检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 440-443页

作者：孙伟邵昱昊杨崇文朱平王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物疫病诊断与技术服务中心/禽病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101

为建立呼肠孤病毒(RV)的三维模型,本研究利用冷冻电镜(cryo-EM)单颗粒三维重构技术获得了分辨率为10.6A的果子狸RV M PC/04株的三维结构。三维重构结果显示,果子狸RV M PC/04株具有哺乳动物RV典型的形态。该病毒由内外两层衣壳蛋白组成... 详细信息

为建立呼肠孤病毒(RV)的三维模型,本研究利用冷冻电镜(cryo-EM)单颗粒三维重构技术获得了分辨率为10.6A的果子狸RV M PC/04株的三维结构。三维重构结果显示,果子狸RV M PC/04株具有哺乳动物RV典型的形态。该病毒由内外两层衣壳蛋白组成,呈二十面体对称结构。内衣壳的外面包裹着一层由200个μ13σ33异源六聚体复合物构成的外衣壳,三角形剖分函数T=13。同时我们还观察到了该病毒主要蛋白之间的连接方式。本研究探讨为不同宿主的RV的形态和结构比较研究提供了相关的数据。

关键词：果子狸呼肠孤病毒冷冻电镜三维重构

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绿色荧光示踪马传染性贫血病毒样颗粒在活细胞中的组装过程

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中国预防兽医学报 2013年第9期35卷 691-694页

作者：张泽力马建尹鑫谷勤雍艾有为曹苏亚王玉龙王晓钧东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

马传染性贫血病毒(EIAV)gag基因编码的多聚Gag蛋白能够自动组装形成病毒样颗粒(VLPs)。为研究EIAV衣壳蛋白合成、组装及释放过程,本实验通过构建表达EIAV Gag-GFP融合蛋白重组质粒,并将其转染293T细胞,采用western blot检测不同时间点V... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)gag基因编码的多聚Gag蛋白能够自动组装形成病毒样颗粒(VLPs)。为研究EIAV衣壳蛋白合成、组装及释放过程,本实验通过构建表达EIAV Gag-GFP融合蛋白重组质粒,并将其转染293T细胞,采用western blot检测不同时间点VLPs的产生及释放。并进一步通过活细胞和3D成像技术观察Gag-GFP在细胞中的表达动态及VLPs的组装过程。结果表明:Gag和GFP蛋白融合表达不影响VLPs的组装,转染约6 h后EIAV Gag蛋白进行合成并在细胞胞质聚集完成组装形成VLPs。该实验结果为进一步研究EIAV在细胞中的组装路线和机制奠定了重要基础。

关键词：马传染贫血病毒病毒样颗粒活细胞共聚焦病毒组装

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恒河猴Tetherin蛋白对马传染性贫血病毒抑制作用的研究

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 87-90页

作者：谷勤雍胡哲尹鑫张泽力吴星亮魏萍王晓钧东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

Tetherin是新发现的具有限制多种病毒从细胞膜释放功能的细胞蛋白。本研究采用RT-PCR技术从恒河猴巨噬细胞中扩增Tetherin基因,将其插入真核表达载体pEF4/myc-His B中构建重组质粒pHF-Tetherin。并将其转染293T细胞,通过western blot和... 详细信息

Tetherin是新发现的具有限制多种病毒从细胞膜释放功能的细胞蛋白。本研究采用RT-PCR技术从恒河猴巨噬细胞中扩增Tetherin基因,将其插入真核表达载体pEF4/myc-His B中构建重组质粒pHF-Tetherin。并将其转染293T细胞,通过western blot和激光共聚焦分析Tetherin在293T细胞中的表达及亚细胞定位。将pHF-Tetherin分别与马传染性贫血病毒(EIAV)或猴免疫缺陷病毒(SIV)假病毒粒子感染性质粒共转染293T细胞,分析Tetherin对EIAV及SIV出芽的限制作用。研究结果表明,pHF-Tetherin转染293T细胞48 h后可以检测到Tetherin的表达并定位于细胞膜,而且该蛋白具有抑制EIAV及SIV从转染细胞中出芽的生物学功能。

关键词：恒河猴Tetherin 马传染性贫血病毒猴免疫缺陷病毒病毒出芽

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多杀性巴氏杆菌PurF蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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动物医学进展 2013年第1期34卷 6-10页

作者：张爱芹郭东春刘家森原冬伟姜骞林欢崔玉东曲连东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

为了获得多杀性巴氏杆菌PurF蛋白及其多克隆抗体,通过PCR扩增了多杀性巴氏杆菌C51-17株purF基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,构建重组表达质粒pHT-PurF,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明,... 详细信息

