检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2012年第4期42卷 339-346页

作者：危艳武范培虎郭龙军吴洪丽刘长明沈荣显东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况,采用第5、10和125代PRRSV-HBR株病毒进行了人工感染试验。结果显示,低代次(第5和第10代)病毒接种组可复制出以"高热综合征"... 详细信息

为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况,采用第5、10和125代PRRSV-HBR株病毒进行了人工感染试验。结果显示,低代次(第5和第10代)病毒接种组可复制出以"高热综合征"为特点的症候群,第5代毒株感染组死亡率达40%(2/5),第10代感染组症状明显减轻且无死亡,第125代毒株感染组基本无临床症状。这3个代次的毒株感染组于感染后第3天检测病毒血症呈阳性,第7～14天到达高峰,第125代于第21天消失,较第5和10代毒株提前1周。病毒感染后抗原主要分布于脾、扁桃体、淋巴结等组织,第5和10代毒株感染组脏器出现严重的病理损伤,第125代毒株感染组仅见轻微病理损伤。对3个代次毒株的ORF5、ORF6和ORF7测序显示,仅在ORF5出现了3个氨基酸位点突变,即第29位:第5、第10代的缬氨酸到了第125代变为丙氨酸;第32位:第5、第125代的丝氨酸到了第10代变为甘氨酸;第196位:第5、第10代的谷氨酰胺到了第125代变为精氨酸。研究表明,低代次毒株能够完全复制出典型的"猪高热综合征",而高代次毒株无明显临床症状,证明该毒株经细胞传代后毒力下降。高代次毒株感染动物仍能够引起毒血症和持续感染的结果表明,高代次毒株仍具一定毒力,作为疫苗种毒需要进一步毒力弱化。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒传代毒株毒力比较

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猪圆环病毒2型Rep和Rep’蛋白免疫原性及其抗体中和活性的测定

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中国兽医科学 2012年第12期42卷 1216-1223页

作者：刘丹王一平危艳武唐青海吴洪丽刘建波李胜斌魏萍刘长明东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了构建表达PCV2Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒,采用高保真PCR法从病毒感染细胞中扩增Rep和Rep’蛋白基因,并克隆到杆状病毒转移载体(pBlueBac4.5/V5-His-TOPO)。将重组质粒与线性化杆状病毒DNA共转染昆虫细胞(Sf21),经同源重组和蚀斑... 详细信息

为了构建表达PCV2Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒,采用高保真PCR法从病毒感染细胞中扩增Rep和Rep’蛋白基因,并克隆到杆状病毒转移载体(pBlueBac4.5/V5-His-TOPO)。将重组质粒与线性化杆状病毒DNA共转染昆虫细胞(Sf21),经同源重组和蚀斑筛选,获得2株高效表达PCV2Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒。经3次克隆的重组毒株的毒价达3.0×107 PFU/mL和7.0×107 PFU/mL。蛋白表达产物分析表明,PCV2Rep和Rep’蛋白分子质量为36.0ku和20.4ku,分别占总蛋白含量的6.2%和10.1%。免疫活性分析表明,这2种重组蛋白均可与PCV2特异性抗体产生反应,具有良好的反应原性。用Ni-NTA亲和层析法纯化这2种重组蛋白,纯度分别为92.5%和93.6%。用纯化的2种蛋白免疫小鼠,经间接ELISA检测,血清抗体效价高达1∶51 200。以抗这2种蛋白的抗体进行的IPMA试验表明,它们均能特异性识别PCV2感染细胞中的Rep和Rep’蛋白抗原。病毒血清中和试验证实,抗Rep和Rep’蛋白抗体均无中和病毒活性。本研究表达的重组PCV2Rep和Rep’蛋白,为探讨该病毒复制机制奠定了基础,也为PCV2Cap亚单位疫苗与自然野毒感染间的鉴别诊断开辟了新途径。

关键词：猪圆环病毒2型 Rep和Rep’蛋白杆状病毒表达免疫原性中和活性

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抗鸭多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第10期34卷 833-835页

作者：卢艳郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢崔玉东曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为制备抗鸭多杀性巴氏杆菌(***)外膜蛋白H(OmpH)单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的OmpH重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并以重组OmpH蛋白为抗原,通过间接ELISA方法筛选出3株能够稳定分泌抗OmpH的杂交瘤... 详细信息

