华刘铁龙张圆圆赵丽丽陈洪岩陆涛峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 上海实验动物研究中心上海201203 河南省济源市动物卫生监督所河南济源454650

[目的 ]建立猫细小病毒(feline panleukopenia virus,FPV)抗体ELISA检测方法,应用于临床样品中FPV抗体的检测.[方法]利用猫肾传代细胞(CRFK)增殖FPV病毒,回收的培养物经纯化后制备FPV抗原,通过对纯化抗原和山羊抗猫IgG-HRP的最佳工作浓... 详细信息

[目的 ]建立猫细小病毒(feline panleukopenia virus,FPV)抗体ELISA检测方法,应用于临床样品中FPV抗体的检测.[方法]利用猫肾传代细胞(CRFK)增殖FPV病毒,回收的培养物经纯化后制备FPV抗原,通过对纯化抗原和山羊抗猫IgG-HRP的最佳工作浓度进行确定,建立FPV抗体ELISA检测方法,并进行特异性、敏感性、稳定性进行测定.[结果]抗原和二抗的最佳工作浓度分别为5μg/mL和1∶ 6000,批次内和批次间的变异系数分别为8.68％和7.14％,检测临床血清的灵敏度大于1∶5000,且与猫疱疹病毒 1 型(feline herpesvirus 1,FHV-1)和猫杯状病毒(feline calicivurus,FCV)均无交叉反应,与国外试剂盒符合率达到90.7％.结论 ]建立的抗体ELISA方法重复性、稳定性良好,特异性和敏感性良好,可用于猫FPV抗体检测.

关键词：猫细小病毒猫泛白细胞减少综合征 ELISA

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