检索结果-内蒙古大学图书馆

US3/US7/US8/UL23/UL50基因缺失重组伪狂犬病病毒的构建及对犬致病性分析

中国兽医学报 2022年第8期42卷 1577-1584页

作者：潘玉迪李茵缪茜吴菱冯力田进中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

自2011年以来,伪狂犬病(PR)在我国猪群中暴发,为控制PR的传播,基于流行的变异株研制了US7/US8/UL23缺失重组伪狂犬病病毒(rPRV)疫苗。疫苗可以对猪提供有效的免疫保护,但由于食用被污染的生肉或免疫猪的内脏,毛皮动物如犬、狐狸、水貂... 详细信息

自2011年以来,伪狂犬病(PR)在我国猪群中暴发,为控制PR的传播,基于流行的变异株研制了US7/US8/UL23缺失重组伪狂犬病病毒(rPRV)疫苗。疫苗可以对猪提供有效的免疫保护,但由于食用被污染的生肉或免疫猪的内脏,毛皮动物如犬、狐狸、水貂等越来越多地受到PRV弱毒疫苗株的感染,该感染对于毛皮动物是致死性的。本研究以rPRV^(delUS7/US8/UL23)为基础,利用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术构建rPRV^(delUS7/US8/UL23/US3/UL50);比较了rPRV^(delUS7/US8/UL23)(三缺失)和rPRV^(delUS7/US8/UL23/US3/UL50)(五缺失)的体外生长动力学和对犬致病性。结果显示,重组病毒rPRV^(delUS7/US8/UL23/US3/UL50)在感染后24~48 h的生长动力学低于rPRV^(delUS7/US8/UL23)。此外,rPRV^(delUS7/US8/UL23)感染细胞可产生细胞融合现象,而^(rPRVdel US7/US8/UL23/US3/UL50)感染细胞未形成细胞融合。US7/US8/UL23缺失rPRV攻毒的犬表现出明显的神经症状,所有犬均死亡,但用US7/US8/UL23/US3/UL50缺失rPRV攻毒的犬未表现出任何神经症状,所有犬在试验期间均存活。组织病毒载量分析并未显示出明显差异。本研究结果表明,US7/US8/UL23/US3/UL50缺失的rPRV对犬无致病力,同时也凸显了US3、UL50基因在PRV感染犬等毛皮动物呈现高毒力中的作用,为研发更安全的疫苗提供了策略。

关键词：伪狂犬病病毒 US3/US7/US8/UL23/US3/UL50基因缺失 CRISPR/Csa9

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非洲猪瘟病毒引物解旋酶C962R转录水平的动态分析及其互作病毒蛋白的鉴定

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中国预防兽医学报 2022年第8期44卷 803-809页

作者：席飞皇甫皓月黄炼榆王可欣沈冬冬张纪文张振江李芳赵东明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为筛选与非洲猪瘟病毒(ASFV)引物解旋酶C962R互作的病毒蛋白,本研究将ASFV Pig/HLJ/2018株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后20 h内每间隔2 h收获细胞,通过荧光定量PCR检测C962R基因的动态转录水平。结果显示,ASFV感染PAM后6 h C962R基因的转... 详细信息

