检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第3期30卷 200-205页

作者：李娇薛飞朱远茂祖立闯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)BA株接种MDBK细胞,提取病毒RNA。参照已发表的BVDV基因组序列,利用Oligo 6生物学软件设计扩增E2基因的1对引物,引入酶切位点并去掉E2蛋白的跨膜区及疏水区。通过RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E2基因片段,克隆到... 详细信息

利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)BA株接种MDBK细胞,提取病毒RNA。参照已发表的BVDV基因组序列,利用Oligo 6生物学软件设计扩增E2基因的1对引物,引入酶切位点并去掉E2蛋白的跨膜区及疏水区。通过RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E2基因片段,克隆到pMD18-T载体上,酶切并测序鉴定。然后将目的片段进一步定向克隆到pET30a表达载体,转化BL21表达菌。取转化菌培养,并用IPTG诱导,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,用免疫印迹与间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的免疫原性,为牛病毒性腹泻病毒诊断试剂的研制奠定了基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白截短表达鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

丝状支原体丝状亚种SC型LppC基因的表达纯化

引用

中国预防兽医学报 2008年第2期30卷 90-93页

作者：李媛乔祖健王亮张建华辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

丝状支原体丝状亚种SC型是A类烈性传染病牛传染性胸膜肺炎的病原体。脂蛋白LppC是重要的免疫优势抗原,LppC基因是MmmSC的特异性基因。本研究通过PCR方法,扩增MmmSC标准株PG1的LppCN末端基因。将该序列克隆到pMDT-18载体上并测序,用pET32... 详细信息

丝状支原体丝状亚种SC型是A类烈性传染病牛传染性胸膜肺炎的病原体。脂蛋白LppC是重要的免疫优势抗原,LppC基因是MmmSC的特异性基因。本研究通过PCR方法,扩增MmmSC标准株PG1的LppCN末端基因。将该序列克隆到pMDT-18载体上并测序,用pET32a为载体构建重组质粒进行诱导表达。LppCN末端基因长度为644bp,将其与NCBI上发布的Afade株、欧洲群代表株L2比较,它的核酸序列同源性为100%,表明LppC基因在种内高度保守。原核表达结果得到大小为45ku的目的蛋白,用Ni-NTA系统进行纯化得到高纯度的蛋白,Westernblot结果表明,重组蛋白能与牛传染性胸膜肺炎阳性血清反应,具有免疫学活性,为进一步与LppQ融合表达奠定基础。

关键词：牛传染性胸膜肺炎(CBPP) 丝状支原体丝状亚种SC(MmmSC) LppC

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因的筛选

引用

中国兽医科学 2008年第10期38卷 847-850页

作者：刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赵海玲赫明雷中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌（APP）体内表达的基因进行了初步筛选。将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合．分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21（DE3）的全菌及全菌裂解物进行吸附。用ELISA方法检测吸附效果，经吸附后... 详细信息

利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌（APP）体内表达的基因进行了初步筛选。将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合．分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21（DE3）的全菌及全菌裂解物进行吸附。用ELISA方法检测吸附效果，经吸附后血清D150nm分别由原来的0．927和0．239降低为0．196和0．078。同时,将APP1基因组DNA以Bsp143I进行酶切，回收500～2000bp的片段，与pET30a／b／c载体连接，构建了APP1基因组质粒表达文库，库容量（CFU）为2．0×10^5。用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交筛选该基因组表达文库，从3000个菌落中获得了12个阳性克隆。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原技术菌落原位免疫杂交

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鹅和番鸭细小病毒全基因克隆与序列分析

引用

中国预防兽医学报 2008年第6期30卷 415-419页

作者：张云耿宏伟郭东春胡奇林相文华刘明杨涛林巍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别... 详细信息

本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.9%～82.9%和89.5%～91.2%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为93.7%～99.8%和96.8%～99.7%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.8%～99.8%和98.6%～99.5%;在核苷酸和氨基酸水平上,鹅和番鸭细小病毒VP1之间的同源性分别为79.7%～88.7%和85.5%～93.3%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为88.8%～99.6%和91.5%～99.2%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.1%～99.6%和97.1%～98.8%;番鸭和鹅细小病毒NS和vp1基因的系统进化树分析表明:番鸭和鹅呼细小病毒来自共同的祖先,但随着宿主的不同而演化为不同的分支。

关键词：鹅细小病毒番鸭细小病毒 NS基因 vp1基因序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪肺炎支原体中国分离株热休克蛋白Hsp70(Dnak)的全基因克隆及C末端基因的表达与免疫活性分析

引用

中国预防兽医学报 2008年第3期30卷 169-173页

作者：李媛张建华王亮乔祖建辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MHP)是猪气喘病的病原。DnaK又称为热休克蛋白Hsp70,具有分子伴侣和免疫的作用。以MHP中国分离株Yin-1为模板,扩增了DnaK基因的全序列,将该序列克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果Yin-1株DnaK... 详细信息

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MHP)是猪气喘病的病原。DnaK又称为热休克蛋白Hsp70,具有分子伴侣和免疫的作用。以MHP中国分离株Yin-1为模板,扩增了DnaK基因的全序列,将该序列克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果Yin-1株DnaK基因即Hsp70基因全长1 803 bp,编码600 aa,第631～633位TGA在支原体编码色氨酸而不是作为终止密码子。将该序列与多种致病支原体DnaK基因进行分析比较,发现Yin-1株与232株、J株、7 448株等MHP菌株的DNA同源性为99.3%～99.4%,氨基酸同源性为99.2%～99.3%,而与非同种支原体的DNA和氨基酸同源性仅为64.5%～74.4%和59.3%～77%。这表明DnaK基因在种内高度保守,种间差异较大。以pET28a为载体构建重组质粒,原核表达DnaK C末端大小为1 kb左右的基因,对表达的蛋白进行纯化后,通过Western blot检测它的免疫活性。原核表达得到大小为41 ku的目的蛋白,经Western blot证实,纯化蛋白可与MHP阳性猪血清反应,具有免疫活性。

