检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2018年第12期39卷 49-53页

作者：牛胜李欣张宁宁官保张鼎 Ali Raza Jahejo 马海利郝卫芳高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳高荣琨毕玉海韩凌霞田文霞山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 太原市动物疫病预防控制中心山西太原030024 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了探究在感染马立克病病毒(MDV)后羽髓中病毒增殖情况以及红细胞中免疫相关因子的免疫应答反应,将4日龄雏鸡腹腔注射MDV超强毒株MD5,在攻毒后不同时间进行羽毛和血样采集,通过实时荧光定量PCR检测羽髓病毒载量和红细胞中6种免疫相关... 详细信息

为了探究在感染马立克病病毒(MDV)后羽髓中病毒增殖情况以及红细胞中免疫相关因子的免疫应答反应,将4日龄雏鸡腹腔注射MDV超强毒株MD5,在攻毒后不同时间进行羽毛和血样采集,通过实时荧光定量PCR检测羽髓病毒载量和红细胞中6种免疫相关基因的mRNA表达水平。结果显示,在攻毒后第7天检测到MDV拷贝,并且14天检测到的拷贝数显著高于其他检测时间;与第14天对照组相比,攻毒组COX2的表达显著上调(P<0.05),而在第22天COX2的表达整体高于第14天(P<0.05);在第14和22天,PTGER4、HPGDS和GSTA3在攻毒组中的表达量显著低于对照组(P<0.05);与之相反,在第14天和第22天,PTGR1在攻毒组中的表达量显著高于对照组(P<0.05);第14天攻毒组的Ex-FABP表达水平显著低于对照组,而在第22天攻毒组显著高于对照组(P<0.05)。这表明感染MDV后红细胞中6种免疫基因发生显著的免疫应答,并且红细胞可能通过调节相关的免疫反应而在MDV感染过程中发挥一定的免疫调控作用。

关键词：红细胞马立克病病毒免疫转录表达

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畜禽疫病防控用SPF猪的开发

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实验动物与比较医学 2018年第4期38卷 245-249页

作者：高彩霞辛畅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文就SPF猪在畜禽疫病防控研究中的重要性和国内外研究现状进行了阐述,分析了目前存在的问题,介绍了培育标准化SPF猪种群常用的方法,并探讨了SPF猪的应用前景,旨在为畜禽疫病防控研究用实验动物的开发提供一定的理论指导。

关键词：畜禽疫病防控 SPF猪开发

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鸭坦布苏病毒E蛋白特异性抗原表位鉴定及Epitope-ELISA血清学诊断方法建立

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畜牧兽医学报 2017年第10期48卷 1958-1968页

作者：李晨曦白小飞邵周伍林张青山刘明张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

旨在建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)的特异性血清学诊断方法。本研究以纯化的单克隆抗体1A5为固相筛选分子,利用噬菌体展示技术鉴定DTMUV囊膜(E)蛋白的特异性抗原表位,并利用DNAStar分析抗原表位序列在DTMUV中保守性和与其他黄病毒的E蛋白相... 详细信息

旨在建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)的特异性血清学诊断方法。本研究以纯化的单克隆抗体1A5为固相筛选分子,利用噬菌体展示技术鉴定DTMUV囊膜(E)蛋白的特异性抗原表位,并利用DNAStar分析抗原表位序列在DTMUV中保守性和与其他黄病毒的E蛋白相应位点的氨基酸序列相似性。结果成功筛选到DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位_(87)YAEYI_(91),该抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点差异,而与其他黄病毒E蛋白相应位点的氨基酸序列不具有相似性。Dot-Blotting结果表明表位_(87)YAEYI_(91)与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,而与JEV、DENV、WNV等黄病毒阳性血清间不出现交叉反应,可见抗原表位_(87)YAEYI_(91)为DTMUV所特有的抗原表位。利用DTMUV特异性抗原表位87YAEYI_(91)建立Epitope-ELISA血清学诊断方法并对126份鸭血清样品进行检测,以中和试验作为标准进行比较,结果显示Epitope-ELISA检测方法的相对特异性为100%,相对敏感度为96%,并且Epitope-ELISA与其他黄病毒血清间不出现交叉反应性,表明本研究建立的Epitope-ELISA检测方法是一种特异的、灵敏的ELISA血清学诊断方法。

