检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第6期31卷 448-453页

作者：袁婧刘长明魏萍危艳武张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊... 详细信息

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(FA),用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16h可检测到抗原阳性细胞,接种后60h～72h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。IFA为PRRS的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感、特异的检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征直接免疫荧光诊断

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重组鸡β-防御素6基因的表达和生物学特性的研究

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中国预防兽医学报 2009年第6期31卷 476-480页

作者：韩宗玺廖文艳王瑞琴邵昱昊马得莹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030

从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因。经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204bp,编码68个氨基酸残基。根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树。发现鸡AvBD6氨基酸序... 详细信息

从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因。经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204bp,编码68个氨基酸残基。根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树。发现鸡AvBD6氨基酸序列与鸡AvBD7氨基酸序列同源性最高,为62.7%。将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,进行原核表达。SDS-PAGE电泳表明,表达的重组鸡AvBD6融合蛋白分子量约为32ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定。结果表明,重组鸡AvBD6融合蛋白对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌的抗菌活性较弱,对猪霍乱沙门氏菌无抗菌活性。重组鸡AvBD6蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度范围为31.25μg/mL～250μg/mL。此外,重组鸡AvBD6蛋白对温度和酸碱度有较高的稳定性。

关键词：鸡β-防御素-6 遗传进化抗菌活性

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牛霉形体PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2009年第5期39卷 416-420页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体... 详细信息

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(***)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性。利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法。

关键词：牛霉形体牛传染性胸膜肺炎聚合酶链式反应

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1型鸭肝炎病毒E53株和HP-1株全基因组序列分析

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中国兽医科学 2009年第12期39卷 1057-1061页

作者：陈晓丹张云王钰郭冬春李永锋王君伟中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院传染病研究室黑龙江哈尔滨150030

根据已发表的1型鸭肝炎病毒（DHV-1）基因组序列设计并合成引物,通过RT-PCR方法对DHV-1 E53株和HP-1株的基因组序列进行分段扩增并测序。BLAST分析确定为DHV-1型基因组序列,GenBank登录号分别为EF151313和EF151312。E53株与已发表的参... 详细信息

根据已发表的1型鸭肝炎病毒（DHV-1）基因组序列设计并合成引物,通过RT-PCR方法对DHV-1 E53株和HP-1株的基因组序列进行分段扩增并测序。BLAST分析确定为DHV-1型基因组序列,GenBank登录号分别为EF151313和EF151312。E53株与已发表的参考毒株的核苷酸同源性为94.6%~99.4% HP-1株与已发表的参考毒株的核苷酸同源性为94.4%~99.6%。系统进化树分析结果表明,E53株与北京BJ株进化关系最近 HP-1株与R85952株进化关系最近。

关键词： 1型鸭肝炎病毒全基因组序列分析

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牛支原体套式PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 709-711页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛... 详细信息

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛鼻拭子中扩增出目的片段,而且结果与病原分离结果一致。特异性试验结果表明,该方法与其它支原体无交叉反应,是一种特异性强、敏感性高的牛支原体检测方法。

关键词：牛支原体无乳支原体牛传染性胸膜肺炎套式PCR

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O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及生物学特性分析

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黑龙江畜牧兽医 2009年第4期 1-4页

作者：于永忠赵磊周国辉徐香玲于力哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150025 兽医生物技术国家重点实验室／中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

以纯化的O型口蹄疫泛亚毒株O／YS／CHA／05抗原免疫BALB／c小鼠，在加强免疫3d后，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经间接ELISA法和间接免疫荧光法（IFA）筛选，获得2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为4A8和1F6，同时... 详细信息

以纯化的O型口蹄疫泛亚毒株O／YS／CHA／05抗原免疫BALB／c小鼠，在加强免疫3d后，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经间接ELISA法和间接免疫荧光法（IFA）筛选，获得2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为4A8和1F6，同时确定二者均为O型口蹄疫病毒特异性单克隆抗体。中和试验和Western—blot分析结果表明，4A8和1F6均识别线性表位，无中和活性。亚类鉴定结果显示：4A8和1F6重链类型分别为IgG1和IgG2b；轻链类型均为κ。相加ELISA分析结果表明，两者针对的抗原位点相同或相近。

关键词：口蹄疫病毒单克隆抗体鉴定

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猪戊型肝炎病毒基因ORF2片段克隆及其原核表达

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中国兽医杂志 2009年第3期45卷 17-19页

作者：李丹丹张馨心于婧赵立平相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种无包膜的正义链RNA病毒,直径为27－32nm,表面粗糙,呈不规则球型。由于HEV组织培养困难,难以研制减毒或灭活疫苗,因此,利用基因工程技术制备重组抗原,研制多肽疫苗成为戊型肝炎研究的热点。... 详细信息

猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种无包膜的正义链RNA病毒,直径为27－32nm,表面粗糙,呈不规则球型。由于HEV组织培养困难,难以研制减毒或灭活疫苗,因此,利用基因工程技术制备重组抗原,研制多肽疫苗成为戊型肝炎研究的热点。鉴于我国猪戊型肝炎病毒的研究处于开始阶段,用于猪戊型肝炎的血清学检测方法还没有确立,我们对猪戊型肝炎病毒株ORF2片段进行了原核表达,并对其抗原性进行了初步鉴定,以期获得可作为诊断用重组蛋白,为进一步建立诊断方法和病毒结构蛋白抗原表位的筛选奠定基础。[第一段]

