检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2013年第10期43卷 1035-1039页

作者：赵世华戚亭郭巍田志革朱超相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为鉴定马动脉炎病毒(EAV)N蛋白的抗原表位,利用原核表达系统表达N蛋白,用其免疫6周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合获得杂交瘤细胞,通过以重组N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法筛选出2株能稳定分泌抗N蛋白的单克隆抗体(M... 详细信息

为鉴定马动脉炎病毒(EAV)N蛋白的抗原表位,利用原核表达系统表达N蛋白,用其免疫6周龄BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合获得杂交瘤细胞,通过以重组N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法筛选出2株能稳定分泌抗N蛋白的单克隆抗体(MAb),分别将其命名为2B3和2B9,其重链属于IgG1,轻链属于κ链。Western-blot证明,2株MAbs均能识别重组N蛋白。间接免疫荧光(IFA)试验证明,2株MAbs均与EAV呈阳性反应。用肽扫描法将N基因截短为具有相互部分重叠的11段,表达带HIS标签的重组蛋白,与MAb 2B3和MAb 2B9进行Western-blot和ELISA反应后,针对表位序列11 ASFRNGRRRQPTSYND26,进一步通过合成短肽对2株MAbs进行精确定位;结果表明,2B3识别的抗原表位为18 RRQPTSYND26,2B9针对的抗原表位为18 RRQPTSYND26。本研究结果为建立EVA的血清学检测方法及研究N蛋白的结构和功能奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒单克隆抗体肽扫描表位

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结核分枝杆菌rv3668c基因的原核表达及多抗制备

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 594-598页

作者：鄢秋龙陈利苹刘银冰曹俊倪宏波刘思国黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以结核分枝杆菌强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3668c基因,将其连接于表达载体pET-30a(+),获得重组质粒p30a-68,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白His-Rv3668c。用Ni-NTA His-Bind Resin亲和层析树脂纯化目的蛋白,利用抗6His标签抗体验证蛋白的纯化结果;通过Western-blot分析纯化蛋白与牛结核病阳性血清的反应情况。用重组蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果显示,重组质粒的双酶切鉴定和DNA序列测定均完全正确;SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,His-Rv3668c以可溶形式表达,蛋白质分子质量为26ku;纯化的蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应,表明其具有很好的免疫原性。所制备的多克隆抗体也具有良好的特异性,可运用于对Rv3668c蛋白的功能特性研究。

关键词：结核分枝杆菌 rv3668c基因原核表达免疫原性

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鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 117-120页

作者：帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆160091

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均... 详细信息

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。

关键词：鸭疫里默氏杆菌分离鉴定 ompA基因致病性

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鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白的表达及其免疫原性的分析

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 578-582页

作者：帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中... 详细信息

为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中,构建重组表达质粒pHtb-RA1110,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE分析表明,诱导表达的目的蛋白的分子质量大约为56ku,与预期大小相符,以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,诱导的重组蛋白能特异性地识别鸭疫里氏杆菌阳性血清,具有良好的抗原性。用纯化的Riean1110蛋白免疫SPF鸭,经ELISA检测,可产生高水平的抗体。结果表明,制备的重组Riean1110蛋白为建立鸭疫里氏杆菌的血清学检测方法奠定了基础。

关键词：鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白原核表达免疫原性

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1株野鸭源鸡贫血病病毒的分离鉴定及其编码区基因序列分析

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中国兽医学报 2013年第5期33卷 654-658,679页

作者：刘婉思高宏雷秦立廷杨波么帅高玉龙曾祥伟王笑梅东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用MDCC细胞系从东北地区采集的死亡野生鸟类样品中分离获得1株禽类病毒,对该病毒进行特异性PCR、特异性间接免疫荧光法等系统鉴定后,证实该分离株为鸡贫血病病毒(CAV),命名为WDNE110501株。利用PCR方法克隆出其编码区基因片段,测序结... 详细信息

利用MDCC细胞系从东北地区采集的死亡野生鸟类样品中分离获得1株禽类病毒,对该病毒进行特异性PCR、特异性间接免疫荧光法等系统鉴定后,证实该分离株为鸡贫血病病毒(CAV),命名为WDNE110501株。利用PCR方法克隆出其编码区基因片段,测序结果表明,WDNE110501株的编码区全长为1823bp,无碱基缺失或插入。并将该基因序列和推导的氨基酸序列与国内外已发表的34个CAV株编码区基因进行同源性和亲缘关系的比对分析,同源性为96.1%～99.8%;氨基酸的同源性为89.8%～99.7%,与国内毒株harbin的差异最小,与国外最近的是美国毒株98D02152。序列比较表明CAV的3个编码基因VP1、VP2和VP3均有一定程度变异,以VP1变异性最大,且在不同毒株间的这3个阅读框的氨基酸序列变异是互不相关的。这是首次在野生鸟类中分离出CAV病毒,提示了我们野生鸟类在鸡传染性贫血病病毒传播和分布中可能起到一定作用。

关键词：野生鸟类鸡传染性贫血病分离鉴定序列分析

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猪圆环病毒2型Rep'蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 405-409页

作者：刘丹刘建波吴洪丽王一平危艳武唐青海李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨1500301

为制备猪圆环病毒2型Rep'蛋白单克隆抗体(MAb),本研究采用淋巴细胞瘤杂交技术制备其MAb,获得了1株能够稳定分泌抗PCV2-Rep'蛋白的杂交瘤细胞株,命名为3D1株。MAb亚类鉴定为IgG1/κ型,腹水效价达1∶819 200。Western blot分析表... 详细信息