为了获得多杀性巴氏杆菌PurF蛋白及其多克隆抗体,通过PCR扩增了多杀性巴氏杆菌C51-17株purF基因,将其克隆到表达载体pPROEX-HTa中,构建重组表达质粒pHT-PurF,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测表明,获得重组蛋白分子质量约56.5ku,主要以包涵体形式存在;Western blot检测表明,表达的蛋白可与多杀性巴氏杆菌制备的高免血清发生特异性反应。将制备的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA检测血清抗体效价,结果显示制备的多克隆抗体滴度达到1∶128 000,Western blot表明可与多杀性巴氏杆菌PurF蛋白发生反应。本研究制备了多杀性巴氏杆菌的PurF蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究PurF蛋白在多杀性巴氏杆菌致病中的作用奠定了基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌 purF基因原核表达多克隆抗体

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猪细小病毒的致病机制与防控策略

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世界华人消化杂志 2013年第1期21卷 66-70页

作者：仇铮任晓峰崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江省哈尔滨市150001 东北农业大学动物医学学院预防兽医系黑龙江省哈尔滨市150030

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是细小病毒科细小病毒属的成员,引起初孕母猪的繁殖障碍、仔猪的皮肤炎症和肠炎性腹泻.这些疾病在临床表现和病理特点上各不相同.近年来,PPV与其他病毒混合感染发生较多,是导致很多疾病综合征的病原... 详细信息

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是细小病毒科细小病毒属的成员,引起初孕母猪的繁殖障碍、仔猪的皮肤炎症和肠炎性腹泻.这些疾病在临床表现和病理特点上各不相同.近年来,PPV与其他病毒混合感染发生较多,是导致很多疾病综合征的病原之一.本文主要针对猪细小病毒的病原、致病机制和防控策略做一综述,以期对动物细小病毒病的防治提供的借鉴.

关键词：猪细小病毒致病机制

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猪圆环病毒2型引起相关肠炎疾病的研究进展

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动物医学进展 2013年第10期34卷 92-95页

作者：袁婧魏萍刘长明东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)已成为世界范围内影响养猪业发展的重要疾病。由猪圆环病毒2型(PCV-2)引发的肠炎是PCVAD的症状之一,临床表现为生长仔猪腹泻、生长发育迟缓或体重减轻;在淋巴组织和肠组织中可检测到大量的PCV-2病原,并出现特... 详细信息

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)已成为世界范围内影响养猪业发展的重要疾病。由猪圆环病毒2型(PCV-2)引发的肠炎是PCVAD的症状之一,临床表现为生长仔猪腹泻、生长发育迟缓或体重减轻;在淋巴组织和肠组织中可检测到大量的PCV-2病原,并出现特征性组织学病变。试验证实,PCV-2单独感染或与其他病原混合感染可引发肠炎,经口服途径攻毒感染是引发PCV-2相关肠炎疾病的一种重要感染途径。因此,PCV-2是生长仔猪肠道疾病的一种致病因子,应予以足够重视。论文对PCV-2相关肠炎在临床表现、组织病理学特征、多病原混合感染对其影响、临床诊断以及防控措施等方面的研究进展进行综述,以期对PCV-2相关肠炎疾病的深入研究提供参考。

关键词：猪圆环病毒2型肠炎诊断

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抗猪PD-L1分子的单克隆抗体制备及免疫学特性分析

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中国预防兽医学报 2013年第7期35卷 578-581页

作者：彭金美李登云郭娟娟安同庆孙艳吴玉全陈家锃冷超粮田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室上海200241

为制备抗猪程序性死亡因子配体1(PD-L1)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其免疫学特性,本研究将猪PD-L1基因的外膜区利用原核表达载体pET32a进行表达,以纯化的表达蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以表达PD-L1-Fc蛋... 详细信息

为制备抗猪程序性死亡因子配体1(PD-L1)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其免疫学特性,本研究将猪PD-L1基因的外膜区利用原核表达载体pET32a进行表达,以纯化的表达蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以表达PD-L1-Fc蛋白的293T细胞作为抗原,采用间接免疫荧光试验筛选杂交瘤培养上清,获得两株稳定分泌抗猪PD-L1 MAb的杂交瘤细胞系。MAb亚型鉴定均为IgG1型,轻链为κ链。Western blot试验表明这两株MAb均可以特异性识别PD-L1蛋白。流式细胞检测结果显示这两株MAb可以识别表达于293T细胞膜表面的PD-L1分子,但不能阻断PD-L1分子与其受体PD-1的结合。这两株MAb的获得为研究PD-1/PD-L1通路与猪的某些感染性疾病发展进程的关系提供了必要的检测工具。

