检索结果-内蒙古大学图书馆

2014年部分地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查

中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 335-338页

作者：常铁城陈建飞冯力倪宏波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25... 详细信息

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25个,占总数的59.52%;混合感染PEDV和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的猪场有2个,占总数的4.76%,PEDV和猪轮状病毒(Po RV)混合感染猪场有7个,占总数的16.67%;3种病毒均混合感染的猪场有2个,占总数的4.76%。结果表明PEDV在我国的猪腹泻病病原中仍占主导地位。对2014年分离的21株PEDV ORF3基因进行测序分析,并与Gen Bank中登录的12株国内外PEDV参考株相关序列进行遗传变异分析。这33个PEDV株的ORF3基因系统发育树显示,目前我国的PEDV现地病毒株分布在Ⅰ群中的Ⅰ-Ⅰ亚群和Ⅰ-Ⅲ亚群。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行病学调查 ORF3基因序列分析

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猪链球菌2型SSU05-1311蛋白的表达纯化和多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2016年第3期46卷 310-314页

作者：杨宝玲陈福广谢芳刘思国沈国顺张跃灵沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110866 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以猪链球菌2型菌株05ZYH 33的基因组作为模板,PCR扩增SSU 05-1311(简称ssFbp)基因,克隆到表达载体pET22b中,构建重组质粒pET22b-ssFbp。该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达SsFbp蛋白,并通过亲和层析纯化。纯化的SsFbp... 详细信息

以猪链球菌2型菌株05ZYH 33的基因组作为模板,PCR扩增SSU 05-1311(简称ssFbp)基因,克隆到表达载体pET22b中,构建重组质粒pET22b-ssFbp。该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达SsFbp蛋白,并通过亲和层析纯化。纯化的SsFbp蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多克隆抗体。结果显示,Ss Fbp蛋白以可溶形式表达,分子质量大小为112ku。每升培养物获得SsFbp重组蛋白20 mg,纯度大于95%。免疫筛选后获得了ss Fbp蛋白的多克隆抗体。Western-blot结果显示,多克隆抗体能特异识别05ZYH33细胞壁蛋白组分中的SsFbp蛋白。本研究为进一步研究SsFbp蛋白的功能及其在致病性中的作用奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型 SsFbp蛋白表达和纯化多克隆抗体

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表达新城疫病毒F基因重组鸭肠炎病毒的构建

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 92-95页

作者：张苗苗李慧昕韩宗玺刘怀然王玉龙邵昱昊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸭肠炎病毒(DEV),本研究以实验室前期构建的表达绿色荧光蛋白的重组DEV(r DEV-US10-EGFP)为基础,通过PCR扩增NDV F基因,构建了携带F基因表达盒的转移质粒p US10-TPA-F。将转移质粒与r DEV-US10-E... 详细信息

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸭肠炎病毒(DEV),本研究以实验室前期构建的表达绿色荧光蛋白的重组DEV(r DEV-US10-EGFP)为基础,通过PCR扩增NDV F基因,构建了携带F基因表达盒的转移质粒p US10-TPA-F。将转移质粒与r DEV-US10-EGFP基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞。经过反向蚀斑筛选,获得表达NDV F基因的r DEV-US10-F。对重组区域US10基因测序结果表明,F基因正确插入至US10基因编码区内。将重组病毒传至15代,F基因仍能够稳定表达,表明重组病毒具有稳定的遗传特性,并且与亲本病毒株具有相似的生长曲线。本研究为研发NDV-DEV活载体疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒 F基因鸭肠炎病毒重组病毒

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副猪嗜血杆菌间接ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 576-579页

作者：刘双红李大鹏徐胜奎谢芳李刚李婷孙斌王春来黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为建立一种快速检测副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学方法,本实验采用重组表达的HPS细胞致死膨胀毒素B亚基蛋白(r Cdt B)作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测HPS血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测HPS阳性血清和其他猪病病原... 详细信息

