检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2018年第1期34卷 113-120页

作者：时静张险峰郑永辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 美国密歇根州立大学微生物和分子遗传系天然免疫实验室东兰辛48824

Nef蛋白是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）及其他灵长类动物慢病毒编码的一种附属蛋白,在获得性免疫缺陷综合症（AIDS）疾病进程和病毒的复制过程中起着重要作用。抑制附属蛋白活性的策略可以改善传统抗逆转录病毒方案的疗效,因此深入理... 详细信息

Nef蛋白是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）及其他灵长类动物慢病毒编码的一种附属蛋白,在获得性免疫缺陷综合症（AIDS）疾病进程和病毒的复制过程中起着重要作用。抑制附属蛋白活性的策略可以改善传统抗逆转录病毒方案的疗效,因此深入理解这一附属蛋白的功能和其分子作用机制具有重要意义。Nef蛋白通过三个主要活性调节宿主细胞环境,增强病毒复制。下调细胞表面分子如CD4,MHC-Ⅰ,MHC-Ⅱ等的表达,使病毒逃逸宿主的免疫应答;通过调节T细胞的信号通路降低T细胞的活化,从而营造有利于病毒复制的环境;直接增强新生子代病毒粒子的感染性。这一功能的分子机制直到最近宿主限制性因子丝氨酸转运蛋白（SERINC5）的发现才得以明晰。本文总结了Nef的功能及其增强病毒感染性的最新研究进展,同时也归纳了SERINC5蛋白与Nef蛋白的相互作用的研究报道,为深入了解病毒复制机理,改善HIV-1防治方案提供新的理论线索。

关键词：人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) Nef SERINC5 感染性

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猪免疫调控分子B7-H4的单克隆抗体制备及其在免疫细胞中的表达分析

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中国兽医科学 2018年第5期48卷 545-551页

作者：郭杰刘璐朱可蒙王宁辛九庆刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150069

B7-H4分子是B7家族的成员之一。在人和小鼠的研究显示,该分子对T细胞免疫学功能的发挥具有重要调节作用。但是该分子在猪免疫系统中的功能还没有报道。本研究通过PCR技术扩增到了猪的免疫调控分子B7-H4（pB7-H4）的基因片段,并将其克隆... 详细信息

B7-H4分子是B7家族的成员之一。在人和小鼠的研究显示,该分子对T细胞免疫学功能的发挥具有重要调节作用。但是该分子在猪免疫系统中的功能还没有报道。本研究通过PCR技术扩增到了猪的免疫调控分子B7-H4（pB7-H4）的基因片段,并将其克隆到pET-32a（＋）原核表达载体,获得了pET-32a-pB7-H4。用原核表达并纯化的重组pB7-H4蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA筛选出了1株抗pB7-H4蛋白的单克隆抗体（MAb）杂交瘤细胞株3C8,MAb亚类鉴定结果显示其抗体亚类为IgG1。流式细胞仪分析结果显示,该MAb能特异性结合细胞系上瞬时表达的pB7-H4。利用该单抗进一步分析pB7-H4在猪外周血T淋巴细胞、巨噬细胞和肺泡巨噬细胞上的表达,结果,pB7-H4在肺泡巨噬细胞和外周血巨噬细胞中高效表达,但是在T淋巴细胞中检测不到明显的表达。上述研究结果表明,该单抗的制备为进一步研究pB7-H4的免疫学功能提供了有效工具。

关键词：猪B7-H4 原核表达单克隆抗体免疫细胞流式细胞检测

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猪、鸡与貂源肠外致病性大肠杆菌群型、耐药性与致病性分析

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中国预防兽医学报 2018年第5期40卷 386-391页

作者：许腾林邢桂玲姜成刚刘家森刘大飞姜骞李志杰康洪涛郭东春曲连东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150069

为检测不同动物源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的耐药及致病性差异,本研究从132份鸡、猪和水貂等动物肠道外组织中分离鉴定大肠杆菌,并对分离菌株进行了16S rRNA基因测序、毒力基因检测、药敏试验、O抗原鉴定、系统进化群分析及动物致病... 详细信息