为制备抗鸭多杀性巴氏杆菌(***)外膜蛋白H(OmpH)单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的OmpH重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并以重组OmpH蛋白为抗原,通过间接ELISA方法筛选出3株能够稳定分泌抗OmpH的杂交瘤细胞株(1A9、1E9、3G7)。MAb亚类鉴定表明,1A9、1E9和3G7均为IgG1亚类,轻链均为κ链。经western blot和间接免疫荧光检测证明3株MAb均具有良好的特异性。这些抗OmpH MAb的获得,为鸭***病的快速、有效、敏感的诊断方法建立奠定了基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌 OmpH蛋白单克隆抗体

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携带非典型cpb2基因牛源A型产气荚膜梭菌重组α毒素的免疫保护性研究

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 563-567页

作者：德艳艳姜志刚牛思博孙刚于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150090

为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带... 详细信息

为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带的cpb2基因与14个菌株的非典型cpb2基因的氨基酸序列同源性为95.1%～98.9%,与典型cpb2基因(L77695)的氨基酸序列同源性为61.7%。这表明,G1的cpb2基因为非典型cpb2基因。同时分别将cpa和cpb2基因扩增产物克隆于原核表达载体中,构建重组表达质粒pET-a和pET-b2,重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白,将其纯化后单独及联合免疫小鼠进行免疫保护试验。结果显示,单独免疫重组α毒素蛋白组以及联合免疫重组β2毒素蛋白组的小鼠,均可以抵抗至少6倍最小致死量(MLD)的G1外毒素(包含α毒素和非典型β2毒素)的攻击,也可以完全抵抗至少6 MLD的G2外毒素(不包含β2毒素)的攻击。表明,重组α毒素蛋白对含有及不含有非典型β2毒素的A型产气荚膜梭菌均具有良好的免疫保护作用。

关键词：非典型cpb2基因 A型产气荚膜梭菌重组α毒素重组非典型β2毒素

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马传染性贫血病毒强毒株gag和gp45基因的体内进化分析

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动物医学进展 2012年第7期33卷 1-7页

作者：刘强王雪峰王珊珊韦华冕杜承林跃智马建周建华王凤龙内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株体内进化规律,将3匹马分别以1×105 TCID50/匹接种EIAVLN40强毒株后,在不同时间点采取外周血,分离单核白细胞。提取白细胞中的DNA,并以其为模板,应用套式PCR技术分别扩增EIAV前病毒DNA的p15,p9和... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株体内进化规律,将3匹马分别以1×105 TCID50/匹接种EIAVLN40强毒株后,在不同时间点采取外周血,分离单核白细胞。提取白细胞中的DNA,并以其为模板,应用套式PCR技术分别扩增EIAV前病毒DNA的p15,p9和gp45基因,经克隆后进行序列分析。结果显示,与接种前EIAVLN40相比较,p15基因核苷酸和氨基酸平均差异率分别为1.8%(0～2.9%)和1.7%(0～3.6%);p9分别为2.5%(0.3%～3.8%)和2.9%(0～4.8%);gp45-Ⅰ分别为1.3%(0.3%～2.1%)和1.8%(0～3.2%),gp45-Ⅱ分别为2.1%(0～3.4%)和2.6%(0～4.7%)。在EIA发热期,每个基因核苷酸和氨基酸差异率最小;在亚临床阶段,每个基因平均差异率总体上相对较高。氨基酸变异位点分析发现,发病期(2-2、3-1)各基因氨基酸序列回复到亲本株EIAVLN40,其余时期p15基因氨基酸稳定变异位点16N/S、88T/S和112M/E;p9基因115E/G和122K/M;gp45-Ⅰ基因9T/F/L;gp45-Ⅱ基因21E/K和29G/S。此外,p15基因进化树结果显示,发热期(2-2、3-1)p15基因序列与EIAVLN40序列处于同一分支上,亚临床阶段大多数p15基因序列处于另一个大分支上;其他基因进化情况与p15基因类似。对EIAV p15、p9、gp45基因体内进化分析,有助于对EIAV在马体内感染进程的研究,为进一步研究EIAV持续感染和逃避免疫监视的机制提供参考。

