检索结果-内蒙古大学图书馆

中关村全球农业生物技术创新论坛

作者：刘杉杉赵亚荣吕超超王贵华胡峰蔺文成王晓玲崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 大北农动物医学中心北京 100097

猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪捷申病毒(PTV)是严重危害中国养猪业的重要病毒，经常继发或者混合感染。为了建立同时检测PTV、CSFV和PRRSV的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法，本试验根据国内外发表的有关检测PRRSV、C... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪捷申病毒(PTV)是严重危害中国养猪业的重要病毒，经常继发或者混合感染。为了建立同时检测PTV、CSFV和PRRSV的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法，本试验根据国内外发表的有关检测PRRSV、CSFV和PTV的引物．对比GenBank中登录的这3种病毒的序列。选出3对引物．通过优化反应条件，建立了检测这3种病毒的mRT-PCR检测方法，并进行了特异性试验和敏感性试验。特异性试验表明，mRT-PCR可以特异扩增出PRRSV ORF6基因45lbp片段、CSFV Ems基因343bp片段、PTV 5 -UTR基因163bp片段，而对大肠杆菌、猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒和猪流感病毒不能扩出;敏感性试验表明，mRT-PCR方法中3种病毒的最低核酸检出量分别是7.11×102(PRRSV),7.8l×103，(CSFV)，8.43×102(PTV)拷贝数/μL，比单个RT-PCR敏感性略低。利用该方法对69份送检病料样品进行检测，其中PRRsV和CSFV混合感染检出率为4.35％。PRRSV和PTV的混合感染检出率为11.59％，CSFV和PTV的混合感染检出率为13.04％，3种病毒的混合感染检出率为8.70％，与单个RT-PCR检测结果对比，符合率为98．6％。该方法快速简便，可以作为疾病的初步筛选。对临床早期诊断和流行病学调查具有重要意义。

关键词：猪繁殖障碍 RNA病毒多重RT-PCR检测临床应用

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禽网状内皮组织增生病诊断与防制研究进展

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畜牧兽医科技信息 2011年第5期27卷 12-13页

作者：吴俊铭任晓峰邓小芸王笑梅东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江科技职业学院双城150111

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,鸡群中REV流行比较严重;REV与马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和J亚... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,鸡群中REV流行比较严重;REV与马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus,ALV-J)等几种免疫抑制性病毒的混合感染也比较普遍。鉴于REV正越来越受到重视。本文就RE的诊断和综合防制作一综述。

关键词：禽网状内皮组织增生病(RE) 诊断防制

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猪捷申病毒8型rVP1-ELISA方法的建立及初步应用

猪捷申病毒8型rVP1-ELISA方法的建立及初步应用

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中关村全球农业生物技术创新论坛

作者：胡峰刘朝霞胡泉博崔尚金刘杉杉赵亚荣吕超超王贵华蔺文成王晓玲张超范王朝中国农业科学院哈尔滨兽医研究所善医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔演 150001 大北农动物医学中心北京 100097

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体检测方法，根据PTV-8 Jilin，2003的VP1基因组设计一对引物，利用RT-PCR扩增VPI基因,然后克隆至原核表达载体pET-30a中，获得重组质粒pET-VP1．并利用大肠杆菌Rosetta高效表达VP1蛋白。经鉴定表达的重组蛋白... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体检测方法，根据PTV-8 Jilin，2003的VP1基因组设计一对引物，利用RT-PCR扩增VPI基因,然后克隆至原核表达载体pET-30a中，获得重组质粒pET-VP1．并利用大肠杆菌Rosetta高效表达VP1蛋白。经鉴定表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在，分子量为36.2 ku，免疫印迹实验表明获得的重组蛋白具有良好的反应原性。应用***亲和层析柱纯化重组蛋白后作为ELISA诊断包被抗原，建立间接ELISA方法。经反应条件优化确定最佳抗原包被浓度为1μg/mL;待检血清最佳稀释倍数为1：100．其作用时间为60min;酶标二抗最佳稀释倍数为1：5000．其作用时间为30min;封闭液为8％的脱脂乳;显色时间为10min;阴阳性临界值为0.3。利用建立的方法对临床样品进行检测并与IFA作比对试验，结果表明该方法特异、敏感、重复性较好，适于PTV抗体检测。这为PTV抗体检测和流行病学调查提供了一种简便、快速的血清学检测方法。