为检测不同动物源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的耐药及致病性差异,本研究从132份鸡、猪和水貂等动物肠道外组织中分离鉴定大肠杆菌,并对分离菌株进行了16S rRNA基因测序、毒力基因检测、药敏试验、O抗原鉴定、系统进化群分析及动物致病性试验。实验结果显示:分离出53株ExPEC,且至少携带特异性毒力基因pap、sfa/foc、afa/dra、iutA、kpsMTII中的两种基因,并携带fimH、ibeA、hlyA、malX、iss、iroN等其它相关毒力基因。53株ExPEC分离株对氯霉素、卡那霉素、头孢噻吩、四环素、多粘菌素B、氨苄青霉素等呈现不同程度的多重耐药性;O抗原主要分布于O1、O2、O8、O11、O38、O78、O120血清型;系统进化群分析结果显示:28株属于A群,19株属于B1群,1株为B2群,5株属于D群。选取20株ExPEC分离菌株按照6×10~6cfu/只对小鼠进行腹腔注射,验证其致病性;并测定ExPEC6、ExPEC42、ExPEC52、ExPEC53菌株对BALB/c小鼠的LD_(50),其结果分别为3.49×10~6cfu/mL、9.49×10~5cfu/mL、9.48×10~6cfu/mL、2.38×10~7cfu/mL。本研究为动物源性ExPEC的预防诊断提供依据,并为下一步研究其致病机理等奠定基础。

关键词：肠外致病性大肠杆菌分离鉴定耐药性致病性

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猪链球菌的分离鉴定及其致病性分子基础研究

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中国预防兽医学报 2018年第2期40卷 96-100页

作者：董志民杨春蕾田向学燕小翠李秀丽张万江刘思国鄢明华天津市畜牧兽医研究所天津西青300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津西青300381 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069

为调查猪源链球菌(***)血清型的流行特点、主要毒力基因的分布及致病力情况,本研究针对来自我国部分地区800份疑似***发病猪的病料样品进行***的分离鉴定、血清型分型、致病力试验及主要毒力基因型检测。研究结果显示,在800份样品中分离... 详细信息

为调查猪源链球菌(***)血清型的流行特点、主要毒力基因的分布及致病力情况,本研究针对来自我国部分地区800份疑似***发病猪的病料样品进行***的分离鉴定、血清型分型、致病力试验及主要毒力基因型检测。研究结果显示,在800份样品中分离到41株***(5.13%);其中,血清型2型或1/2型*** 10株(24.4%),3型6株(14.6%),8型3株(7.3%),9型7株(17.1%),21型1株(2.4%),未定型14株(34.1%);致病力试验结果显示,以1×108 cfu/mL ***菌液接种昆明小鼠,41个分离株中具有致死性的菌株19株,其中6株致死性较强,13株致死性较弱;毒力基因检测结果显示gdh、fbps、orf2、gapdh、sly、ef和mrp基因的检出率分别为100%、82.9%、75.6%、41.5%、39.0%、19.5%和12.2%,以gdh+orf2+fbps+gapdh型(9株)、gdh+orf2+fbps型(8株)和sly+gdh+orf2+fbps+gapdh型(6株)为主要的毒力基因型。本研究结果揭示了我国***各血清型的流行情况,初步探明***致病力的强弱,为深入开展***防控技术研究及其致病机理奠定了基础。

关键词：猪链球菌分离鉴定致病性血清型毒力基因

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Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法二重RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2018年第4期48卷 456-463页

作者：徐丽晶赵丽丽刘海燕王怡平陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了建立一种能同时检测I型鸭肝炎病毒（duck hepatitis virustype I，DHV—I）和鸭瘟病毒（duckplague virus，DPV）的检测方法，根据GrenBank中DHV-I和DPV的基因保守序列．设计合成两对特异性引物，扩增得到DHV—I和DPV片段，大小分别... 详细信息