为筛选与非洲猪瘟病毒(ASFV)引物解旋酶C962R互作的病毒蛋白,本研究将ASFV Pig/HLJ/2018株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后20 h内每间隔2 h收获细胞,通过荧光定量PCR检测C962R基因的动态转录水平。结果显示,ASFV感染PAM后6 h C962R基因的转录水平明显增加,18 h达峰值。经PCR扩增质粒pmCherry的mCherry基因、ASFV基因组中距C962R基因起始密码子41 bp(内含子部分)处上游约1000 bp的基因序列、距C962R N端约1000 bp的基因序列(该N端融合Strep标签)及C962R基因起始密码子上游的41 bp(内含子部分)基因序列后,构建重组质粒p3X-MCS-C962R-mCherry,并经双酶切鉴定正确后转染PAM,采用Pig/HLJ/2018株感染该PAM,48 h后分别收获上清液和细胞,采用PCR和western blot鉴定获得的重组病毒。结果显示,上清液中出现约1000 bp的包含mCherry和Strep标签的基因片段及PAM中出现100 ku的特异性条带,表明获得了融合表达C962R蛋白和Strep标签的重组ASFV(rC962R-mCherry)。将慢病毒包装质粒和辅助质粒共转染HEK 293T细胞,利用嘌呤霉素筛选融合表达C962R蛋白和Strep标签蛋白的细胞并经western blot鉴定。结果显示,细胞中出现100 ku的特异性条带,表明获得了表达ASFV C962R蛋白的细胞PK-15-C962R-Strep。分别将rC962R-mCherry感染PAM、ASFV Pig/HLJ/2018株感染PK-15-C962R-Strep,通过这两种感染方式经Strep pull-down试验检测C962R蛋白及筛选与其互作的病毒蛋白,并经质谱鉴定互作病毒蛋白的种类。采用PCR将Strep标签融合于筛选出的病毒蛋白编码基因的C端,分别克隆至pCAGGS载体,获得分别表达各病毒蛋白的重组质粒。将表达各病毒蛋白的重组质粒分别与表达C962R-Strep的重组质粒共转染HEK293T细胞,36 h后采用Co-IP试验进一步验证获得的与ASFV C962R蛋白互作的病毒蛋白。Strep pull-down试验结果显示,rC962R-mCherry感染的PAM细胞、ASFV Pig/HLJ/2018株感染的PK-15-962-Strep细胞中均出现100 ku的特异性条带。质谱鉴定结果显示,共筛选出3种病毒蛋白:A137R、K145R和K205R蛋白。Co-IP结果显示,IP样品中分别出现约16 bp、17 bp的特异性条带,对应为病毒的A137R和K145R蛋白。表明仅有A137R和K145R蛋白与C962R蛋白存在相互作用。本研究为以C962R蛋白为靶蛋白的新型抗ASFV药物及疫苗的研发提供实验依据。

关键词：非洲猪瘟病毒 C962R蛋白重组病毒质谱分析

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欧洲型和美洲型PRRSV的最新分类及其差异的研究进展

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中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 1006-1013页

作者：孙琪许浒李超李宛生张洪亮田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种能够引起重大经济损失的高度接触性、高死亡率猪传染性疾病,主要以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为临床特征,其病原为PRRS病毒(PRRSV),该病原自2018年起... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种能够引起重大经济损失的高度接触性、高死亡率猪传染性疾病,主要以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为临床特征,其病原为PRRS病毒(PRRSV),该病原自2018年起归属于动脉炎病毒科(Arteriviridae)、β-动脉炎病毒属(Betaarterivirus)。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征母猪繁殖障碍重大经济损失动脉炎病毒属猪呼吸道疾病美洲型动脉炎病毒科 PRRS病毒

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非洲猪瘟流行病学及诊断技术研究进展

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中国兽医学报 2022年第5期42卷 1066-1076页

作者：宋浩张丽张交儿仇华吉罗玉子中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪的一种烈性、出血性、高度接触性传染病,致死率高达100%。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物传染病。... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪的一种烈性、出血性、高度接触性传染病,致死率高达100%。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物传染病。目前尚无商品化疫苗和有效的治疗方法。2018年8月,ASF首次传入我国,随后迅速大范围蔓延,造成我国生猪存栏量急剧下降,猪肉价格大幅度上涨,给我国养猪业和食品经济造成了严重冲击。虽然目前生猪产能有较大恢复,但是ASF防控压力有增无减。2020年以来,各地陆续出现了ASFV变异株(基因Ⅱ型)和基因Ⅰ型弱毒株,与初期流行的毒株(基因Ⅱ型)相比,变异株潜伏期延长、感染猪临床症状不明显、死亡率降低,难以早期发现,给猪场ASF防控带来了新的挑战。因此,快速可靠的诊断技术和病原流行病学研究对ASF防控至关重要。本文对ASFV病原学、流行病学和实验室诊断技术进行了分析和梳理,以期为ASF流行趋势、诊断及防控提供技术参考。