关键词：猪捷申病毒抗体检测基因表达蛋白包被抗原间接ELISA法

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牛源A型多杀性巴氏杆菌培养特性和免疫原性的研究

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中国预防兽医学报 2010年第3期32卷 183-185,224页

作者：姜志刚马文戈于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了确定牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌(Pm)的培养特性,本研究采用脑心浸液(BHI)培养基分别于静止、75r/min、250r/min3种培养转速对Pm进行培养,并与加血BHI进行比较,通过绘制生长曲线和小鼠毒力试验对Pm的培养基和培养转速条件进行优... 详细信息

为了确定牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌(Pm)的培养特性,本研究采用脑心浸液(BHI)培养基分别于静止、75r/min、250r/min3种培养转速对Pm进行培养,并与加血BHI进行比较,通过绘制生长曲线和小鼠毒力试验对Pm的培养基和培养转速条件进行优化,确定最佳培养条件为,以37℃,0.1%全血脑心浸汤(MB-HI)培养基,75r/min培养16h。将培养的A型Pm灭活后,免疫SPF小鼠,同时设立B型Pm灭活苗免疫组,攻A型Pm后的结果显示,A型灭活菌的保护率为100%,而B型灭活苗免疫组全部死亡。本研究通过对牛源A型Pm培养特性和免疫原性的研究,为新型牛出血性败血症灭活疫苗的研制提供了实验依据。

关键词：多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型培养特性

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牛荚膜血清A型巴氏杆菌病的分子流行病学调查

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中国预防兽医学报 2010年第5期32卷 360-364页

作者：马文戈姜志刚于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究针对多杀性巴氏杆菌(Pm)特异性基因kmt1,进化保守基因16S rRNA基因,以及荚膜血清型A、B、D、E和F型对应的荚膜生物合成基因hayD-hayC、bcbD、dcbF、ecbJ和fcbD,设计特异性PCR扩增引物,采用PCR方法扩增相应基因和进行序列测定,并... 详细信息

本研究针对多杀性巴氏杆菌(Pm)特异性基因kmt1,进化保守基因16S rRNA基因,以及荚膜血清型A、B、D、E和F型对应的荚膜生物合成基因hayD-hayC、bcbD、dcbF、ecbJ和fcbD,设计特异性PCR扩增引物,采用PCR方法扩增相应基因和进行序列测定,并对分离菌株进行分子鉴定和同源性分析。结果显示,来自不同地区的分离菌株均含有Pm种特异性基因kmt1、A型荚膜生物合成基因hayD-hayC和16S rRNA基因。不同地区的分离株,kmt1基因的同源性为100%;A型荚膜生物合成基因hayD-hayC同源性大于99.9%;与国外牛源分离株的hayD-hayC基因的同源性大于98%;不同地区分离株的16S rRNA基因的同源性为100%,而与英国牛源分离株Pm338的16S rRNA基因的同源性高达99.93%。这些结果表明,在我国6个省市流行的牛出血性败血症由同一来源的荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致,与英国牛源A型分离株Pm338具有共同的进化来源。

关键词：多杀性巴氏杆菌分离株荚膜血清A型 16S rRNA kmt1基因进化分析

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我国发生Leachii支原体引起的犊牛多发性关节炎

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中国预防兽医学报 2010年第6期32卷 415-418页

作者：刘海军常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

2009年2月～6月我国某奶牛场发生严重的犊牛多发性关节炎,发病犊牛的症状与最早发生于澳大利亚的犊牛Leachii支原体关节炎非常相似。为确定病原,我们无菌采集2份具有典型症状犊牛的关节液样品进行实验室诊断,2份样品中均检测和分离出支... 详细信息

2009年2月～6月我国某奶牛场发生严重的犊牛多发性关节炎,发病犊牛的症状与最早发生于澳大利亚的犊牛Leachii支原体关节炎非常相似。为确定病原,我们无菌采集2份具有典型症状犊牛的关节液样品进行实验室诊断,2份样品中均检测和分离出支原体。将2个分离菌株的16S rRNA基因和LppA基因与参考支原体菌株进行核苷酸序列比对,发现这2株支原体的16S rRNA基因和LppA基因均与Leachii支原体具有最高的核苷酸序列同源性,分别为99.9%和99.6%。结果显示,本研究分离的2株支原体为Leachii支原体,分别命名为GN407和GN408。综合分析发病犊牛的临床病理学观察和关节液样品的实验室诊断结果,我们确定Leachii支原体为该奶牛场犊牛多发性关节炎的病因。