为了建立一种能同时检测I型鸭肝炎病毒（duck hepatitis virustype I，DHV—I）和鸭瘟病毒（duckplague virus，DPV）的检测方法，根据GrenBank中DHV-I和DPV的基因保守序列．设计合成两对特异性引物，扩增得到DHV—I和DPV片段，大小分别为399bp和232bp。据此建立了双重PCR检测方法，并将反应条件进行了优化。结果显示，该方法特异性强，能同时扩增出DHV—I和DPV目的条带，而对其他常见的水禽病病原的扩增结果均为阴性。该方法灵敏度高，最低能检出5．3PgI型鸭肝炎病毒和2．7pg鸭瘟病毒的RNA或DNA。采用该方法对在江苏省徐州地区所采集的166份鸭肛拭子进行检测，DHV—I阳性率为1．2％：DPV阳性率为26％。同时。利用该方法对建立的DHV—I和DPV雏鸭感染模型的肝组织和肝组织接种的鸭胚尿囊液进行检测，结果均为阳性．与常规PCR和RT—PCR检测结果一致。上述结果表明。本研究建立的一步法二重RT—PCR方法可以用于DHV—I和DPV快速准确的诊断。

关键词： I型鸭肝炎病毒鸭瘟病毒一步法二重RT—PCR

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非洲猪瘟对我国养猪业的影响与防控建议

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中国兽药杂志 2018年第11期52卷 1-4页

作者：仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种高度接触传染性、广泛出血性猪病毒病,死亡率可高达100%,无商品化疫苗可用。自今年8月初我国爆发首例非洲猪瘟疫情以来,截至11月5日,短短三个月时间里,已有14个省累计爆发58起疫情,扑杀生猪近50万头... 详细信息

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种高度接触传染性、广泛出血性猪病毒病,死亡率可高达100%,无商品化疫苗可用。自今年8月初我国爆发首例非洲猪瘟疫情以来,截至11月5日,短短三个月时间里,已有14个省累计爆发58起疫情,扑杀生猪近50万头,直接经济损失数十亿元,给我国养猪业造成了巨大冲击。面对前所未有的非洲猪瘟疫情,我国政府的应对是果断有力的,但也面临种种挑战。本文对我国非洲猪瘟疫情形势及其对相关行业的影响进行了分析,总结了非洲猪瘟防控的重点和难点,并针对目前的形势,提出了遏制非洲猪瘟疫情进一步蔓延的建议和对策。

关键词：非洲猪瘟养猪业防控

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禽网状内皮组织增生症病毒感染鸡胚成纤维细胞的转录组学分析

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中国家禽 2018年第14期40卷 19-24页

作者：王静杨彦超李凯高立王永强张艳萍崔红玉刘长军祁小乐高玉龙潘青王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

为了更好地揭示禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染致瘤及免疫抑制的机制,利用Illumina HiSeq^(TM)技术对REV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后宿主细胞的转录组学进行了全面分析,鉴定REV感染24 h宿主差异表达基因1 147个,感染120 h差异表达基... 详细信息

为了更好地揭示禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染致瘤及免疫抑制的机制,利用Illumina HiSeq^(TM)技术对REV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后宿主细胞的转录组学进行了全面分析,鉴定REV感染24 h宿主差异表达基因1 147个,感染120 h差异表达基因2 254个。通过差异表达基因GO分析和KEGG分析,发现TLRs、NLRs、RLRs等模式识别受体信号通路、WNT信号通路、JAK-STAT信号通路等在REV的致瘤及免疫调控机制中发挥重要作用,而且REV感染后可以诱发宿主的炎症反应,进一步加强REV的致病性及与其他病原的混合感染。结果对揭示REV的致病、致瘤及免疫抑制的分子机制提供了新的信息具有重要意义。

关键词： REV CEF 致瘤免疫抑制转录组学分析

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伏马毒素B_1适配体的筛选及其快速定量检测方法的建立

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动物营养学报 2018年第9期30卷 3740-3750页

作者：周妍刁晨曦张圆圆陆涛峰赵丽丽陈洪岩东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

本研究旨在获得伏马毒素B1特异性适配体并利用其和胶体金的作用建立伏马毒素B1的快速检测方法。通过非固定靶标的指数富集配体系统进化技术筛选获得伏马毒素B1的适配体,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定所获适配体的亲和力和特异性... 详细信息