关键词：猪肺炎支原体猪喘气病伴侣蛋白DnaK 热休克蛋白70

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库的构建及对小鼠的免疫保护作用研究

引用

中国预防兽医学报 2008年第2期30卷 153-156页

作者：刘慧芳周媛媛刘思国宫强王勇刘建东王春来常月红迟磊赵昆云孟克中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究应用限制性内切酶MboⅠ消化胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组DNA,回收500bp～3000bp的片段,插入到真核表达载体pCDNA3.1(+)的BamHⅠ酶切位点构建重组质粒,电转化大肠杆菌TG1,获得胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库(大约含有106个... 详细信息

本研究应用限制性内切酶MboⅠ消化胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组DNA,回收500bp～3000bp的片段,插入到真核表达载体pCDNA3.1(+)的BamHⅠ酶切位点构建重组质粒,电转化大肠杆菌TG1,获得胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库(大约含有106个克隆)。将该文库随机分为10个亚文库(10个Clone pool),分别提取每个亚文库的重组质粒免疫小鼠(n=130只),免疫剂量为100μg,免疫3次后以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,通过相对保护率、肺组织荷菌数、病理组织学3个指标测定其对小鼠的免疫保护作用。试验结果表明,Clone pool3、Clone pool2、Clone pool6和Clone pool7的免疫效果明显优于其他免疫组,尤其是Clone pool3的免疫保护效果最佳。本研究成功构建了7型胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库,从而为筛选和获得新的保护性抗原基因奠定基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库构建保护作用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及其生物*学特性鉴定

引用

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2008年第11期36卷 35-39,46页

作者：赵磊魏建忠周国辉于永忠李万于力安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

【目的】针对O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus,FMDV)制备特异性的单克隆抗体,为进一步研制O型口蹄疫诊断方法提供物质基础。【方法】用纯化的O型口蹄疫病毒免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,结合间接ELIS... 详细信息

【目的】针对O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus,FMDV)制备特异性的单克隆抗体,为进一步研制O型口蹄疫诊断方法提供物质基础。【方法】用纯化的O型口蹄疫病毒免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,结合间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)筛选,有限稀释法克隆,建立稳定的阳性杂交瘤细胞株,并对制备的单克隆抗体进行生物学特性鉴定。【结果】获得了2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2B9和5F7,抗体亚类鉴定其均为IgG1/κ类型;IFA结果显示,2株单克隆抗体仅与O型FMDV反应,不与Asia1型FMDV反应,推测其均为抗O型FMDV的型特异性单克隆抗体;Western blot结果显示,2株单克隆抗体均无特异性条带出现,表明其所针对的抗原表位均为构象型表位;相加ELISA试验表明,2B9与5F7两株单克隆抗体识别的抗原表位相近或相同;经硫氰酸盐洗脱法测定,2B9和5F7的相对亲和力指数均为1.5 mol/L;中和试验显示,2株单克隆抗体都不具有中和活性。【结论】2株单克隆抗体的获得及其生物学性质的鉴定,为O型口蹄疫诊断方法的建立提供了基础材料。

关键词： O型口蹄疫病毒单克隆抗体生物学特性鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新疆地区一株马流感病毒的分离及鉴定

引用

中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 584-586,591页

作者：郭巍闫妍王英原刘霓虹戴伶俐李雪峰赵立平张春生贺磊周建华相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830001

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马... 详细信息

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马流行性感冒病毒北美洲流行株的同源性较高,命名为A/equine/XinjiangFuyun/3/2007(H3N8)。

关键词：马流行性感冒流感病毒 H3N8

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组鸡β-防御素10蛋白的原核表达及其抗菌活性的测定

引用

中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 765-769,789页

作者：廖文艳马得莹韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAG... 详细信息

鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳与灰度扫描显示该重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.3%。表达的AvBD10融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约为31ku。重组蛋白经纯化后,以对数生长中期的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌和猪霍乱沙门氏菌为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组鸡AvBD10蛋白的抗菌活性。结果显示,重组鸡AvBD10蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性。此外,重组鸡AvBD10蛋白在-70℃～100℃及在pH4～pH10条件下仍具有抗菌活性。

关键词：鸡AvBD10 融合蛋白抗菌活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

黄芪多糖对肉仔鸡免疫功能的影响

引用

中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 978-980页

作者：司昌德闵亚宏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

本实验研究了饲料中添加0.1%或0.3%黄芪多糖(APS)对肉仔鸡生产性能和免疫功能的作用。结果表明,饲料中添加APS对肉仔鸡增重无显著作用;但能够显著提高肉仔鸡C3,C4和IgM含量。另外,黄芪多糖能够显著提高接种新城疫(ND)疫苗后的肉仔鸡血清... 详细信息

本实验研究了饲料中添加0.1%或0.3%黄芪多糖(APS)对肉仔鸡生产性能和免疫功能的作用。结果表明,饲料中添加APS对肉仔鸡增重无显著作用;但能够显著提高肉仔鸡C3,C4和IgM含量。另外,黄芪多糖能够显著提高接种新城疫(ND)疫苗后的肉仔鸡血清抗ND抗体水平与血清淋巴细胞转化率。本研究结果表明,黄芪多糖具有增强肉仔鸡免疫功能的作用。

关键词：黄芪多糖肉仔鸡生产性能免疫功能

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：