为制备猪圆环病毒2型Rep'蛋白单克隆抗体(MAb),本研究采用淋巴细胞瘤杂交技术制备其MAb,获得了1株能够稳定分泌抗PCV2-Rep'蛋白的杂交瘤细胞株,命名为3D1株。MAb亚类鉴定为IgG1/κ型,腹水效价达1∶819 200。Western blot分析表明,该MAb可与重组杆状病毒表达的PCV2-rRep'和PCV2-rRep蛋白发生特异性反应,具有良好的特异性和反应原性。采用MAb对PCV2感染细胞中Rep'蛋白抗原性进行了鉴定,证明该MAb能够与病毒Rep'蛋白产生特异性反应。采用合成肽扫描法对MAb对应的抗原表位鉴定,其核心序列为61FANFVKKQTFNKV73,位于PCV2-Rep'蛋白的N末端。制备的MAb及其抗原表位鉴定,为该病毒分子生物学及诊断技术的研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型重组Rep’蛋白单克隆抗体抗原表位

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猪圆环病毒2型Rep/Rep'和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性试验

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中国预防兽医学报 2013年第11期35卷 916-919页

作者：刘丹王一平吴洪丽危艳武刘建波李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1基因编码的Rep/Rep'蛋白与病毒复制酶相关,ORF2编码的Cap蛋白为病毒核衣壳,是病毒保护性抗原。为比较这3种蛋白作为亚单位疫苗的免疫保护性,本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep、-rRep'和-rCap蛋白制... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1基因编码的Rep/Rep'蛋白与病毒复制酶相关,ORF2编码的Cap蛋白为病毒核衣壳,是病毒保护性抗原。为比较这3种蛋白作为亚单位疫苗的免疫保护性,本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep、-rRep'和-rCap蛋白制备亚单位疫苗及PCV2灭活苗,分组免疫BALB/c鼠进行攻毒,以评价疫苗的免疫保护力。对PCV2-rRep和-rRep'亚单位疫苗免疫鼠血清ELISA抗体检测表明,于免疫后第14 d抗体全部转阳,第35 d抗体效价分别达到1∶42 667和1∶51 200。PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫组于第21 d抗体转阳,第35 d抗体效价分别达1∶2 133和1∶333。攻毒试验表明,PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠获得完全保护;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫组无保护作用。血清中和试验表明,PCV2-rCap蛋白亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠血清中和抗体效价达1∶1 600和1∶800;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫鼠血清无中和病毒能力。该研究表明,PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗具有良好的免疫保护力,可以与PCV2自然感染猪产生的抗Rep蛋白抗体相鉴别,具有良好的开发前景。

关键词：猪圆环病毒2型 Rep Rep’和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtC亚基的克隆表达及细胞毒性分析

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 449-452页

作者：李艳玲李建军周泷崔宁刘娇张艳禾李刚谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000

细胞致死膨胀毒素(CDT)由CdtA、CdtB和CdtC三个亚基构成,是细菌的一种重要毒力因子。为研究副猪嗜血杆菌(***)CDT的CdtC亚基的功能,本研究根据G enBank中cdtC基因序列设计引物,扩增cdtC基因,并克隆到原核表达载体pET-28a(+)中进行诱导... 详细信息

细胞致死膨胀毒素(CDT)由CdtA、CdtB和CdtC三个亚基构成,是细菌的一种重要毒力因子。为研究副猪嗜血杆菌(***)CDT的CdtC亚基的功能,本研究根据G enBank中cdtC基因序列设计引物,扩增cdtC基因,并克隆到原核表达载体pET-28a(+)中进行诱导表达。SD S-PAGE和w estern blot检测目的蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为25 ku。将纯化后的重组蛋白复性后进行体外细胞毒性试验。结果表明,CdtC蛋白对Vero细胞和PK-15细胞有较强的细胞毒性作用。本研究为研究细胞致死膨胀毒素CDT的致病机制奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌 CdtC亚基细胞毒性

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检测兔出血症病毒荧光定量方法的建立与应用

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黑龙江畜牧兽医 2013年第2期 89-91页

作者：刘行波原东伟刘家森郭冬春姜骞林欢司昌德崔玉东曲连东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室哈尔滨150001

为了研究兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)在实验动物兔和野兔中的发生情况并能更精确检测该病毒,试验采用建立的SYBR Green荧光定量方法对10只黑龙江省各单位送检的实验动物兔和5只哈尔滨郊县疑似病例的脏器样品... 详细信息

为了研究兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)在实验动物兔和野兔中的发生情况并能更精确检测该病毒,试验采用建立的SYBR Green荧光定量方法对10只黑龙江省各单位送检的实验动物兔和5只哈尔滨郊县疑似病例的脏器样品进行了检测。结果表明:该方法有较好的灵敏度和特异性,能够用于兔出血症病毒的检测。

关键词：兔出血症病毒(RHDV) vp60 real-time PCR 隐性感染

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鸭RIG－1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究

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中国畜牧兽医文摘 2014年第10期30卷 192-192页

作者：张雅春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

视黄酸诱导基因蛋白1（RIG-1）是一类模式识别受体，在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒（AIV）活性，本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3．1（... 详细信息

视黄酸诱导基因蛋白1（RIG-1）是一类模式识别受体，在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒（AIV）活性，本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3．1（＋）中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG—1，应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平；并将pcDNA—RIG-1转染DF-1细胞，通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。

关键词：禽流感病毒基因蛋白组织表达金定鸭活性 pcDNA3.1(+) 体外组织特异性表达

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