本研究旨在获得伏马毒素B1特异性适配体并利用其和胶体金的作用建立伏马毒素B1的快速检测方法。通过非固定靶标的指数富集配体系统进化技术筛选获得伏马毒素B1的适配体,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定所获适配体的亲和力和特异性,建立基于适配体的胶体金快速定量检测方法。结果表明:筛选得到的伏马毒素B1适配体F102亲和力解离常数为(42.1±4.0)nmol/L;建立的胶体金检测方法简便、快速、特异性强;样品检测结果与液相色谱结果的相对误差低于15.7%。因此,本研究利用筛选得到的适配体建立了可用于谷物和饲料中伏马毒素B1含量的快速定量检测方法。

关键词：非固定靶标法 SELEX技术伏马毒素B1 适配体胶体金

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鉴别禽致病性大肠杆菌与禽非致病性大肠杆菌的多重PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2018年第11期48卷 1358-1364页

作者：王怡平孙畅赵丽丽陈洪岩中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011

为建立一种快速鉴别禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）与禽非致病性大肠杆菌（avian non-pathogenic Escherichia coli,ANPEC）的多重PCR检测方法,本研究针对APEC的iss、cvaC、irp2、iucD、iroN和tsh共6个毒力基因的序列进行分析,分别设计合成6对特异性引物,通过正交组合法优化引物比例和梯度法确定最佳退火温度,并进一步完善方法的敏感性、特异性和判定标准,建立了一种快速灵敏检测APEC的多重PCR检测方法,并初步应用该方法对本实验室102株大肠杆菌样本进行鉴定和分群。结果显示,该多重PCR方法对菌液最低检测浓度为5×10^7CFU/m L;对其他种属的4株革兰阳性菌和5株革兰阴性菌无扩增。检测实验室保存的鸭源APEC和ANPEC各10株,通过比较两者所含毒力基因的分布情况及数量,建立了多重PCR判定标准即所含毒力基因数大于等于3者为APEC阳性菌株。初步应用该方法检测实验室分离保存的23株APEC和79株ANPEC,同时进一步验证了其准确性。结果表明,APEC检出率为100%,ANPEC的检出率亦为100%。以上结果充分说明本研究建立的多重PCR特异性强、灵敏度高、简便快捷,可进一步应用于禽类的APEC与ANPEC的快速鉴别诊断和APEC的分子流行病学调查。

关键词：禽致病性大肠杆菌禽非致病性大肠杆菌多重PCR

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鸭γ干扰素在体外细胞中抗鸭肠炎病毒作用的研究

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中国兽医科学 2018年第11期48卷 1365-1373页

作者：李思琪尹海畅王怡平金建丽陈洪岩赵丽丽中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011

为初步探究鸭γ干扰素（IFNγ）抗病毒作用,本研究从鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast,DEF）中扩增出鸭γ干扰素（IFNγ） cDNA。将鸭IFNγ基因分别与真核表达载体PCAGG及原核表达载体p ET-32a连接,获得重组质粒PCAGG-IFNγ及pET... 详细信息

为初步探究鸭γ干扰素（IFNγ）抗病毒作用,本研究从鸭胚成纤维细胞（duck embryo fibroblast,DEF）中扩增出鸭γ干扰素（IFNγ） cDNA。将鸭IFNγ基因分别与真核表达载体PCAGG及原核表达载体p ET-32a连接,获得重组质粒PCAGG-IFNγ及pET-32a-IFNγ。转染PCAGG-IFNγ于DEF细胞后第24小时,接种鸭肠炎病毒（duck enteritis virus,DEV）。同时将pET-32a-IFNγ在大肠杆菌原核表达系统中进行蛋白表达,并用纯化产物处理DEF细胞,处理后第24小时接种DEV,分别采用Western-blot、TCID50测定方法和荧光定量PCR检测重组蛋白IFNγ对DEV复制的影响,并检测细胞中相关干扰素刺激因子（interferonstimulated genes,ISGs）基因包括抗黏液病毒基因（Myxovirus resistance,Mx）、泛素样2′-5′寡聚腺苷酸合成酶基因（2′-5′oligoadenylatesynthetases-like,OASL）、DEAD框蛋白50基因（DEAD-box protein 50,DDX50）的表达情况。结果发现,无论是真核表达的还是原核表达的重组IFNγ均能抑制DEV的复制,并引起ISGs基因表达的上调。本研究结果为进一步探索鸭IFNγ的抗病毒机制提供了基础数据。

关键词：鸭γ干扰素鸭胚成纤维细胞鸭肠炎病毒

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