检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第4期35卷 255-258页

作者：邹晓辉李媛汪洋宋志强孙文静周玉梅白帆吴金迪刘素丽辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

牛支原体(***)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病。研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用。本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌B... 详细信息

牛支原体(***)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病。研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用。本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,该重组蛋白大小约为36 ku,将其命名为P33。纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。重组蛋白与胎牛肺细胞(EBL)作用,通过激光共聚焦显微镜观察到了明显的粘附作用,而ELISA试验证明该蛋白的这种粘附为特异性粘附,从而证明该蛋白是牛支原体的一个粘附相关蛋白。

关键词：牛支原体原核表达 ELISA

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禽肠炎沙门氏菌Lon/CpxR双基因缺失株的构建及其特性研究

禽肠炎沙门氏菌Lon/CpxR双基因缺失株的构建及其特性研究

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2013年中国微生物学会学术年会

作者：司微于申业陈利苹王秀梅张万江刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

禽沙门氏菌病是影响养鸡业的重要疾病之一,它够引起鸡腹泻病,严重影响生产性能,甚至引起死亡.相对于灭活疫苗,弱毒疫苗对预防肠炎沙门氏菌的肠道定殖和全身性感染有更好的效果.

关键词：

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携带cfr基因的猪源大肠杆菌IncA/C质粒pSCEC2序列分析

携带cfr基因的猪源大肠杆菌IncA/C质粒pSCEC2序列分析

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张万江徐兴然王秀梅刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001 西南大学重庆400715

[目的]获得cfr基因阳性大肠杆菌IncA/C质粒pSCEC2的全核酸序列,并分析cfr基因的遗传背景及新的传播方式.[方法]2010年从猪场分离到1株cfr基因阳性大肠杆菌,通过S1-PFGE、Southern杂交、接合转移试验、电击转化和质粒复制子分型等方法对p... 详细信息

[目的]获得cfr基因阳性大肠杆菌IncA/C质粒pSCEC2的全核酸序列,并分析cfr基因的遗传背景及新的传播方式.[方法]2010年从猪场分离到1株cfr基因阳性大肠杆菌,通过S1-PFGE、Southern杂交、接合转移试验、电击转化和质粒复制子分型等方法对pSCEC2质粒进行研究;同时采用454 GS-FLX测序仪对pSCEC2质粒进行序列全测定.[结果]最终获得一个全长为135,615 bp的pSCEC2,该质粒含有200编码大于100个氨基酸的开放阅读框.序列分析显示,pSCEC2质粒含有两个耐药基因簇,分别为floR耐药区和cfr耐药区.由cfr和两个转录方向相同的IS256插入元件组成的一个4.4 kb的片段,其中IS256被认为与cfr基因的转移有关.另一个耐药区包含floR、tet (A)-tetR、strA/strB和sul2耐药基因,该耐药基因簇在之前发现的其他IncA/C类型的质粒中都有发现.除了这2个耐药基因簇外,pSCEC2的质粒骨架和其他IncA/C类型的质粒骨架和核酸序列同源性＞99％.[结论]首次在宿主范围广、转移能力强以及稳定的IncA/C家族质粒中发现了多重耐药基因cfr,pSCEC2质粒将加速cfr基因的传播.cfr的基因环境分析表明,cfr基因两端各有一个完整的IS256插入元件,而且反向PCR也能得到由cfr和其中一个IS256组成的环状结构,这也再次提示IS256可介导cfr基因的移动.

关键词：恶唑烷酮耐药多重耐药食品源动物

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重组猪圆环病毒2型Rep/Rep'和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性研究

重组猪圆环病毒2型Rep/Rep'和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

作者：刘丹王一平吴洪丽危艳武唐青海刘建波李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep和-rRep’蛋白及PCV2-rCap蛋白制备亚单位苗，同时利用PCV2全病毒制备的灭活苗，在相同条件下进行鼠体免疫攻毒试验，旨在比较各自的免疫原性和攻毒保护性。以PCV2-rRep和-rRep’蛋白亚单位疫苗免... 详细信息

