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第八届全国病毒学学术研讨会

作者：杨德成于永忠于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室黑龙江哈尔滨 150001

@@0型泛亚潜系口蹄疫病毒在上个世纪末大规模流行于亚、非、欧以及南美大陆，造成严重的经济损失，目前该病毒仍然在一些国家和地区流行。本研究用泛亚口蹄疫病毒反向遗传操作平台，对近20年间的泛亚口蹄疫病毒的抗原演化进行定点回复... 详细信息

@@0型泛亚潜系口蹄疫病毒在上个世纪末大规模流行于亚、非、欧以及南美大陆，造成严重的经济损失，目前该病毒仍然在一些国家和地区流行。本研究用泛亚口蹄疫病毒反向遗传操作平台，对近20年间的泛亚口蹄疫病毒的抗原演化进行定点回复突变，进而将这些拯救的突变株与一系列泛亚口蹄疫病毒的单克隆抗体反应，发现P153Q突变病毒不能与单抗1F6(不具备中和活性)结合。

关键词：非中和性表位关键氨基酸口蹄疫病毒中和活性单克隆抗体反应定点回复突变

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放线杆菌外膜蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活与毒性检测

放线杆菌外膜蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活与毒性检测

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：倪宏波王聃赫明雷刘思国杜艳芬林靖凯刘慧芳王春来司薇常月红彭玮中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆 163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001

目的：构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白)，并检测其是否具有自身激活及毒性作用。方法：从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA，用PCR方法获得omp，克隆pGBKT7载体上，酶切鉴定及序列分析，... 详细信息

目的：构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白)，并检测其是否具有自身激活及毒性作用。方法：从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA，用PCR方法获得omp，克隆pGBKT7载体上，酶切鉴定及序列分析，并检测pGBKT7-omp在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用。结果：实验成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-omp，并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。结论：PGBKT7-omp可压用在酵母双杂交系统中，寻找猪肺泡上皮细胞cDNA文库中与omp相互作用的蛋白质，为筛选胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白与肺泡上皮细胞相互作用的蛋白奠定了重要基础。

关键词：猪传染性胸膜肺炎胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白诱饵质粒自激活作用毒性检测

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仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与防制

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畜禽业 2009年第5期20卷 68-71页

作者：苗岚飞张振梅祝超姚贵哲李金敏崔尚金东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

新生仔猪的肠道疾病是限制养猪业养殖效率和经济收益最重要的因素之一。它主要是导致仔猪死亡率上升和饲料效率的降低，进而可能使生猪推迟上市．猪的质量下降。因此，此类疾病应引起足够重视。本文就仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与预防... 详细信息

新生仔猪的肠道疾病是限制养猪业养殖效率和经济收益最重要的因素之一。它主要是导致仔猪死亡率上升和饲料效率的降低，进而可能使生猪推迟上市．猪的质量下降。因此，此类疾病应引起足够重视。本文就仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与预防进行探讨和总结如下。

关键词：新生仔猪肠道疾病鉴别诊断防制经济收益养殖效率饲料效率养猪业

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胎儿弯杆菌病TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

胎儿弯杆菌病TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：赵海玲刘慧芳杜艳芬司微王春来刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

本文根据胎儿弯杆菌毒力因子表面蛋白(SapA)的基因序列设计引物和一条特异的TaqMan水解探针，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测胎儿弯杆菌的TaqMan荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感性研究结果显示，该方法检测胎儿弯... 详细信息

本文根据胎儿弯杆菌毒力因子表面蛋白(SapA)的基因序列设计引物和一条特异的TaqMan水解探针，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测胎儿弯杆菌的TaqMan荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感性研究结果显示，该方法检测胎儿弯杆菌结果均为阳性，而非胎儿弯杆菌均为阴性;对带有SapA基因的阳性质粒的检测敏感性为108-102拷贝/μl范围内具有良好的线性关系，可敏感地检测到模板中13个拷贝的细菌DNA，其灵敏度是常规PCR方法的100倍。该方法具有简便、快速、特异性强、敏感性高等特点。该方法为胎儿弯杆菌病的定性HE定量检测提供了有力的工具，为胎儿弯杆菌快速检测试剂盒的研制打下了良好的基础。

