检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2022年第6期44卷 591-597页

作者：王冰吴红霞李淼高莹袁梦淇仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

伪狂犬病病毒(PRV)的天然宿主是猪,但是能够感染多种哺乳动物。PRV是一种嗜神经性α疱疹病毒,小鼠感染PRV后会产生严重的神经症状和神经炎症。为了探究小鼠感染PRV后其背根神经节(DRG)的天然免疫应答情况,本研究将PRV TJ株以10^(6)pfu... 详细信息

伪狂犬病病毒(PRV)的天然宿主是猪,但是能够感染多种哺乳动物。PRV是一种嗜神经性α疱疹病毒,小鼠感染PRV后会产生严重的神经症状和神经炎症。为了探究小鼠感染PRV后其背根神经节(DRG)的天然免疫应答情况,本研究将PRV TJ株以10^(6)pfu剂量接种小鼠,在濒死期剖杀小鼠,取其DRG进行转录组测序,并使用DESeq2软件对测序结果分析,结果显示,与对照组相比,PRV感染小鼠的DRG内共有6 502条基因的转录水平发生改变,其中转录水平升高的基因有3 703条,降低的基因有2 799条(差异倍数>2,且P≤0.05)。利用clusterProfiler R软件对发生差异转录的基因进行了KEGG分析,结果显示,转录水平发生差异的基因参与细胞内20种信号通路途径,其中12条信号通路与天然免疫反应有关,提示PRV感染小鼠后会激活DRG内广泛的天然免疫反应。差异转录基因数量最多的5条天然免疫信号通路分别是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、细胞凋亡(Apoptosis)信号通路和信号转导及转录激活因子(JAK-STAT)信号通路,上述天然免疫反应通路可能在PRV诱导的神经炎症方面有重要作用。本研究随机选择了10条转录水平存在差异的基因,采用荧光定量PCR验证,结果显示其变化趋势均与转录组测序数据一致。本研究首次分析了PRV感染小鼠DRG内转录组的变化,为研究PRV感染后诱导宿主的天然免疫反应相关信号通路提供了参考,并为PRV致病机制等相关研究奠定了基础。

关键词：伪狂犬病病毒小鼠背根神经节转录组测序差异转录基因

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2020-2021年中国部分活禽市场中classⅠ类新城疫病毒的分子特征遗传演化和耐热性分析

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中国兽医科学 2023年第4期53卷 491-498页

作者：张春玮孙军峰张智颖陈林娜刘添仪韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

对2020—2021年期间分离自10个省(自治区)活禽市场不同宿主与部分环境中的新城疫病毒(NDV)进行鉴定,获得了31株classⅠ类NDV。F基因分子特征分析显示,classⅠ类NDV F基因中起始密码子存在突变,导致产生不同长度的编码序列。氨基酸序列... 详细信息

对2020—2021年期间分离自10个省(自治区)活禽市场不同宿主与部分环境中的新城疫病毒(NDV)进行鉴定,获得了31株classⅠ类NDV。F基因分子特征分析显示,classⅠ类NDV F基因中起始密码子存在突变,导致产生不同长度的编码序列。氨基酸序列分析结果显示,大部分毒株的F蛋白具有典型的弱毒株裂解位点基序,但个别毒株的裂解位点存在特征性的突变。F蛋白中融合肽、N-连接的糖基化位点、中和表位以及七肽重复区域在这31个毒株之间高度保守,而信号肽区域中存在众多的氨基酸替换。HN蛋白中仅N-连接的糖基化位点在31个毒株之间保守,中和表位和七肽重复区域均存在氨基酸替换。此外,首次发现了HN编码区长度为1728 nt的突变毒株。遗传进化分析显示,与其他国家和地区的毒株不同,我国的classⅠ类NDV形成了独特的进化分支,即基因亚型1.1.2。耐热性测定结果显示,classⅠ类NDV分离株表现出不同程度的耐热特性。本研究结果为我国classⅠ类NDV的遗传变异和生物学特性研究奠定了基础。

关键词：新城疫病毒分子特征遗传进化热稳定性

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全局调控因子FNR对产肠毒素大肠杆菌生物学特性影响的研究