关键词：非洲猪瘟流行病学变异株诊断技术

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一株基因V型禽呼肠孤病毒的分离鉴定与致病性研究

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 603-609页

作者：刘芮罗丹李凯刘长军祁小乐张艳萍崔红玉潘青高玉龙高立中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了了解禽呼肠孤病毒(ARV)在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,通过细胞传代、RT-PCR检测及序列分析,从山东省送检的病鸡关节组织中成功分离到1株病毒,将其命名为ARV-SD20-3203,样品中未检测到其他常见外源禽类病毒的核酸。禽... 详细信息

为了了解禽呼肠孤病毒(ARV)在我国的流行情况及其生物学特性和致病特点,通过细胞传代、RT-PCR检测及序列分析,从山东省送检的病鸡关节组织中成功分离到1株病毒,将其命名为ARV-SD20-3203,样品中未检测到其他常见外源禽类病毒的核酸。禽呼肠孤病毒主要保护性抗原σC基因的遗传进化分析结果表明,ARV-SD20-3203属于ARV基因V型,与基因Ⅴ型参考毒株918和1017-1的遗传距离较近,其氨基酸序列同源性分别为93.0%和92.4%,而与其他基因型毒株的遗传距离较远。ARV-SD20-3203毒株在LMH细胞上增殖良好;对鸡胚和雏鸡均具有明显的致病性,接种鸡胚可引起100%死亡,接种1日龄SPF雏鸡可引起75%死亡,其中SPF雏鸡接种病毒后第5天为死亡高峰期,第8天之后,不再出现SPF雏鸡死亡。该研究分离到1株基因V型ARV毒株,这为了解我国ARV变异株的流行及遗传进化特征提供了重要的材料。

关键词：禽呼肠孤病毒变异株遗传进化致病性

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人工感染禽腺病毒血清1型对SPF鸡天然免疫反应的影响

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东北农业大学学报 2022年第12期53卷 35-45页

作者：马得莹焦亚茹李雪峰李慧昕王芳芳范佳慧谢晶晶东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

试验旨在探究禽腺病毒血清1型(Fowl adenovirus serotype 1,FAdV-1)感染SPF鸡后产生的天然免疫反应及免疫调控机制。结果表明,感染FAdV-1后,观察组、感染组、对照组SPF鸡均无明显发病和死亡,剖检肌胃和腺胃可见轻微病变。感染初期小肠... 详细信息

试验旨在探究禽腺病毒血清1型(Fowl adenovirus serotype 1,FAdV-1)感染SPF鸡后产生的天然免疫反应及免疫调控机制。结果表明,感染FAdV-1后,观察组、感染组、对照组SPF鸡均无明显发病和死亡,剖检肌胃和腺胃可见轻微病变。感染初期小肠组织中Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、5、7、21;禽β-防御素5(Avian β-defensins 5,AvBD5)、8;白细胞介素8(Inter leukin-8,IL-8)、18;MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)、C-Rel及p65基因表达量显著升高(P<0.05)。TLR2、TLR5、AvBD8、IL-8、MyD88、C-Rel和p65在感染后36 h(hour post-infection,hpi)表达趋势一致。感染后期,部分组织中TLR15、AvBD10、AvBD12、IL-8基因表达量显著上调(P<0.05)。试验说明SPF鸡感染FAdV-1初期的先天免疫应答是小肠中通过TLR2、5-MyD88途径产生并调控AvBDs及细胞因子清除病毒。试验为今后可通过外源条件提高禽类天然免疫机能,预防控制FAdV-1及相似病原提供重要理论依据。