关键词：胎儿弯杆菌免疫学检验蛋白基因荧光PCR检测

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猪细小病毒分离株感染初孕母猪的病毒组织分布和病理学观察

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养猪 2009年第3期 65-68页

作者：苗岚飞胡守萍张超范张卓崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏... 详细信息

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结,胎猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和小肠,进行组织病毒载量测定和组织病理学检测。实时定量PCR检测结果显示,攻毒组母猪的心脏、脾脏、肺脏、肾脏和子宫内膜存在病毒复制,子宫内病毒含量最高;胎猪的心脏、脾脏、肺脏中存在病毒复制。对照组脏器中无病毒复制。病理切片结果显示,攻毒组母猪肺脏出现细支气管性肺炎,脾脏出现淋巴细胞减少,心脏、肝脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结未见明显的组织病理学变化;胎猪的脏器未见明显的病理损伤。对照组未发现组织病理学变化。

关键词：猪细小病毒病毒组织分布组织病理学变化

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放线杆菌外膜蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活与毒性检测

放线杆菌外膜蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活与毒性检测

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：倪宏波刘思国杜艳芬林靖凯刘慧芳王春来司薇常月红彭玮王聃赫明雷中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学动物科技学院

目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白),并检测其是否具有自身激活及毒性作用.方法:从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA,用PCR方法获得omp,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7... 详细信息

目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵质粒载体pGBKT7-omp(胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白),并检测其是否具有自身激活及毒性作用.方法:从胸膜肺炎放线杆菌提取基因组DNA,用PCR方法获得omp,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-omp在酵母双杂交系统中的自激活和毒性作用.结果:实验成功构建了诱饵质粒载体pGBKT7-omp,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用.结论:pGBKT7-omp可应用在酵母双杂交系统中,寻找猪肺泡上皮细胞cDNA文库中与omp相互作用的蛋白质,为筛选胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白与肺泡上皮细胞相互作用的蛋白奠定了重要基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白诱饵质粒自激活作用毒性作用

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牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 747-750,754页

作者：马文戈于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

从采集于黑龙江、天津的病牛肺组织中分离到2株病原菌,经菌落形态学观察、培养特性、生化反应和小鼠毒力试验,初步鉴定为多杀性巴氏杆菌,分别命名为Pm-HLJ和Pm-TJ。参考多杀性巴氏杆菌种特异性基因kmt1和荚膜血清型特异性基因hyaD-hyaC... 详细信息

从采集于黑龙江、天津的病牛肺组织中分离到2株病原菌,经菌落形态学观察、培养特性、生化反应和小鼠毒力试验,初步鉴定为多杀性巴氏杆菌,分别命名为Pm-HLJ和Pm-TJ。参考多杀性巴氏杆菌种特异性基因kmt1和荚膜血清型特异性基因hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ和fcbD,合成引物,通过多重PCR扩增2株菌的种特异性基因和荚膜血清型特异性基因。选取Pm-HLJ的目标PCR产物进行克隆、序列测定、Blast搜索同源序列并且比较分析。结果显示,Pm-HLJ的kmt1基因片段全长460bp,与GenBank中各血清型kmt1基因同源性均在96.6%以上;荚膜血清型A菌株特异性基因同源性为99.9%;而与其他荚膜血清型B、D、E、F的型特异性基因的同源性均低于50%。由此确认,分离的2株多杀性巴氏杆菌均为荚膜血清A型,这是我国A型多杀性巴氏杆菌引发牛出血性败血症的首例报道。

关键词：多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型分离鉴定

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马传染性贫血病毒LTR在驴胎皮肤细胞中的基因进化及启动子活性比较

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中国预防兽医学报 2008年第7期30卷 510-514页