为建立一种快速检测副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学方法,本实验采用重组表达的HPS细胞致死膨胀毒素B亚基蛋白(r Cdt B)作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测HPS血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测HPS阳性血清和其他猪病病原阳性血清,除了HPS阳性血清呈阳性外,其余均为阴性,表明该方法特异性良好。批内重复和批间重复的最大变异系数分别小于7%和8%。此外,将Cdt B-ELISA方法与商品化试剂盒Bio Chek HPS-Opp A间接ELISA抗体检测方法对背景明确的116份HPS阳性血清和112份HPS阴性血清进行检测,商品化试剂盒阳性符合率为25%,阴性血清符合率为100%,总符合率为62%,其中Cdt B-ELISA方法对阳性血清的检出率高于商品化试剂盒。应用Cdt B-ELISA方法检测330份临床猪血清样品,结果显示,HPS抗体阳性检出率为11.8%。该方法可以用于HPS的临床检测,为HPS流行病学调查和防控提供了一种快速有效的检测方法。

关键词：副猪嗜血杆菌 rCdtB 间接ELISA

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中国兽医科学 2016年第2期46卷 258-263页

作者：邵家日王显兵汪洋李媛刘素丽王琪陈莹高丽萍周长平辛九庆吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为研究牛支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的分子机制,用牛支原体脂质相关膜蛋白刺激EBL细胞,发现牛支原体LAMPs能够诱导IL-1β的表达。进一步研究表明,p38 MAPK,ERK MAPK和JNK MAPK信号通路在牛支原... 详细信息

为研究牛支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活MAPK信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β的分子机制,用牛支原体脂质相关膜蛋白刺激EBL细胞,发现牛支原体LAMPs能够诱导IL-1β的表达。进一步研究表明,p38 MAPK,ERK MAPK和JNK MAPK信号通路在牛支原体LAMPs刺激EBL细胞诱导IL-1β表达中起重要作用。过表达TLR1、TLR2,LAMPs刺激EBL细胞,IL-1β的表达量增加。进一步研究表明,TLR接合体髓样化初级反应因子88(My D88)和IRAK4在LAMPs刺激IL-1β诱导中起重要作用。结果表明,牛支原体LAMPs刺激EBL由TLR2、TLR1、MyD88和IRAK4 MAPK信号通路细胞诱导IL-1β的表达。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白 MAPK信号通路

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大肠杆菌肽基脯氨酰顺反异构酶slyD基因缺失株的构建及生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 6-10页

作者：周薇刘松艳王曼宇衣菲田秋丰陈志宝刘思国于申业黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D... 详细信息

肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIases)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酞顺/反异构。为研究大肠杆菌PPIases sly D基因缺失对其生物学特性的影响,本研究利用改进的Red重组方法构建大肠杆菌BL21株的sly D缺失株,命名为BL21Δsly D;并通过突变株的形态学变化、生长特性、生化代谢特性、耐酸性、耐渗透压能力、耐温度缺氧能力对其进行鉴定。结果表明,缺失株生长速率、耐高温缺氧能力与亲本株相比差异不显著,然而突变株的耐酸性与耐渗透压能力则显著低于亲本株(p<0.01),表明大肠杆菌PPIases sly D基因可能影响双组份调控系统的调节作用。本研究构建的大肠杆菌sly D基因缺失株BL21Δsly D为进一步研究大肠杆菌sly D基因的功能奠定了基础。

关键词：大肠杆菌肽基脯氨酰顺反异构酶生物学特性环境压力

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 87-91页

作者：王琪汪洋李媛刘素丽邵家日陈莹高丽萍周长平李春艳辛九庆东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是经典的细胞信号通路之一,主要包括JNK、P38、ERK 3条信号途径。为明确丝状支原体丝状亚种(Mmm)的脂质相关蛋白(LAMPs)是通过MAPK信号通路诱导胎牛肺细胞(EBL)IL-1β的分泌,本研究通过荧光定量PCR检测... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是经典的细胞信号通路之一,主要包括JNK、P38、ERK 3条信号途径。为明确丝状支原体丝状亚种(Mmm)的脂质相关蛋白(LAMPs)是通过MAPK信号通路诱导胎牛肺细胞(EBL)IL-1β的分泌,本研究通过荧光定量PCR检测IL-1β的m RNA表达水平,结果显示LAMPs可以诱导EBL细胞分泌IL-1β,并确定Mmm的LAMPs刺激EBL细胞的最佳时间为6 h,最佳剂量为1μg/m L;将JNK、P38及ERK抑制剂分别加入培养的EBL细胞后,IL-1β的m RNA表达水平均受到显著抑制(p<0.05);将p CMV-HA-TLR2转染EBL细胞使其过表达和抗体封闭TLR2两种方式处理,并采用JNK、P38及ERK抑制剂分别处理EBL细胞,经检测过表达TLR2实验组的IL-1βm RNA表达水平上调,然而抗体封闭TLR2实验组的IL-1βm RNA表达水平下调,表明TLR2通过MAPK信号通路对IL-1β的分泌进行调控;采用牛IL-1β的ELISA试剂盒对细胞上清液中IL-1β浓度的检测结果显示,其与IL-1β的m RNA表达水平变化趋势一致。上述结果表明Mmm的LAMPs可以诱导EBL细胞,激活TLR2依赖的MAPK信号通路,从而引起IL-1β的分泌。