关键词：禽腺病毒血清1型 SPF鸡 Toll样受体禽β防御素天然免疫反应

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荧光标记新城疫病毒在检测病毒入侵过程中的应用

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中国兽医科学 2022年第7期52卷 853-860页

作者：刘添仪孙军峰师乾凯赵冉邸涛张春玮陈林娜张智颖韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究利用荧光染料标记的新城疫病毒(NDV)检测病毒的吸附、融合和进入,旨在为研究NDV入侵细胞的机制提供一种工具。首先通过DiOC标记NDV(DiOC-NDV)检测病毒的吸附和进入,随后利用R18标记NDV(R18-NDV)检测病毒的融合,最后利用R18和DiOC... 详细信息

本研究利用荧光染料标记的新城疫病毒(NDV)检测病毒的吸附、融合和进入,旨在为研究NDV入侵细胞的机制提供一种工具。首先通过DiOC标记NDV(DiOC-NDV)检测病毒的吸附和进入,随后利用R18标记NDV(R18-NDV)检测病毒的融合,最后利用R18和DiOC同时标记NDV(DiOC/R18-NDV)进一步检测NDV在内体中的融合。病毒吸附的检测结果显示,代表NDV的绿色荧光定位于细胞表面。病毒进入的检测结果显示,60~120 min不能被台盼蓝淬灭以及被台盼蓝淬灭的绿色荧光强度均无明显变化(P>0.05);病毒融合的检测结果显示,30~120 min时均能在细胞表面和细胞质中观察到红色荧光,且60~120 min时细胞的总荧光强度无显著差异(P>0.05)。以上结果表明,NDV吸附细胞后,在细胞表面与内体中发生膜融合及进入,且该过程在60 min内完成。综上所述,荧光标记的NDV能直观、可靠地展现病毒的吸附、进入和融合过程,荧光标记NDV可作为一种研究NDV入侵细胞机制的工具。

关键词：新城疫病毒荧光标记 DiOC R18

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鸡腺病毒血清4型和11型Penton蛋白的表达及交叉反应性评价

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中国兽医科学 2022年第6期52卷 704-711页

作者：秦亚平刘亮亮刘胜旺李慧昕中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应... 详细信息

为了了解不同血清型鸡腺病毒(fowladenovirus,FAdV)表面蛋白的交叉反应性,本研究对FAdV-4(HN/151025株)和FAdV-11(LN/1507株)型病毒的衣壳蛋白之一的Penton蛋白分别进行原核表达以及真核表达,并分别与FAdV-11和FAdV-4型血清进行交叉反应,评价FAdV-4与FAdV-11型毒株Penton蛋白的交叉反应性。Western-blot检测结果显示,FAdV-4型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,但与FAdV-11型的血清无交叉反应性;FAdV-11型的Penton蛋白与同型血清有良好的反应性,同时与FAdV-4型的血清有微弱的交叉反应。上述结果表明,FAdV-4型血清可同时识别FAdV-4型和FAdV-11型病毒的Penton蛋白。对2株病毒Penton蛋白的氨基酸序列进行比对,结果显示,两种血清型毒株的Penton蛋白的N端差异较大,这个差异区可能与蛋白的主要抗原表位区相关,进而影响血清学交叉反应性及交叉反应的强度,这可能是造成两种血清型毒株Penton蛋白交叉反应差的原因之一。

关键词：鸡腺病毒血清4型血清11型 Penton蛋白交叉反应

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猪圆环病毒病基因工程疫苗研究进展

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 560-565页

作者：高艳飞王尚辉王海伟孙明霞潘力肖培宇蔡雪辉涂亚斌中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)在全球范围内广泛流行,各生长阶段的猪均易发该病,因其致病性高、传染性强、能够引起严重的免疫抑制等特点,严重阻滞了全球养猪业的健康发展。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,P... 详细信息