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 977-983页

作者：杨延毛曌江丰伟李干武中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究全局调控因子富马酸盐和硝酸盐减少调控蛋白(FNR)对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)生物学特性的影响,本研究通过Red同源重组方法构建了ETEC MD724-020菌株fnr基因的缺失株Δfnr及回补株Δfnr(pfnr),分别将ETEC野生株(WT)、Δfnr以及Δfnr... 详细信息

为研究全局调控因子富马酸盐和硝酸盐减少调控蛋白(FNR)对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)生物学特性的影响,本研究通过Red同源重组方法构建了ETEC MD724-020菌株fnr基因的缺失株Δfnr及回补株Δfnr(pfnr),分别将ETEC野生株(WT)、Δfnr以及Δfnr(pfnr)同时接种于TSB液体培养基培养,测定fnr基因缺失前后ETEC的生长曲线,结果显示,与野生株相比,缺失fnr基因后其生长速率无明显变化。将3株菌分别接种于TSB固体培养基,通过测定游走直径比较分析野生株、缺失株和回补株的运动性,结果显示,与野生株相比,缺失株Δfnr的运动能力显著降低(P<0.05)。采用结晶紫法检测3株菌生物被膜(BF)形成能力,结果显示,相比WT和Δfnr(pfnr)株,缺失株Δfnr BF形成能力极显著下降(P<0.001)。将3株菌分别于含10%绵羊血的TSA平板上划线培养,进行溶血性试验,结果显示,相比WT和Δfnr(pfnr)株,Δfnr株溶血圈较野生株显著缩小。将3株菌分别与猪小肠上皮细胞IPEC-J2互作2 h后,通过平板计数法分析各菌株对该细胞的黏附能力,结果显示,与野生株相比,缺失株Δfnr对IPEC-J2细胞的黏附能力显著减弱(P<0.05)。提取上述互作后未黏附细菌的RNA,通过荧光定量PCR检测fnr基因缺失后对致病性ETEC相关毒力基因转录水平的影响,结果显示,与野生株相比,Δfnr株中eaeH、eltA和hlyA基因的转录水平均极显著下降(P<0.001)。本研究首次对全局调控因子FNR影响ETEC的运动性、溶血性、BF形成能力等生物学特性进行了研究,为进一步开展ETEC致病机理的研究提供了参考依据。

关键词：产肠毒素大肠杆菌 FNR 生物学特性

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云芝葡聚糖对非洲猪瘟病毒的体外抑制作用

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中国兽医学报 2022年第11期42卷 2133-2138,2144页

作者：刘欣媛孙元李素李连峰仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

研究云芝葡聚糖抑制非洲猪瘟病毒(ASFV)感染效果并初步探索其作用机制。利用CCK-8试剂检测云芝葡聚糖对原代猪肺泡巨噬细胞(PAM)的毒性并计算半数细胞毒性浓度(CC50);ASFV感染细胞,检测不同质量浓度云芝葡聚糖抗ASFV感染的剂量依赖效应... 详细信息

研究云芝葡聚糖抑制非洲猪瘟病毒(ASFV)感染效果并初步探索其作用机制。利用CCK-8试剂检测云芝葡聚糖对原代猪肺泡巨噬细胞(PAM)的毒性并计算半数细胞毒性浓度(CC50);ASFV感染细胞,检测不同质量浓度云芝葡聚糖抗ASFV感染的剂量依赖效应,并计算半数抑制浓度(IC_(50));将25 mg/L的云芝葡聚糖与病毒悬液孵育处理,稀释后加入PAM,评价云芝葡聚糖体外直接杀灭ASFV的效果;同时在ASFV复制周期的不同时间点利用云芝葡聚糖处理细胞,确定其抗ASFV效果最显著的效应阶段;通过qPCR检测抗病毒相关细胞因子转录水平来初探其抗病毒机制。云芝葡聚糖的毒性较弱(CC50为270.1000 mg/L),具有一定的抗病毒效果(IC_(50)为0.9575 mg/L),其不能直接杀灭病毒;在ASFV感染前6~12 h使用云芝葡聚糖处理细胞,其抑制病毒复制的效果最为显著,且PAM的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α等细胞因子的mRNA水平显著升高。

关键词：云芝葡聚糖非洲猪瘟病毒抗病毒药物细胞因子

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抗炎免疫调节活性益生菌的体外筛选及其相关组分的初步鉴定

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中国预防兽医学报 2022年第12期44卷 1283-1289页