关键词：丝状支原体丝状亚种脂质相关蛋白 MAPK信号通路 IL-1β

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鸡毒支原体S6株P25蛋白粘附特性的研究

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 105-110页

作者：高利萍李媛周长平刘素丽邵家日王琪陈莹王显兵辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病创新团队黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用。为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进行分析,选取了MG的一个假定膜蛋白基因,其大小为675 bp(编码... 详细信息

鸡毒支原体(MG)粘附蛋白是MG定植于宿主细胞表面的关键因子,并在MG致病过程中发挥着重要作用。为筛选并鉴定MG新的粘附蛋白,本研究根据生物信息学软件对MG S6基因组全部序列进行分析,选取了MG的一个假定膜蛋白基因,其大小为675 bp(编码225个氨基酸,分子量约25 ku,将其命名为P25)。通过MG膜蛋白组分的提取及western blot鉴定,结果显示P25分布在MG膜的表面。利用PCR扩增MG p25基因并通过定点突变将其序列中TGA终止密码子突变为TGG(编码色氨酸),通过原核表达其编码的重组P25蛋白(r P25),并以r P25作为免疫原免疫兔子制备高免血清。激光共聚焦显微镜观察显示r P25和MG均对鸡胚成纤维细胞系(DF-1)具有明显的粘附作用,而ELISA和流式细胞仪检测结果则表明r P25和MG对DF-1细胞的粘附为特异性粘附,其中r P25抗血清可以明显抑制r P25和MG对DF-1细胞的粘附作用,从而证明P25为MG的一个粘附相关蛋白。

关键词：鸡毒支原体 DF-1细胞激光共聚焦 ELISA 流式细胞仪

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肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 31-34页

作者：刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

延伸热不稳定因子(EF-Tu)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是在蛋白质合成过程中负责肽链的延伸。为研究肠炎沙门菌EF-Tu的tuf A基因缺失对环境压力的应答变化,本研究利用改进的Red同源重组方法构建肠炎沙门氏菌SM6株的tuf A缺失株,... 详细信息

延伸热不稳定因子(EF-Tu)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是在蛋白质合成过程中负责肽链的延伸。为研究肠炎沙门菌EF-Tu的tuf A基因缺失对环境压力的应答变化,本研究利用改进的Red同源重组方法构建肠炎沙门氏菌SM6株的tuf A缺失株,命名为SM6Δtuf A,并鉴定缺失株的形态学变化,分析耐酸性、渗透应力、温度缺氧应力、氧化应力的改变。结果表明缺失株对酸性条件及升温缺氧的耐受与亲本株相似;对渗透压的耐受稍强于亲本株,但差异不显著;对氧化压力的耐受显著弱于亲本株。本研究构建的肠炎沙门氏菌tuf A基因缺失株SM6Δtuf A,为进一步研究EF-Tu在沙门氏菌的生物学和致病机制中的作用奠定了基础。

关键词：延伸因子EF-Tu Red同源重组沙门氏菌生物学特性环境压力

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一株虹鳟嗜冷益生菌Aeromonas popoffii的分离鉴定及体外抗病毒特性研究

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 40-44页

作者：王宏磊崔红玉卢彤岩徐黎明刘淼王云峰王笑梅东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150028

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测... 详细信息

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测序比对,鉴定为Aeromonas popoffii,将其命名为HL60分离株。通过耐胆酸游离酸试验、耐酸试验、体外抑菌试验和体外对鲤鱼上皮细胞(EPC)增殖影响试验及体外抗病毒(传染性造血器官坏死病病毒)试验,结果表明*** HL60分离株具有良好的益生特性及体外抗病毒活性。本研究分离获得的*** HL60分离株为冷水鱼益生菌株活载体疫苗开发及应用奠定了基础。

关键词：益生菌嗜冷菌抗病毒特性益生特性

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