关键词：鸭坦布苏病毒抗原表位交叉反应性 Epitope-ELISA

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MHC单倍体型无特定病原体鸭的培育

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实验动物科学 2018年第4期35卷 14-20页

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭。方法以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别... 详细信息

目的培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭。方法以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别利用Tap1基因组短串联重复序列(STR)、TAP2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列的基因型分型,连续选育主要组织相容性复合体(MHC)单倍型SPF鸭。结果 F0代和F1代鸭的STR结果完全一致;F2和F3代鸭的Tap1和Tap2基因组序列完全纯合。连续6个世代的Tap2基因组序列分析,B3群鸭有2个位点发生突变,B1、B2和B4遗传学稳定。结论成功建立了4个MHC单倍体型SPF鸭群B1、B2、B3和B4,为深入开展鸭的免疫遗传学研究提供了实验动物支撑条件。

关键词：鸭主要组织相容性复合体无特定病原体单倍体型抗原处理相关转运体

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中国H5亚型禽流感病毒流行现状

中国H5亚型禽流感病毒流行现状

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中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会

作者：邓国华施建忠崔鹏飞陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室

引言H5亚型高致病性禽流感病毒不仅对养禽业的危害巨大,而且还严重威胁着人类生命健康。为全面了解和掌握我国H5亚型高致病性禽流感病毒的生态学和变异情况,国家禽流感参考实验室自2008年开始在全国范围内对重点家禽养殖区域系统开展了... 详细信息

引言H5亚型高致病性禽流感病毒不仅对养禽业的危害巨大,而且还严重威胁着人类生命健康。为全面了解和掌握我国H5亚型高致病性禽流感病毒的生态学和变异情况,国家禽流感参考实验室自2008年开始在全国范围内对重点家禽养殖区域系统开展了禽流感流行病学调查研究工作。材料与方法采集家禽的咽喉拭子和泄殖腔拭子,接种9～11日龄鸡胚进行病毒分离。提取血凝抑制鉴定为H5

关键词：禽流感病毒流行现状

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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的新城疫病毒感染性克隆的构建及病毒拯救

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中国兽医学报 2018年第5期38卷 841-845页

作者：张赫南福龙鲁会军解长占张萍张金勇庄忻雨田明尧步志高金宁一解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林大学动物医学学院吉林长春130062 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

应用反向遗传技术对新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）LaSota株感染性克隆PBRN—FL质粒进行操作，构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）ORF5基因的重组质粒LaSota-ORF5并进行病毒拯救及鉴定。依据GenBank所发表的欧洲型PRRSVLV株ORF5序列，设计引物扩增0RF5片段，通过PBRN—FL质粒上P和M基因间的PmeI酶切住点插入目的片段，构建重组质粒LaSota—ORF5。采用磷酸钙转染法将重组质粒和PCI—NP、PCI-P、PCI—L等3种辅助质粒共转染BSR—T7／5／细胞拯救病毒并对其分别进行RT-PCR、间接免疫荧光（IFA）和Western blot（WB）试验鉴定。结果显示：拯救病毒的RT-PCR产物测序结果正确，IFA出现绿色荧光，WB试验条带大小符合预期，证明GP5蛋白有效表达。结果表明：成功构建并拯救得到重组病毒rLaSota-GP5，为制备表达PRRSVGP5蛋白的重组NDV疫苗奠定基础。

关键词：新城疫病毒 LaSota GP5蛋白病毒拯救

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兽用疫苗中替代方法的研究进展

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实验动物科学 2018年第1期35卷 67-71页

作者：王兴童韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文介绍了兽用疫苗效力检验和安全检验中替代方法的应用及研究进展,并提出适合建立替代方法的兽用疫苗,以期为我国兽用疫苗替代方法研究提供思路。

