检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 945-948页

作者：王芳雷震于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好... 详细信息

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性。以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法。该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%。上述结果表明,该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体。本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测。

关键词： GPV p32基因大肠杆菌表达 ELISA

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Asia1型和O型口蹄疫病毒中和性单克隆抗体的免疫保护性

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中国预防兽医学报 2009年第4期31卷 300-304页

作者：周国辉于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体,进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明,针对Asia1型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量(PD50)分别为1995和2371... 详细信息

本研究用微量中和试验鉴定具有中和活性的口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体,进而用乳鼠保护试验在体内验证单克隆抗体对FMDV感染的免疫保护作用。结果表明,针对Asia1型和O型FMDV的单克隆抗体3E11和8E8腹水的半数保护量(PD50)分别为1995和2371;仅用8PD50单抗3E11和11PD50单抗8E8,就可完全保护乳鼠耐受致死剂量Asia1型和O型FMDV的攻击。被动免疫的乳鼠在攻毒后体重增长的百分率随单抗腹水浓度的升高而增加,而且随着单抗腹水浓度的升高,乳鼠的起始死亡时刻后延、终点死亡时刻前移。

关键词：口蹄疫病毒中和性单克隆抗体保护性免疫

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牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究

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中国预防兽医学报 2009年第2期31卷 114-116,126页

作者：杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(VNTR-MIRU)基因分型法用于国内牛分枝杆菌的基因分型研究,初步了解我国牛分枝杆菌基因型种类、分布以及2种方法在我国应用的可行性。... 详细信息

为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(VNTR-MIRU)基因分型法用于国内牛分枝杆菌的基因分型研究,初步了解我国牛分枝杆菌基因型种类、分布以及2种方法在我国应用的可行性。本研究收集东北、西北、华北、华南4个地区分离的10株牛分枝杆菌分离株,分别采用Spoligotyping和VNTR-MIRU对这些分离株进行基因分型,比较两种方法的分型效果,评价其在牛分枝杆菌基因分型中的应用。结果表明,使用Spoligotyping方法,10株牛分枝杆菌呈现出4种基因型,使用VNTR-MIRU方法,10株分离株也呈现4种基因型;当两种方法联合使用时,可以分为5种基因型,其中的2个菌株具有独特的基因型,显示来自不同地区的牛分枝杆菌存在主要的流行型为BCG家族。将Spoligotyping和VNTR-MIRU联合使用,可有效提高牛结核病的分子流行病学调查和病原学的监测效果。

关键词：牛分枝杆菌 Spoligotyping VNTR MIRU 基因分型

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马属动物cyclinT1基因的扩增与真核表达载体的构建

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黑龙江畜牧兽医 2009年第12期 1-3页

作者：史楠赵立平吕晓玲马建周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

在慢病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子。为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank... 详细信息

在慢病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子。为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank中登录号为AF137509和AF190905)进行同源性比较。结果表明:马属动物CycT1大小为2184bp,编码727个氨基酸;4种CycT1基因氨基酸同源性在98%以上;将扩增出的马CycT1基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切及测序鉴定证实成功构建了pcDNA3.1(+)/eCycT1重组质粒。

关键词： CyclinT1 克隆序列分析真核表达载体

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噬菌体展示技术与病毒抗原表位研究

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中国预防兽医学报 2009年第3期31卷 241-246页

作者：于永忠李集临徐香玲于力哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

噬菌体展示技术（Phage display technology）始创于1985年，Smith首次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因，使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，从而创建了该技术。1988年Parmley等将已知抗原决定簇与PⅢ的N端融合... 详细信息

噬菌体展示技术（Phage display technology）始创于1985年，Smith首次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因，使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，从而创建了该技术。1988年Parmley等将已知抗原决定簇与PⅢ的N端融合呈现在噬菌体表面，可特异性地被抗体选中，因此提出了通过构建随机肽库了解抗体识别的抗原表位的设想。

关键词：噬菌体展示技术抗原表位 display 病毒基因插入丝状噬菌体 Smith 抗原决定簇

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O型FMDV VP1基因的表达鉴定及其多克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 568-571页

作者：任宪刚薛飞朱远茂冯军科史鸿飞高欲燃中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1。重组质粒鉴定验证后,转化至大... 详细信息

为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1。重组质粒鉴定验证后,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果显示重组蛋白的分子量约为38ku,以包涵体的形式存在。Westernblot与间接ELISA结果显示重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应。进一步将纯化的重组蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶1600。本研究为FMDV的其他研究工作提供了基础材料。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因表达鉴定多克隆抗体制备

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马传染性贫血病毒疫苗株S2基因不同变异位点逆向突变感染性克隆的体外复制特性分析

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 919-924页

作者：高旭姜成刚高华林跃智赵立平相文华周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室黑龙江哈尔滨15000 延边大学农学院动物医学系吉林延吉133002

为研究EIAV弱毒疫苗株(EIAVFDDV15)S2基因发生的稳定性突变对疫苗株特性的作用以及S2基因的功能,以EIAVFDDV15感染性克隆质粒pFDDV3-8为模板,根据疫苗研制过程中S2基因发生的4个主要稳定性变异位点,构建及拯救出S2基因不同差异位点逆向... 详细信息