作者：米洁兰王志浩王婷婷刘长军祁小乐张艳萍李凯高立潘青王笑梅高玉龙崔红玉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为筛选出具有抗炎、抗感染免疫调节活性的益生菌并探究益生菌免疫调节活性的主要成分,本研究分别以10株益生菌Lac.1~Lac.10作为候选菌株,将益生菌的活菌体、灭活菌体、菌体裂解物分别作用于由脂多糖+尼日利亚菌素(LPS+Nigericin)诱导的... 详细信息

为筛选出具有抗炎、抗感染免疫调节活性的益生菌并探究益生菌免疫调节活性的主要成分,本研究分别以10株益生菌Lac.1~Lac.10作为候选菌株,将益生菌的活菌体、灭活菌体、菌体裂解物分别作用于由脂多糖+尼日利亚菌素(LPS+Nigericin)诱导的急性炎症巨噬细胞模型及NF-κB和IRF信号通路报告细胞系J774-DualTM巨噬细胞,经荧光定量PCR检测细胞因子Il-1β和Il-10 mRNA的转录水平,通过检测报告基因SEAP和Lucia荧光素酶的活性分析NF-κB和干扰素调节因子(IRF)信号通路的激活情况。结果显示,在排除发酵液中MRS培养基干扰的情况下,益生菌株Lac.5活菌体能够极显著下调巨噬细胞炎症模型下Il-1β mRNA的转录水平(P<0.0001)、极显著上调Il-10 m RNA的转录水平(P<0.0001),并且能够极显著激活巨噬细胞的NF-κB和IRF信号通路(P<0.0001),进一步将益生菌Lac.5活菌体热灭活和超声破碎后显示,益生菌Lac.5灭活菌体和菌体裂解物的免疫调节活性均显著降低,仅益生菌Lac.5活菌体组分起到抗炎、抗感染的免疫调节活性。综上所述,本研究筛选出一株具有抗炎、抗感染的免疫调节活性的益生菌株Lac.5,并确认了其活菌体为免疫调节组分,对功能益生菌的筛选和新型益生菌治疗制剂的开发具有重要意义。

关键词：益生菌抗炎免疫调节 NF-κB信号通路 IRF信号通路

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H5亚型2.3.4.4分支禽流感病毒HA基因重组质粒的免疫保护效力研究

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中国预防兽医学报 2022年第1期44卷 53-58,79页

作者：李炯颉梁真洁陈普成曾显营柳金雄邓国华姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研制H5亚型禽流感病毒(AIV)流行株的DNA疫苗,本研究将目前流行的H5亚型2.3.4.4分支AIV代表株A/Duck/Guizhou/S4184/2017(H5N6)[简称DK/GZ/S4184/2017(H5N6)]的HA基因经密码子优化后克隆至载体pCAGGs中构建重组质粒pCA-S4184,经PCR和测序鉴定正确后转染293T细胞,利用间接免疫荧光试验和western blot鉴定。结果显示,该HA基因可以在293T细胞中瞬时表达。将15μg/只的重组质粒pCA-S4184经肌肉注射免疫3周龄SPF鸡,3周后以相同的剂量加强免疫,1周后再通过滴鼻途径分别以10^(5)EID_(50)/0.1 mL/只的同源高致病性AIV(HPAIV)DK/GZ/S4184/2017(H5N6)株和同分支异源HPAIV DK/GD/S1110/2019(H5N6)、DK/GX/1/2018(H5N6)、DK/HuN/SE0110/2018(H5N6)株攻毒,首免及攻毒后每周采血,检测每组鸡的HI抗体水平。在攻毒后14 d的观察期内每天记录各组鸡的发病和死亡情况,攻毒后第3 d、5 d和7 d采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子进行病毒的分离及其滴度的测定。结果显示,加强免疫后各组鸡的平均HI抗体滴度为1:8~1:11,攻毒后HI抗体效价均显著增加;pCA-S4184可以对SPF鸡提供抵抗致死性同源病毒和同分支异源病毒攻击的能力,保护率达到100%,且能显著降低SPF鸡的排毒量甚至不排毒。随后以15μg/只的pCA-S4184两次免疫3周龄SPF鸡,免疫后每隔2周采血检测HI抗体的动态消长规律并在首免后第12周和24周,分别随机选取8只免疫鸡和8只对照鸡通过滴鼻途径以10^(5)EID_(50)/0.1 mL/只感染同源HPAIV DK/GZ/S4184/2017(H5N6)株,并在攻毒后第3 d、第5 d和第7 d采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子,分离病毒并测其滴度,以评估该重组质粒在免疫持续期间所诱导的免疫保护效果。结果显示,重组质粒仍可以使免疫鸡完全抵抗同源病毒的攻击。本研究为重组质粒pCA-S4184作为防控H5亚型2.3.4.4分支禽流感的候选DNA疫苗提供了实验依据。