本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep和-rRep’蛋白及PCV2-rCap蛋白制备亚单位苗，同时利用PCV2全病毒制备的灭活苗，在相同条件下进行鼠体免疫攻毒试验，旨在比较各自的免疫原性和攻毒保护性。以PCV2-rRep和-rRep’蛋白亚单位疫苗免疫应答结果表明，这2种复制酶蛋白均具有良好的免疫原性，能够诱导机体产生高水平的抗体滴度，但在鼠体攻毒模型中对PCV2感染无任何保护性，用各自的免疫血清进行的体外中和试验也证明这些抗体无中和病毒活性，研究证明PCV2-rRep和-rRep’蛋白不是病毒保护性抗体，其功能可能仅限于病毒复制。比较而言，PCV2-rCap亚单位疫苗和全病毒灭活苗均能够有效刺激机体产生较强的体液免疫反应，在攻毒后抗体滴度得到进一步提升，对免疫攻毒鼠体病毒载量检测显著低于攻毒对照组水平，表明Cap蛋白抗原在抗病毒感染过程中起关键作用。由此可见，PCV2疫苗都是Cap蛋白刺激机体产生的抗体起免疫保护作用，而且针对Cap蛋白的抗体具有中和活性。

关键词：猪圆环病毒2型亚单位疫苗免疫保护蛋白表达

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猪圆环病毒2型Rep′蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位分析

猪圆环病毒2型Rep′蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位分析

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：刘丹刘建波吴洪丽王一平危艳武唐青海李胜斌魏萍刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

背景猪圆环病毒2型(PCV2)基因组由单股负链闭合环状DNA构成,包含2个大的反义开放阅读框架(ORF1和ORF2),其中ORF1编码Rep蛋白,参与病毒的复制,是病毒的非结构蛋白;ORF2编码的Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白.PCV2-Rep蛋白编码基因全长945 ...

背景猪圆环病毒2型(PCV2)基因组由单股负链闭合环状DNA构成,包含2个大的反义开放阅读框架(ORF1和ORF2),其中ORF1编码Rep蛋白,参与病毒的复制,是病毒的非结构蛋白;ORF2编码的Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白.PCV2-Rep蛋白编码基因全长945 nt,含有314个氨基酸(aa),分子量为36ku,预测有3个潜在糖基化位点.在病毒复制过程中PCV2-ORF1转录本mRNA第417～799 nt处含有剪接位点,经剪接后产生一个截断的Rep′蛋白,其共编码178个aa,预测分子量为20.4 ku.由于剪接过程中Rep′蛋白C-末端阅读框发生移位,导致了Rep′与Rep蛋白第140位后C末端氨基酸序列完全不同.目前对Rep蛋白抗原表位分析报道较少.

关键词：

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mIgY,一种新型的抗体及抗体药物研发平台

mIgY,一种新型的抗体及抗体药物研发平台

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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张小莺陈红秀江雪梅仇华吉西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

目的：通过构建猪IFN-γ的噬菌体展示禽源scFv抗体文库,制备高特异性的scFv抗体.方法：1、构建猪IFN-γ的禽源噬菌体展示抗体文库.免疫SPF鸡4次后,提取SPF鸡脾脏mRNA,反转录为cDNA后,以cDNA为模板扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,... 详细信息

目的：通过构建猪IFN-γ的噬菌体展示禽源scFv抗体文库,制备高特异性的scFv抗体.方法：1、构建猪IFN-γ的禽源噬菌体展示抗体文库.免疫SPF鸡4次后,提取SPF鸡脾脏mRNA,反转录为cDNA后,以cDNA为模板扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,并进一步经融合PCR扩增单链抗体(scFv)基因.scFv与pCATAB5E均通过SfiI/NotI酶切后,scFv克隆至pCATAB5E噬菌粒载体,构建噬菌体展示抗体文库,随机挑取的10个克隆;2、抗体基因的大量表达.将随机挑取的10个克隆的抗体基因克隆至原核表达载体pET30a,优化诱导表达条件,并用Ni+柱进行纯化.结果：在噬菌体展示抗体文库中随机挑取的10个克隆,反应性均很高;诱导表达结果显示20℃,0.4mM IPTG,10h为最佳表达条件;可溶性scFv抗体的终浓度为5mg/mL,经ELISA、Western blot和间接免疫荧光检测反应性良好,与鼠源单抗平行比较发现,鸡scFv反应性较鼠源单抗高.结论：本研究构建了猪IFN-γ的噬菌体展示鸡源scFv抗体文库,并制备高特异性的scFv抗体;同时与鼠源单抗进行比较,初步确认了禽源单抗的特殊优势;这些研究结果支持了构建禽源单克隆抗体研发平台的设想,不失为一种有效的抗体研发替代途径.

关键词：禽源单克隆IgY抗体药物开发猪干扰素-γ 噬菌体展示技术

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一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株HuN4-F112N蛋白单克隆抗体不识别其强毒株HuN4-F5与其氨基酸序列无关

一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株HuN4-F112N蛋白单克隆抗体...

