检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2008年第4期39卷 466-471页

作者：宫强刘思国王春来王勇刘建东刘慧芳施远祥阿曼古丽李发斌孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 新疆动物防疫监督总站乌鲁木齐830063 黑龙江省结核病防治所哈尔滨150500

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)... 详细信息

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)DNA疫苗和三价(pcDNA-Ag85B+pcDNA-MPB64+pcDNA-ESAT-6)DNA疫苗,评价各种DNA疫苗诱导的体液免疫、细胞免疫及以BCG攻毒后的免疫保护水平。试验结果表明,多基因融合DNA疫苗免疫后的小鼠血清抗体水平、淋巴细胞增殖(SI值)、gamma interferon(IFN-γ)和interleukin-2(IL-2)水平明显高于其他各组(P<0.05),攻毒保护效果也优于多价DNA疫苗,达到了BCG疫苗的免疫保护水平,表明本研究制备的融合DNA疫苗具有良好的应用前景。

关键词：牛分枝杆菌融合DNA疫苗多价DNA疫苗

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PCV2 PPV PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2008年第8期38卷 691-696页

作者：岳丰雄崔尚金冉多良张超范中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段。通过对反应因素进行优化,建立... 详细信息

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段。通过对反应因素进行优化,建立了检测PCV2、PPV、PRV、PRRSV的多重PCR(mPCR)诊断方法。敏感性和特异性结果显示,该mPCR对4种病毒的最低核酸检测量分别为29.0 pg(PCV2)、17.3 pg(PPV)、36.8 pg(PRRSV)、38.4 pg(PRV),而对猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒1型、牛病毒性腹泻黏膜病病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。119份临床样品的多重PCR检测结果显示,有3份样品同时感染PPV和PCV2,68份样品同时感染PRRSV和PCV2,其余样品均为PCV2阳性。表明,建立的多重PCR方法能够对PCV2、PPV、PRV、PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

关键词：猪圆环病毒2型猪细小病毒猪伪狂犬病病毒猪生殖与呼吸综合征病毒多重PCR

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猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 944-948,991页

作者：韦天超田志军安同庆周艳君肖燕姜一峰郝晓芳张善瑞彭金美仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线... 详细信息

本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,比常规RT-PCR更敏感,可分别检测?

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR 病毒含量

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我国部分地区牛轮状病毒的病原学调查及一株G10P型牛轮状病毒的分离鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 755-759页

作者：常继涛崔久辉李建军郭德瑞王治才于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 海拉尔农垦集团有限责任公司内蒙古海拉尔021000 新疆畜牧科学院兽医研究所新疆乌鲁木齐830000

应用轮状病毒RNA电泳方法,对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测。在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为12%(11/90)。阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆2份和内蒙古5份样... 详细信息

应用轮状病毒RNA电泳方法,对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测。在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为12%(11/90)。阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆2份和内蒙古5份样品属于G10型,新疆另一牛场的4份样品属于G6型。对所有阳性样品进行病毒分离,获得1株能在MA104细胞上稳定传代的病毒株,经鉴定该分离株属于G10P[11]型轮状病毒,命名为HM26。G10型牛轮状病毒的分离在国内尚属首次。

关键词：牛轮状病毒检测分离鉴定

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CFSE检测马传染性贫血病毒疫苗免疫马T细胞增殖方法的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第11期24卷 1044-1047页

作者：林跃智邓喜林沈楠吕晓玲赵立平孔宪刚邵一鸣周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学病毒免疫室黑龙江哈尔滨150030 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心病毒免疫室北京100050

目的:以流式细胞术(FCM)检测马传染性贫血病毒(EIAV)抗原特异性的T淋巴细胞增殖。方法:将新鲜分离的马外周血单个核细胞(PBMC)进行CFSE染色,经纯化病毒体外刺激并培养5d后,进行T淋巴细胞亚型标记,检测特异性增殖的CD4+和CD8+细胞比例。... 详细信息

目的:以流式细胞术(FCM)检测马传染性贫血病毒(EIAV)抗原特异性的T淋巴细胞增殖。方法:将新鲜分离的马外周血单个核细胞(PBMC)进行CFSE染色,经纯化病毒体外刺激并培养5d后,进行T淋巴细胞亚型标记,检测特异性增殖的CD4+和CD8+细胞比例。结果:对马PBMC的染色浓度、特异性刺激物的种类及反应时间等条件进行了优化。可对马外周血抗原特异性T淋巴细胞不同亚型的增殖水平进行定量评价。结论:FCM检测方法为研究马传染性贫血病毒疫苗免疫保护机制提供了一个有效的手段;该法也可以为其他病毒的免疫学研究提供借鉴。