关键词： DNA疫苗 2.3.4.4分支禽流感病毒免疫效力评估

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H4N6亚型禽流感病毒的进化和生物学特性分析

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中国预防兽医学报 2022年第2期44卷 113-118页

作者：庄艺超孟飞邓国华施建忠张亚萍赵聪慧陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

H4N6亚型禽流感病毒(AIV)在全球多个地区的多种动物和鸟类中存在,为了解其对动物和人类健康的潜在威胁,本研究对H4N6亚型AIV A/chicken/Shanxi/S1452/2018(H4N6)(CK/SX/S1452/2018)株进行了病毒全基因组测序和遗传进化分析,结果显示该... 详细信息

H4N6亚型禽流感病毒(AIV)在全球多个地区的多种动物和鸟类中存在,为了解其对动物和人类健康的潜在威胁,本研究对H4N6亚型AIV A/chicken/Shanxi/S1452/2018(H4N6)(CK/SX/S1452/2018)株进行了病毒全基因组测序和遗传进化分析,结果显示该病毒具有明显的遗传多样性,其内部基因与鸭或水鸟体内分离的H2N8、H3N3、H3N8、H4N8或H7N3等亚型AIV的相关基因高度同源。HA蛋白存在T^(160)A突变,并且碱性裂解位点基序仅有一个碱性氨基酸,符合低致病性AIV分子特征。通过固相结合ELISA分析CK/SX/S1452/2018病毒株的受体结合特性,结果显示该病毒具有结合禽型α-2,3和人型α-2,6两种唾液酸受体的能力。以10^(6) EID_(50)/50μL剂量经鼻腔感染小鼠进行小鼠感染性评估实验,结果显示该病毒株可未经预先适应即可直接感染小鼠,并在小鼠鼻甲和肺脏中有效复制。以上研究结果对全面了解H4N6亚型AIV的生物学特性及其对公共卫生风险有重要意义,为对该亚型AIV流行病学的持续监测和对其感染防控措施的拟定提供了数据支持。

关键词：禽流感病毒 H4N6亚型遗传进化受体结合特性小鼠

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瑞德西韦在体外抑制猪流行性腹泻病毒复制的研究

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中国预防兽医学报 2022年第8期44卷 810-816页

作者：王一铭刘建波冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为探究核苷类药物瑞德西韦(Remdesivir)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的影响,本研究先将不同浓度(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)的瑞德西韦加入Vero E6细胞中,通过测定OD_(450nm)值计算细胞存活... 详细信息

为探究核苷类药物瑞德西韦(Remdesivir)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的影响,本研究先将不同浓度(1μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)的瑞德西韦加入Vero E6细胞中,通过测定OD_(450nm)值计算细胞存活率,评估瑞德西韦对Vero E6细胞的毒性。结果显示,低于20μmol/L的瑞德西韦对细胞几乎无毒性。分别将不同浓度(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L、32μmol/L)的瑞德西韦与PEDV(MOI 0.1)混匀后加入Vero E6细胞,24 h后通过间接免疫荧光实验(IFA)、荧光定量PCR、western blot、取细胞上清测定TCID_(50)检测瑞德西韦对PEDV复制的影响。结果显示,瑞德西韦能够抑制PEDV的复制,瑞德西韦的浓度越高,抑制效果越好,16μmol/L的瑞德西韦能够完全抑制PEDV的复制。计算得出瑞德西韦的半数有效浓度(EC_(50))为11.97μmol/L。将11.97μmol/L的瑞德西韦与PEDV(MOI 0.1)混匀后加入Vero E6细胞,分别在4 h、12 h、20 h、24 h固定细胞,通过IFA、荧光定量PCR、western blot检测瑞德西韦对PEDV复制的影响。结果显示,瑞德西韦在各个时间点均能够抑制PEDV的复制,整个实验过程中均保持良好的抑制效果。将16μmol/L的瑞德西韦与PEDV(MOI 0.1)以不同给药方式接种Vero E6细胞,24 h后通过IFA、western blot、TCID_(50)检测瑞德西韦的最佳给药方式。结果显示,最佳的给药方式为治疗性给药即接种PEDV后给药。上述结果表明瑞德西韦可以在体外抑制PEDV的感染,本研究探究了瑞德西韦在Vero E6细胞中对PEDV基因组复制及蛋白表达的影响,为临床治疗PEDV感染提供新的参考依据。