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2013国际猪繁殖与呼吸综合征学术研讨会

作者：王倩安同庆彭金美陈家锃冷超粮孙艳田志军杨汉春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验/室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京100193 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验/室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京100193

2006年,以Nsp2编码区30-aa缺失为特征的高致病性PRRSV (HP-PRRSV)的出现和流行给我国养猪业造成巨大的经济损失.本实验室通过将HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞上传了112代得到一个致弱毒株HuN4-F112.序列分析显示HuN4-F112与其强毒株HuN...

2006年,以Nsp2编码区30-aa缺失为特征的高致病性PRRSV (HP-PRRSV)的出现和流行给我国养猪业造成巨大的经济损失.本实验室通过将HP-PRRSV HuN4株在Marc-145细胞上传了112代得到一个致弱毒株HuN4-F112.序列分析显示HuN4-F112与其强毒株HuN4-F5之间存在数目不多、散在的氨基酸突变,然而它的生物学特性已经发生了很大的改变.如何找出它们之间的抗原性差异对于研究它致弱的分子机制具有重要意义.

关键词：

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表达A型口蹄疫病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建

引用

中国预防兽医学报 2012年第4期34卷 262-265页

作者：宋姗姗王海伟周国辉于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达A型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组腺病毒,本研究通过人工合成A型FMDVP1-2A、2B和3C融合基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用*** BJ5183内同源重组将目的基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带A型FMDV P... 详细信息

为构建表达A型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组腺病毒,本研究通过人工合成A型FMDVP1-2A、2B和3C融合基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用*** BJ5183内同源重组将目的基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带A型FMDV P1-2A-2B-3C基因的重组AdEasy-1。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rAd-A09。经PCR检测,该重组腺病毒在传代过程中目的基因稳定存在,病毒滴度在第8代时可达到108.5TCID50/mL。间接免疫荧光检测和western blot分析表明,rAd-A09在AD-293细胞中产生FMDV的结构蛋白VP0、VP1和VP3。该重组腺病毒的构建为口蹄疫新型疫苗的研究奠定了基础。

关键词： A型口蹄疫病毒重组腺病毒衣壳蛋白

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共表达O型FMDV衣壳蛋白和绿色荧光蛋白重组腺病毒的构建

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中国预防兽医学报 2012年第2期34卷 83-86页

作者：刘蒙蒙杨德成周国辉梁特于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)的P12A3C基因及GFP基因的重组腺病毒rAdV-P12aEGFP2a3C,本研究以FMDV的2A基因序列为Linker,将报告基因EGFP插入FMDV的P12A与3C之间。重组腺病毒感染HEK-293细胞后可以观察到绿色荧光,表明EGFP蛋白获得表... 详细信息

为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)的P12A3C基因及GFP基因的重组腺病毒rAdV-P12aEGFP2a3C,本研究以FMDV的2A基因序列为Linker,将报告基因EGFP插入FMDV的P12A与3C之间。重组腺病毒感染HEK-293细胞后可以观察到绿色荧光,表明EGFP蛋白获得表达。应用FMDV的VP2单克隆抗体4B2对重组病毒感染细胞进行western blot检测,反应条带与FMDV衣壳蛋白VP0和VP3的分子量大小相符,表明FMDV的完整衣壳蛋白和3C蛋白酶也均获得表达,而且EGFP的插入并未影响P1蛋白的表达和3C蛋白酶对P1的正确切割。重组腺病毒的生长特性分析表明,EGFP的插入也未影响该重组腺病毒的增殖特性。上述研究结果显示,表达FMDV衣壳蛋白P12A3C的重组腺病毒可以作为载体,以2A蛋白作为Linker表达一个小分子蛋白,为改进以腺病毒为载体的口蹄疫基因工程疫苗提供了新思路。

关键词：口蹄疫病毒重组人腺病毒5型绿色荧光蛋白

来源：评论

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马流感病毒血凝素基因甲病毒复制子重组表达质粒的构建及其免疫效力评价

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 568-572页

作者：仇铮郭巍孙元戚亭仇华吉相文华东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室黑龙江哈尔滨150001

为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/... 详细信息

为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/c鼠能够检测到特异性抗体产生,而且HI抗体水平持续升高,同时小鼠体内IFN-γ、IL-4分泌水平也有所升高。攻毒后小鼠表现轻度临床症状,但病毒分离和RT-PCR均未检测到病毒。上述结果表明,该重组质粒pSFV1CS-EIV-HA具有良好的免疫原性并且可以诱导免疫动物产生较高免疫应答的能力。

关键词：马流感病毒甲病毒复制子载体

来源：评论

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