关键词：兽用疫苗安全性检验效力检验替代

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弓形虫ATG6基因敲除虫株的构建及其生长特性鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第11期39卷 886-890,896页

作者：李昭然曹世诺王铭陈运通贾洪林中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成。为研究弓形虫ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对Tg ATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-m ... 详细信息

酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成。为研究弓形虫ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对Tg ATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-m Cherry)虫株,以检测Tg ATG6的亚细胞定位情况。通过CRISPR/Cas9技术制备Tg ATG6基因缺失虫株,采用流式细胞术对该虫株的生长特性进行检测。实验结果显示,Tg ATG6基因在进化关系上与植物来源的ATG6同源关系较近。Tg ATG6在虫体内呈弥散分布,经16 h饥饿诱导后,该蛋白在弓形虫体内发生聚集。经序列分析显示,成功获得了两种Tg ATG6基因缺失虫株(ΔTg ATG6-1和ΔTg ATG6-2)。在ΔTg ATG6-2虫株中,Tg ATG6基因开放阅读框的593~612位点之间插入了226 bp外源序列,而在ΔTg ATG6-2中,不能够有效扩增靶序列,表明两种突变虫株的Tg ATG6基因均被有效插入失活。此外,该基因的缺失可能影响了虫株侵入宿主细胞的能力。Tg ATG6基因缺失株的成功制备为进一步研究Tg ATG6蛋白功能奠定了基础。

关键词：敲除 ATG6 自噬弓形虫

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猪δ冠状病毒M蛋白的原核表达、纯化与鉴定

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黑龙江八一农垦大学学报 2018年第5期30卷 41-45页

作者：魏姗石达陈建飞冯力孙东波黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

δ冠状病毒是一种可以感染哺乳动物和鸟类的新型冠状病毒,其中,猪δ冠状病毒可以引发仔猪的呕吐、腹泻、脱水,甚至死亡,给养猪业造成了巨大的损失。为了获得猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)M基因重组蛋白,试验克隆了PDCoV... 详细信息

δ冠状病毒是一种可以感染哺乳动物和鸟类的新型冠状病毒,其中,猪δ冠状病毒可以引发仔猪的呕吐、腹泻、脱水,甚至死亡,给养猪业造成了巨大的损失。为了获得猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)M基因重组蛋白,试验克隆了PDCoV NH毒株的M基因,并连接至pET-32a原核表达载体,构建了PDCoV M基因重组质粒(pET-32a-M),将pET-32aM重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)后,利用1 mM浓度IPTG进行诱导表达,进一步对表达的PDCoV重组M蛋白进行纯化与鉴定。结果显示,以PDCoV NH毒株病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出约654 bp的M基因,与预期大小相符;SDSPAGE电泳结果显示,PDCoV M基因在大肠杆菌BL21(DE3)中成功获得表达,表达的重组M蛋白大小为42 kD,与预期大小相符;通过western blot进行鉴定,结果显示,纯化的重组M蛋白能与PDCoV阳性血清发生反应,具有良好的抗原性。研究成功表达了PDCoV M蛋白,为PDCoV的进一步研究奠定了基础。

关键词：猪δ冠状病毒 M蛋白基因表达蛋白纯化免疫印迹

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牛传染性鼻气管炎病毒VP8蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 225-228页

作者：杨婷周跃辉朱远茂宋文凤马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为I... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为IgG1/κ。间接免疫荧光试验表明,2株MAb与IBRV呈特异性反应。利用肽扫描技术对MAb进行抗原表位鉴定,结果表明MAb3C2的抗原表位为^(138)PHRSLLERTA^(147),MAb1F5的抗原表位为^(183)GGGQEPG^(189),2株MAb针对的抗原表位在不同的IBRV分离株中高度保守。本研究为VP8蛋白的结构与功能的进一步分析及IBRV的检测奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 VP8蛋白单克隆抗体抗原表位

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