关键词：瑞德西韦猪流行性腹泻病毒核苷类似物抗病毒活性

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细胞源禽流感病毒三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株、H7N9 H7-Re3株)免疫效力研究

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 295-300页

作者：刘艳晶潘舒心麻琦陈晓涵邓国华施建忠包红梅田国彬曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为评估重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(细胞源,H5N1 Re-11株+Re-12株、H7N9 H7-Re3株)的免疫效力及对近期分离的H5和H7禽流感病毒(AIV)的免疫保护效果,本研究将3批疫苗以0.3 mL/只接种3周龄SPF鸡,疫苗接种后3周采集血清,检测针对H5... 详细信息

为评估重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(细胞源,H5N1 Re-11株+Re-12株、H7N9 H7-Re3株)的免疫效力及对近期分离的H5和H7禽流感病毒(AIV)的免疫保护效果,本研究将3批疫苗以0.3 mL/只接种3周龄SPF鸡,疫苗接种后3周采集血清,检测针对H5亚型Re-11株、Re-12株和H7亚型H7-Re3株AIV的HI抗体效价;免疫后3周,以鼻腔感染的方式分别感染效力检验毒株和近期监测到的H5N1、H5N6和H7亚型AIV,进行攻毒效力试验。结果显示,3批疫苗接种SPF鸡3周时,血清中针对Re-11株、Re-12株和H7-Re3株抗原的平均HI抗体效价均在7.7log2~8.3log2,对照组鸡血清HI抗体均为阴性;分别以100 CLD50攻击H5亚型2.3.4.4h分支、2.3.2.1d分支AIV和H7N9亚型AIV效力检验毒株后14 d内,对照组鸡全部发病死亡且排毒,3批次疫苗免疫组鸡均不发病、不排毒、不死亡,获得完全保护。对近期分离H5和H7亚型AIV的免疫保护效力试验结果显示,接种0.3 mL/只疫苗3周的SPF鸡血清中针对3种抗原的平均HI抗体效价均在8log2左右。分别以105EID50攻击2019年分离的1株H5N6亚型、1株H5N1分离株、2株H7N9亚型AIV及2018年分离的H7N2亚型AIV后14 d内,对照组SPF鸡全部发病死亡,所有免疫组鸡均获得100%免疫保护。以上结果表明,细胞源重组AIV(H5+H7)三价灭活疫苗具有良好的免疫原性,能够完全抵御近期监测到的H7N9亚型AIV及H5N1和H5N6亚型AIV的攻击。本研究为细胞源AIV(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株、H7N9 H7-Re3株)的研发和应用提供了依据。

关键词：禽流感 H5+H7 细胞源三价疫苗鸡免疫效力

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CRISPR-Cas12a在病原快速检测中的应用

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中国兽医科学 2022年第8期52卷 1031-1037页

作者：周旭王思文王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

近年来,CRISPR-Cas系统病原核酸检测技术凭借其靶向精准、灵敏度高以及多重检测等特点,在即时检测(Point of Care testing,POCT)领域受到广泛关注。多种Cas蛋白具有顺式基因编辑功能和非特异性反式切割活性,基于这种特性成功实现了病原... 详细信息

近年来,CRISPR-Cas系统病原核酸检测技术凭借其靶向精准、灵敏度高以及多重检测等特点,在即时检测(Point of Care testing,POCT)领域受到广泛关注。多种Cas蛋白具有顺式基因编辑功能和非特异性反式切割活性,基于这种特性成功实现了病原核酸检测,极大改善了POCT产品灵敏度低的问题。其中,以Cas12为靶点并反式切割单链DNA探针的系统既简单又高效。因此,就CRISPR-Cas12a的历史、分类、检测原理和在核酸检测中的应用进展、开发检测试剂的困难等方面做一综述。

关键词： CRISPR-Cas系统 Cas12a 病原核酸检测

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