关键词：戊型肝炎病毒原核表达 ORF2 病毒基因猪克隆基因工程技术病毒结构蛋白

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应用TaqMan荧光定量PCR检测H3N8亚型马流感病毒

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中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 614-617,626页

作者：戴伶俐郭巍李雪峰黄文强赵立平阿依吐拉.肉孜相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马病研究中心黑龙江哈尔滨150001 新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830001

为建立马流感病毒(EIV)的检测方法,本试验针对H3N8亚型EIV血凝素(HA)基因高度保守序列设计并合成了2对引物和1条TaqMan荧光探针,建立了TaqMan荧光定量PCR方法。经用TaqMan荧光定量PCR、RT-PCR和病毒分离方法分别检测新疆等省135份疑似EI... 详细信息

为建立马流感病毒(EIV)的检测方法,本试验针对H3N8亚型EIV血凝素(HA)基因高度保守序列设计并合成了2对引物和1条TaqMan荧光探针,建立了TaqMan荧光定量PCR方法。经用TaqMan荧光定量PCR、RT-PCR和病毒分离方法分别检测新疆等省135份疑似EIV马鼻拭子样品,其结果表明:3种方法的马流感检出率分别为54.07%、37.78%、0.89%;TaqMan荧光定量PCR可检出马流感病毒基因组RNA的灵敏度可达10拷贝/反应,而且与其他马呼吸道病毒均无交叉反应,具有良好的特异性、敏感性和重复性。该方法为H3N8亚型马流感的早期诊断及分子流行病学调查等提供了一种新的快速、准确的定量检测技术。

关键词： TaqMan探针荧光定量PCR H3N8亚型马流感病毒

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中国株EIAV S2基因逆向突变感染性克隆的构建及体外感染性评价

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病毒学报 2009年第4期25卷 309-315页

作者：高旭姜成刚韩秀娥赵立平沈荣显相文华周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物传染病研究室哈尔滨150001 延边大学农学院动物医学系延吉133002 东北农业大学黑龙江省乳品工业技术开发中心哈尔滨150030

以中国株EIAV的驴强毒株EIAVDV115与疫苗株EIAVFDDV15的S2基因变化规律为依据,利用反向遗传技术对EIAV弱毒疫苗株全基因组感染性克隆pFDDV3-8的S2基因区进行逆向突变,构建了含有强毒株EIAVDV115S2基因区内4个稳定点突变的克隆质粒pFDDVS... 详细信息

以中国株EIAV的驴强毒株EIAVDV115与疫苗株EIAVFDDV15的S2基因变化规律为依据,利用反向遗传技术对EIAV弱毒疫苗株全基因组感染性克隆pFDDV3-8的S2基因区进行逆向突变,构建了含有强毒株EIAVDV115S2基因区内4个稳定点突变的克隆质粒pFDDVS2r1-3-4-5,将该质粒转染FDD后进行体外继代盲传,经RT-PCR、逆转录酶活性、间接免疫荧光等检测后,显示经EIAV克隆质粒pFDDVS2r1-3-4-5转染的FDD盲传3代后,可在转染的FDD细胞培养物的上清液中检测到EIAV逆转录酶活性;该细胞培养物经RT-PCR和间接免疫荧光检测均呈EIAV阳性;在电镜下可观察到典型EIAV粒子。证明已成功拯救经EIAVS2基因逆向突变后的衍生病毒vpFDDVS2r1-3-4-5。比较vpFDDVS2r1-3-4-5衍生病毒与亲本克隆衍生病毒的复制动力学,表明前者的复制比后者略滞后。以上结果提示,对疫苗株S2基因的突变未明显影响EIAV的体外复制。

关键词：马传染性贫血病毒 S2基因逆向突变感染性克隆

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载牛冠状病毒N蛋白壳聚糖微球的免疫效果评价

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中国预防兽医学报 2009年第11期31卷 882-886页

作者：孙庆申李鑫车小琼常继涛杨勇博于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江大学生命科学学院/微生物黑龙江省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150080

为了对壳聚糖分子作为佐剂的缓释效果进行免疫学评价,本研究合成了牛冠状病毒DB2毒株N蛋白基因的3'端第487位～1287位碱基,用大肠杆菌对其进行了高效表达,通过SDS-PAGE电泳分离、电洗脱纯化该牛冠状病毒N蛋白(BCVN)。以戊二醛为交联... 详细信息

为了对壳聚糖分子作为佐剂的缓释效果进行免疫学评价,本研究合成了牛冠状病毒DB2毒株N蛋白基因的3'端第487位～1287位碱基,用大肠杆菌对其进行了高效表达,通过SDS-PAGE电泳分离、电洗脱纯化该牛冠状病毒N蛋白(BCVN)。以戊二醛为交联剂,采用乳化交联的方法制备空白壳聚糖微球。利用吸附法制备载BCVN蛋白的壳聚糖微球,通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测免疫鼠血清中的抗体水平,由此评价壳聚糖微球对BCVN的缓释作用和佐剂效应。结果表明,壳聚糖微球的形态较好、表面光滑、分散性较好,平均粒径为6.50±1.77μm,电势分布在36mV,吸附BCVN蛋白的壳聚糖微球在体内所产生的免疫效果明显优于唯N蛋白组,说明载BCVN蛋白的壳聚糖微球在体内具有一定的缓释效果,使N蛋白在体内缓慢释放而长时间诱导抗体的产生,该研究结果为以壳聚糖微球作为疫苗佐剂积累了实验数据。

关键词：壳聚糖牛冠状病毒核衣壳蛋白吸附动物接种缓释作用

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