为研究EIAV弱毒疫苗株(EIAVFDDV15)S2基因发生的稳定性突变对疫苗株特性的作用以及S2基因的功能,以EIAVFDDV15感染性克隆质粒pFDDV3-8为模板,根据疫苗研制过程中S2基因发生的4个主要稳定性变异位点,构建及拯救出S2基因不同差异位点逆向突变为强毒株相应氨基酸的6株感染性克隆衍生毒株。经实时定量PCR、逆转录酶活性和western blot等检测表明,疫苗株S2基因4个稳定性变异位点全部逆向突变的感染性克隆衍生毒vpFDDVS2r1-3-4-5在体外培养靶细胞中的复制水平低于亲本疫苗株感染性克隆衍生病毒和其他组合的逆向突变的感染性克隆衍生病毒,提示EIAV疫苗株S2蛋白4个稳定突变位点的综合作用可能是决定疫苗株和强毒株特性差异的因素之一。以上结果为体内感染S2基因逆向突变感染性克隆衍生病毒,进一步揭示S2基因在EIAV弱毒疫苗致弱过程中的作用提供了依据。

关键词：马传染性贫血病毒 S2基因逆向突变感染性克隆复制特性

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牛分枝杆菌二价组合及融合DNA疫苗的免疫效果

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中国兽医学报 2009年第2期29卷 134-138页

作者：宫强刘思国王春来刘慧芳刘建东施远祥阿曼古丽孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆动物防疫监督总站新疆乌鲁木齐830063

利用PCR技术和重叠延伸剪接(SOE)技术扩增牛分枝杆菌ag85b、mpb64基因和ag85b-mpb64融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建二基因融合(pCDNA-MPB64/Ag85B,pCMA)和二价组合(pCDNA-Ag85B+pCDNA-MPB64,pCA+pCM)DNA疫苗。以牛分枝杆菌卡介苗(BCG)为阳性对照,以pCDNA3.1(+)和PBS为阴性对照,免疫BALB/c小鼠,检测血清特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况和IFN-γ及IL-2分泌情况。结果显示:融合DNA疫苗组免疫小鼠血清抗体水平、刺激值(SI值)及IFN-γ和IL-2的分泌水平均明显高于其他各组(P<0.05)。二价组合DNA疫苗组的体液和细胞免疫指标与BCG组相当(P>0.05),而显著高于两阴性对照组(P<0.05)。

关键词：牛分枝杆菌融合DNA疫苗组合DNA疫苗

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番鸭呼肠孤病毒σB蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2009年第9期39卷 786-789页

作者：张云陈晓丹李永锋刘明葛明魏萍东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以纯化复性的原核表达的番鸭呼肠孤病毒(MDRV)σB蛋白为抗原免疫BALB/c雌性小鼠,按常规方法制备单克隆抗体,通过间接ELISA、Western-blot和免疫组织化学试验进行筛选及鉴定。结果显示,获得4株能够稳定分泌抗σB蛋白单克隆抗体的杂交瘤... 详细信息

以纯化复性的原核表达的番鸭呼肠孤病毒(MDRV)σB蛋白为抗原免疫BALB/c雌性小鼠,按常规方法制备单克隆抗体,通过间接ELISA、Western-blot和免疫组织化学试验进行筛选及鉴定。结果显示,获得4株能够稳定分泌抗σB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(A3F、B2B、C3E和D2G),其亚型分别属于IgG2bI、gG2bI、gM和IgM。采用小鼠体内诱生法制备的腹水均能与MDRV的σB蛋白发生特异性反应,表明,制备的单克隆抗体能够识别天然构象的σB蛋白。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 σB蛋白单抗

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不同宿主源NDV毒株对SPF鸡致病性研究

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中国预防兽医学报 2009年第2期31卷 99-103,109页

作者：刘怀然孙敏华葛鑫刘胜旺刘培欣孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为阐明不同宿主及不同基因型新城疫病毒(NDV)对SPF鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的基因Ⅶd亚型NDV6株,鸡源基因Ⅲ型和鸽源基因Ⅵb型毒株各1株,以及基因Ⅸ型强毒F48E9,共9株NDV毒株进行致病性试验。在对各毒株的EID50及主... 详细信息

为阐明不同宿主及不同基因型新城疫病毒(NDV)对SPF鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的基因Ⅶd亚型NDV6株,鸡源基因Ⅲ型和鸽源基因Ⅵb型毒株各1株,以及基因Ⅸ型强毒F48E9,共9株NDV毒株进行致病性试验。在对各毒株的EID50及主要致病指数MDT、ICPI测定基础之上,以相同剂量感染15日龄SPF鸡,观察临床症状及剖检病变,计算发病率和死亡率,并在攻毒后不同时间采集主要组织样品,以SYBR GreenI Real-timePCR检测病毒最早出现时间及病毒载量。结果表明,6株基因Ⅶd亚型NDV毒株导致SPF鸡100%发病,死亡率90%以上,属于高致病性毒株;基因Ⅲ、Ⅵb型毒株导致SPF鸡发病但不死亡,属于中等毒力毒株。Ⅶd亚型毒株与F48E9株攻毒后SPF鸡在病理变化、组织嗜性及病毒载量上没有显著差异。根据毒株的MDT、ICPI指数及攻毒鸡病程综合判断,Ⅶd亚型毒株在致病性上与F48E9株差异不显著。健康野鸟携带基因Ⅶd亚型高致病性NDV,在NDV的自然生态传播过程中起重要作用,提示应该加强对野鸟的流行病学监测及相关研究。

关键词：新城疫病毒基因型致病性病毒载量

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