关键词： PPD-L1分子 PD-1 PD-L1通路单克隆抗体

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猪细小病毒BQ-C毒株VP2基因的鉴定及表达

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中国畜牧兽医 2013年第11期40卷 50-53页

作者：刘朝霞刘永刚毕可东周顺崔尚金青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究从临床发病猪采集病料,以PK15传代细胞进行病毒分离,通过PCR、血液凝集试验(HA)和电镜鉴定为1株猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),命名为BQ-C。对分离的毒株进行测序,结果显示该毒株与GenBank登录的PPV BQ株同源性为100%。为... 详细信息

本研究从临床发病猪采集病料,以PK15传代细胞进行病毒分离,通过PCR、血液凝集试验(HA)和电镜鉴定为1株猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),命名为BQ-C。对分离的毒株进行测序,结果显示该毒株与GenBank登录的PPV BQ株同源性为100%。为获得该毒株结构蛋白VP2基因的表达产物,将VP2基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+),得到表达重组质粒。经双酶切和测序鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE结果表明,获得的重组蛋白分子质量约为71.5ku,与预期大小相符。Western blotting结果显示获得的重组蛋白能与PPV阳性血清特异性结合,表明重组蛋白具有良好的反应原性。结果表明,本研究成功分离了1株PPV BQ-C株,且表达的VP2重组蛋白可用于PPV血清学诊断和疫苗的研发。

关键词：猪细小病毒重组VP2蛋白原核表达反应原性

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东北地区野生鸟类B亚群禽白血病的分子流行病学调查及env基因的序列分析

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中国兽医科学 2013年第2期43卷 208-212页

作者：李德龙刘婉思杨波高奇曾祥伟秦立廷高宏雷刘思当高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为掌握我国东北地区野生鸟类感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从黑龙江、吉林和辽宁三省采集了300份野生鸟类样品,经PCR检测,4份野生鸟类样品为ALV-B阳性,并扩增了这4份样品的env基因,对其序列进行了遗传进化分析。结果显示,4份ALV-B阳性... 详细信息

为掌握我国东北地区野生鸟类感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从黑龙江、吉林和辽宁三省采集了300份野生鸟类样品,经PCR检测,4份野生鸟类样品为ALV-B阳性,并扩增了这4份样品的env基因,对其序列进行了遗传进化分析。结果显示,4份ALV-B阳性样品的env基因与原型毒株RAV-2的同源性为99.1%～99.4%,与美国的另外2株代表毒株Schmidt-Ruppin B和Prague subgroup B的同源性为93.3%～98.4%,而与2株中国蛋鸡分离株SDAU09C2和SDAU09E3的同源性为90.2%～90.6%。以上结果表明,目前我国野生鸟类已经存在禽白血病。env基因序列分析结果表明,这4份阳性样品的env基因部分位点发生了变异,并且在多处位点存在突变。

关键词：野生鸟类 B亚群禽白血病流行病学调查序列分析

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我国东北地区野生鸟类A亚群禽白血病病毒分子流行病学调查及env基因序列分析

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 245-247页

作者：杨波高玉龙高宏雷秦立廷刘婉思李德龙高奇曾祥伟王笑梅东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学动物科技学院山东泰安271000

为了解野生鸟类禽白血病病毒(ALV)的感染情况,本研究采集了300份野生鸟类样品,将样品处理后接种DF-1细胞,利用p27抗原ELISA、IFA、PCR等方法检测,其中两份样品为ALV阳性并对其env基因扩增。结果表明,其中gp85编码序列与已发表的A亚群ALV... 详细信息

为了解野生鸟类禽白血病病毒(ALV)的感染情况,本研究采集了300份野生鸟类样品,将样品处理后接种DF-1细胞,利用p27抗原ELISA、IFA、PCR等方法检测,其中两份样品为ALV阳性并对其env基因扩增。结果表明,其中gp85编码序列与已发表的A亚群ALV(ALV-A)的同源性最高,为91.1%～100%,而与已发表的鸡的B、C、D、E、J亚群ALV的gp85编码序列的同源性仅在28.0%～80.3%之间。遗传进化树分析也表明这两份ALV阳性样品的gp85编码序列属于ALV-A。本实验在我国野生鸟类群体中首次分离和鉴定出ALV-A,表明目前我国野生鸟类已经存在A亚群ALV的感染。

关键词：野生鸟类 A亚群禽白血病 gp85 序列分析

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