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)在全球范围内广泛流行,各生长阶段的猪均易发该病,因其致病性高、传染性强、能够引起严重的免疫抑制等特点,严重阻滞了全球养猪业的健康发展。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是导致PCVD的主要病原,其对环境的耐受力强,对氯仿不敏感,在56℃或70℃均能够存活一段时间。

关键词：猪圆环病毒病猪圆环病毒2型基因工程疫苗免疫抑制养猪业主要病原 PCV2 耐受力

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猪繁殖与呼吸综合征病毒RFLP 1-4-4 L1C株的分离鉴定及其遗传演化分析

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中国预防兽医学报 2022年第6期44卷 583-590,597页

作者：田笑笑黄昕怡夏大松王海伟田志军蔡雪辉安同庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RFLP 1-4-4 lineage1C(L1C)变异株自2020年在美国出现以来,给养猪业造成了严重的经济损失。我国目前尚无RFLP 1-4-4 L1C变异株的报道。为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况,本研究对我国15个省219份疑... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RFLP 1-4-4 lineage1C(L1C)变异株自2020年在美国出现以来,给养猪业造成了严重的经济损失。我国目前尚无RFLP 1-4-4 L1C变异株的报道。为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况,本研究对我国15个省219份疑似PRRSV感染的临床样品进行了PRRSV ORF5基因的RT-PCR检测与测序。结果显示,41份(18.72%)为PRRSV阳性样品,其中有1份来自黑龙江省样品中的PRRSV ORF5基因为1-4-4模式。将该样品经PAM分离病毒并经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,结果显示分离到一株RFLP模式为1-4-4的PRRSV,命名为HLJ-80。采用PCR对分离病毒的全基因组分段扩增并测序拼接后显示其基因组全长15013 nt,利用MegAlign软件分析分离病毒与PRRSV 6株代表株的全基因组序列、ORF基因序列的同源性及其NSP2的氨基酸序列;利用MEGA6.0软件分析分离株ORF5基因序列并绘制其系统发生树(ML法);采用RDP4分析分离株全基因组序列的重组事件。全基因组序列的同源性分析结果显示,HLJ-80株与NADC30株的同源性最高,为93.3%,与其他代表株的同源性均低于90%。除ORF2基因外,其余基因序列均与NADC30株同源性最高(90.6%~99.3%)。ORF5基因的遗传进化树显示,HLJ-80株属于RFLP 1-4-4 L1C株。NSP2氨基酸序列分析结果显示,与VR-2332株相比,HLJ-80株NSP2存在131个氨基酸(111+1+19)的不连续缺失,缺失位置与NADC30株一致。上述结果表明,HLJ-80株与NADC30株的亲缘关系较近。重组分析结果显示,HLJ-80株有可能与PRRSV 2014-81株、SD53-1603株高度同源的病毒株重组而来。将本研究中的41株分离株ORF5基因序列,及GenBank中1996年~2021年我国3125条共计3166条北美洲型PRRSV ORF5基因序列,按照PRRSV RFLP 1-4-4模式和L1C分支谱系分类,并分析我国RFLP 1-4-4 L1C株在时间和地理上的分布;将2016年~2021年GenBank中7个国家全部北美洲型PRRSV ORF5基因序列(共计1918条),按照PRRSV RFLP分类,分析2016年以来我国与不同国家之间PRRSV RFLP的模式特点。结果显示,我国PRRSV RFLP 1-4-4自2003年首次出现,至今已累计达260株(8.2%),其中217株属于L1C分支(83.46%),其余为L8和L1A分支。PRRSV的RFLP分类结果显示,1918条PRRSV ORF5基因共有36种RFLP模式。其中RFLP 1-7-4模式的数量最多占25.96%,RFLP 1-4-4分布最广泛,除越南和印度外,该模式在其余5个国家均有分布,其在我国的数量最多。本研究为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况提供了重要参考数据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒限制性酶切片段长度多态性分支谱系 RFLP 1-4-4 L1C

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