关键词：马传染性贫血病毒 p15基因 p9基因 gp45基因差异率变异分析

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畜禽免疫的研究进展及其疫苗发展策略

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中国预防兽医学报 2012年第1期34卷 74-78页

作者：孙百明刘红梅祁克宗崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

疫苗免疫接种是控制畜禽传染病的重要手段之一,通过使用疫苗产生的保护性免疫应答可以使被免疫动物免受病原体的攻击。但一些畜禽主要病原体,如猪瘟病毒、新城疫病毒的疫苗免疫常常失败。有些疫苗能够提供短期保护,却不能使机体产生免... 详细信息

疫苗免疫接种是控制畜禽传染病的重要手段之一,通过使用疫苗产生的保护性免疫应答可以使被免疫动物免受病原体的攻击。但一些畜禽主要病原体,如猪瘟病毒、新城疫病毒的疫苗免疫常常失败。有些疫苗能够提供短期保护,却不能使机体产生免疫记忆;有些疫苗能够使机体产生免疫记忆,却不能使机体产生针对抗原的有效免疫保护;强烈的免疫反应并不一定确保能够形成有效的保护性免疫,如呼吸道感染常导致保护性免疫失效;许多疾病以综合征的形式危害动物,

关键词：疫苗免疫接种畜禽免疫保护性免疫免疫动物免疫记忆畜禽传染病新城疫病毒呼吸道感染

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牛支原体新基因(P18)的克隆表达及活性鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 184-187页

作者：宋志强李媛孙文静刘洋邹晓辉陈维周玉梅辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001

牛支原体(***)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前***粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,***表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多... 详细信息

牛支原体(***)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前***粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,***表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多个***基因,最终获得了一个表达纤溶酶原结合蛋白的新基因,并命名为P18。该基因表达大小约为67ku的重组蛋白。通过western blot鉴定,重组表达的P18蛋白可以被***抗体识别。进一步的试验表明,P18蛋白还具有纤溶酶原结合活性,从而推测该基因表达的蛋白可能是***的一个粘附相关因子。

关键词：牛支原体亚克隆表达粘附相关因子

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共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第4期34卷 251-256页

作者：邓晓辉陈柳叶伟成李军星崔尚金余斌云涛崔言顺孙元仇华吉张帅张存山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两... 详细信息

为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap(V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-ΔgE和pPRV-ΔgE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-ΔgE和rPRV-ΔgE。Western blot分析表明rPRV-V2C-ΔgE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64 ku和28 ku两个片段。重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C-ΔgE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖。本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词： PRV感染性克隆细菌人工染色体猪细小病毒猪圆环病毒2型

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适应无血清培养的HEK293细胞系的培育

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中国预防兽医学报 2012年第5期34卷 375-378页

作者：孟其麟孙元李红梅王楠田大勇仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系吉林延吉130001

为培育适合腺病毒增殖的无血清培养细胞系,本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(293SF),经检测293SF细胞具有稳定的支持腺病毒增殖与表达外源蛋白的能力;平均病变时间为97 h,比HEK293细胞缩短12.9%;毒... 详细信息

为培育适合腺病毒增殖的无血清培养细胞系,本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(293SF),经检测293SF细胞具有稳定的支持腺病毒增殖与表达外源蛋白的能力;平均病变时间为97 h,比HEK293细胞缩短12.9%;毒价达到107.48TCID50/mL,比HEK293细胞提高43.3%;并且稳定性良好,连续传16代后293SF细胞状态与易感性未发生变化。该细胞系为腺病毒的无血清培养奠定基础。

关键词： HEK293细胞无血清培养腺病毒

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抗马动脉炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2012年第10期34卷 827-829页

作者：赵世华戚亭郭巍李红梅王贵宾刘翠云仇铮田志革王征卢刚潘佳亮相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163000

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Wes... 详细信息

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这两株杂交瘤细胞分泌的MAb均能够识别EAV。EAV N蛋白MAb的制备,为EAV血清学检测方法的建立奠定了基础。

关键词：马动脉炎病毒核衣壳蛋白单克隆抗体

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