作者：全滟平沈楠郭巍赵立平周建华沈荣显相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

将EIAV驴白细胞弱毒疫苗株在驴胎皮肤细胞中连续传代,分别提取第13代、18代、21代、23代、26代病毒培养物的前病毒DNA,以LTR特异性引物PCR扩增前病毒LTR,并进行克隆及测序分析。与本实验室已测定的驴白细胞毒株LTR的序列比较发现,驴胎... 详细信息

将EIAV驴白细胞弱毒疫苗株在驴胎皮肤细胞中连续传代,分别提取第13代、18代、21代、23代、26代病毒培养物的前病毒DNA,以LTR特异性引物PCR扩增前病毒LTR,并进行克隆及测序分析。与本实验室已测定的驴白细胞毒株LTR的序列比较发现,驴胎皮肤细胞毒株LTR的U3负调节区出现大段的插入、点突变、缺失,U3增强子区变异较小。将LTR片段插入到pCAT-basic载体CAT报告基因前,转染驴胎皮肤细胞,通过检测CAT表达量来评价LTR的启动子活性。驴胎皮肤细胞毒株LTR的启动子活性随着病毒传代次数的增加而逐渐增强,而驴白细胞弱毒株LTR的启动子活性很低。

关键词：马传染性贫血病毒 LTR 基因进化启动子活性

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犊牛腹泻粪样中牛呼肠孤病毒的分离鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第9期30卷 711-715页

作者：常继涛李鑫张亚科于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

通过在培养液中添加胰蛋白酶的方法,用MA104细胞从犊牛腹泻粪样中分离并鉴定了1株能稳定产生细胞病变(CPE)的牛呼肠孤病毒,命名为B-19株。RNA聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳可见呼肠孤病毒典型的10条核酸节段,呈3∶3∶4排列。电镜检测结果显... 详细信息

通过在培养液中添加胰蛋白酶的方法,用MA104细胞从犊牛腹泻粪样中分离并鉴定了1株能稳定产生细胞病变(CPE)的牛呼肠孤病毒,命名为B-19株。RNA聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳可见呼肠孤病毒典型的10条核酸节段,呈3∶3∶4排列。电镜检测结果显示,病毒粒子呈典型呼肠孤病毒粒子形态,直径约70nm;病毒L1基因保守区段RT-PCR检测及序列分析表明,扩增出的440bp目的片段符合预期大小,而且其核苷酸序列与GenBank参考毒株L1基因序列具有较高同源性;S1基因序列分析表明,B-19株属于呼肠孤病毒血清1型(ST1)。

关键词：牛呼肠孤病毒分离鉴定

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Asia1型口蹄疫病毒感染性克隆的建立

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 915-919页

作者：王海伟涂亚斌周国辉杨德成张亚科于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建Asia1型口蹄疫病毒Asia1/YS/CHA/05株的感染性克隆,根据该毒株的全基因组序列,将其分为6段进行RT-PCR扩增,并拼接克隆至pBluescript II SK(+)载体中,构建了全长基因组的cDNA克隆pAsi。用NotⅠ将质粒线性化后体外转录并转染BHK-21... 详细信息

为构建Asia1型口蹄疫病毒Asia1/YS/CHA/05株的感染性克隆,根据该毒株的全基因组序列,将其分为6段进行RT-PCR扩增,并拼接克隆至pBluescript II SK(+)载体中,构建了全长基因组的cDNA克隆pAsi。用NotⅠ将质粒线性化后体外转录并转染BHK-21细胞,转染细胞中出现明显的细胞病变。RT-PCR结合序列分析表明,拯救病毒中作为人工设计的分子标记PstⅠ酶切位点被消除,因此,排除了亲本病毒污染的可能。该感染性克隆的构建,为深入探讨Asia1型口蹄疫病毒的致病机理以及新型疫苗的研制奠定了基础。

关键词： Asial型口蹄疫病毒全长cDNA 体外转录和转染病毒拯救

来源：评论

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