关键词： Leachii支原体多发性关节炎犊牛

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亚洲1型口蹄疫病毒L蛋白缺失株的构建及其生物学定性

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中国预防兽医学报 2010年第4期32卷 259-262页

作者：薛美王海伟于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为确定口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白缺失对其生物学特性的影响,本研究在已建立的Asia1型FMDV反向遗传操作平台基础上,利用融合PCR方法缺失L蛋白基因编码区,构建了缺失L蛋白的重组Asia1型FMDV(rFMDV-ΔL)。拯救病毒的一步生长曲线结果表明,rFM... 详细信息

为确定口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白缺失对其生物学特性的影响,本研究在已建立的Asia1型FMDV反向遗传操作平台基础上,利用融合PCR方法缺失L蛋白基因编码区,构建了缺失L蛋白的重组Asia1型FMDV(rFMDV-ΔL)。拯救病毒的一步生长曲线结果表明,rFMDV-ΔL与亲本病毒相比在BHK-21细胞中的复制水平下降10倍,乳鼠毒力试验表明rFMDV-ΔL的毒力比亲本毒株下降6倍。另外,rFMDV-ΔL在BHK-21细胞上产生病变的速度明显变慢,形成蚀斑的时间延长,致乳鼠死亡所需时间也比亲本毒株明显延长。本研究是关于亚洲1型FMDVL蛋白结构与功能研究的首次报道,为亚洲1型FMDVL蛋白结构与功能的研究奠定了基础。

关键词： Asia1型口蹄疫病毒 L蛋白缺失重组病毒拯救生物学定性

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马流感病毒NP基因的原核表达及其抗原性分析

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中国兽医科学 2010年第11期40卷 1124-1127页

作者：姬媛媛郭巍相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

采用RT-PCR方法从马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)中扩增了NP基因片段,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中,测序验证后转化入表达宿主菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌表达出约64ku、以可溶性形式存在的重组融... 详细信息

采用RT-PCR方法从马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)中扩增了NP基因片段,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中,测序验证后转化入表达宿主菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌表达出约64ku、以可溶性形式存在的重组融合蛋白,且在0.2mmol/L IPTG条件下诱导6h表达效果最好。表达产物经镍柱纯化后得到纯度较高的目的蛋白。经Western-blot和间接ELISA分析,纯化的蛋白只与抗马流感病毒阳性血清发生特异性反应,证实该蛋白具有良好的反应原性和特异性。

关键词：马流感病毒 NP基因原核表达抗原性

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我国A群牛轮状病毒感染的血清流行病学调查

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中国预防兽医学报 2010年第9期32卷 664-667页

作者：李鑫常继涛刘海军于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为调查A群牛轮状病毒(BRV)在我国不同地区牛群中的感染和流行情况,本研究采用间接ELISA检测2005年～2006年期间在我国12个不同地区收集的1760份牛血清中抗A群BRV抗体。结果显示,其强阳性血清225份(12.8%);中等阳性血清1240份(70.4%);弱... 详细信息

为调查A群牛轮状病毒(BRV)在我国不同地区牛群中的感染和流行情况,本研究采用间接ELISA检测2005年～2006年期间在我国12个不同地区收集的1760份牛血清中抗A群BRV抗体。结果显示,其强阳性血清225份(12.8%);中等阳性血清1240份(70.4%);弱阳性血清279份(15.9%);阴性血清16份(1%)。总抗体阳性率高达99%。不同地区强阳性、中等阳性及弱阳性血清所占比例有所不同。结果表明,A群BRV在我国牛群中的感染和流行不但非常广泛,而且极为严重。本研究对我国BRV感染进行了较大规模的血清流行病学调查,其结果可为我国犊BRV腹泻疾病的防制提供重要的依据。

关键词： A群牛轮状病毒感染 IgG抗体 ELISA 血清流行病学调查

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表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定

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中国预防兽医学报 2010年第2期32卷 81-85页

作者：冯军科朱远茂任宪刚祖立闯李娇史鸿飞高欲燃童光志薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BH... 详细信息

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。

关键词：牛呼吸道合胞体病毒 G蛋白基因牛疱疹病毒Ⅰ型磷酸钙-DNA沉淀法

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