关键词： T细胞增殖 CFSE 马传染性贫血病毒

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传染性喉气管炎病毒WG株Us区基因结构分析

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 779-784页

作者：韩文雄石星明王云峰兰德松胡文玮王玫曹贵方童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

根据GenBank中的传染性喉气管炎病毒(ILTV)全序列(NCBI登录号:NC-006623),利用Oligo6.2分析序列并设计6对引物,以ILTVWG株基因组DNA为模板,PCR扩增了长度为13.1kb的区域,得到了完整的WG株的Us区序列,初步鉴定了WG株的Us区基因结构。将W... 详细信息

根据GenBank中的传染性喉气管炎病毒(ILTV)全序列(NCBI登录号:NC-006623),利用Oligo6.2分析序列并设计6对引物,以ILTVWG株基因组DNA为模板,PCR扩增了长度为13.1kb的区域,得到了完整的WG株的Us区序列,初步鉴定了WG株的Us区基因结构。将WG株的Us区序列分别与ILTVUSDA株、BHV-1、CeHV-1、EHV-1、HSV-1、HSV-2、MDV、PrV、HVT、VZV相比较,ILTVWG株与USDA株同源性为99.2%,而与其他疱疹病毒之间的同源性较低,而且Us区大小也不一致;与已发表的ILTVUSDA株Us区基因序列分别比较后发现,两者之间差异较大的基因分别为gJ基因和gD基因。其中,gJ基因在第1983个碱基处比USDA株多出30bp,DNAStar预测这30bp可能形成一个独立的抗原表位;gD基因的长度在不同的ILTV毒株之间差别较大,与其他疱疹病毒具有相似的结构特征。

关键词：传染性喉气管炎病毒 WG株 Us区基因序列分析

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国内首次从患肺炎的犊牛肺脏中分离到牛支原体

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中国预防兽医学报 2008年第9期30卷 661-664页

作者：辛九庆李媛郭丹宋念华胡守萍陈超裴洁曹培丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 湖北省动物疫病预防控制中心湖北武汉430064

牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起犊牛肺炎、关节炎和成牛乳房炎的主要病原之一。本研究利用选择性培养基从2份患肺炎的犊牛肺脏病料中得到2株支原体,分别命名为Hubei-1和Hubei-2,并在固体培养基进行了3次克隆纯化。通过生化实验、特异... 详细信息

牛支原体(Mycoplasma bovis)是引起犊牛肺炎、关节炎和成牛乳房炎的主要病原之一。本研究利用选择性培养基从2份患肺炎的犊牛肺脏病料中得到2株支原体,分别命名为Hubei-1和Hubei-2,并在固体培养基进行了3次克隆纯化。通过生化实验、特异性PCR鉴定和序列比较证明为牛支原体。其16SrRNA核酸序列与牛支原体国际标准株PG45同源性为99.3%。以该培养物作为包被抗原的ELISA检测方法对13份发病犊牛血清进行了检测,其中11份血清抗体OD值为阴性血清对照值的2倍以上。该结果首次证实,国内部分地区存在牛支原体的流行。

关键词：牛支原体分离鉴定

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实时荧光定量RT-PCR检测ICP4、IFN-γ和IL-18基因在ILTV感染鸡三叉神经节中的表达

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中国兽医学报 2008年第10期28卷 1150-1153,1166页

作者：木古丽王云峰石星明童光志何来王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

将20只4月龄SPF鸡人工感染传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株,于感染后39d翅静脉和肌肉注射地塞米松(DEX),感染后5、9、10、11、12、39d及DEX处理后1、2、3、5、6、7、8d采喉拭子,检测病毒DNA,并于感染前和感染后6、10、20、31d及DEX处理后2... 详细信息

将20只4月龄SPF鸡人工感染传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株,于感染后39d翅静脉和肌肉注射地塞米松(DEX),感染后5、9、10、11、12、39d及DEX处理后1、2、3、5、6、7、8d采喉拭子,检测病毒DNA,并于感染前和感染后6、10、20、31d及DEX处理后2、4、7、10、30d每组各取1只鸡颈静脉放血致死后无菌采集三叉神经节,提总RNA后利用real-timeRT-PCR的方法定量检测ICP4、IFN-γ和IL-18特异性mRNA。结果表明,在人工感染后处于潜伏状态的病毒能再被激活,并且ICP4基因在病毒还未被激活时就能低水平表达,这种低水平的立即早期(IE)基因的表达能提供持续的抗原刺激来维持神经节中的炎性细胞分泌IFN-γ和IL-18,以至于维持病毒处于潜伏状态而不致激活后感染其他的健康宿主;DEX处理后2d,IFN-γ的表达达到峰值,对病毒的再激活起抑制作用,尽管DEX处理前后IL-18的表达量没有明显变化,推测当潜伏的病毒一旦被激活时,IFN-γ可协同IL-18起到抑制IL-TV的作用。

关键词：传染性喉气管炎病毒地塞米松(DEX) 基因表达定量分析实时荧光定量RT—PCR 鸡

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马传染性贫血病毒囊膜基因gp90V3区糖化回复突变感染性克隆的构建

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畜牧兽医学报 2008年第12期39卷 1731-1736页

作者：韩秀娥张萍王雪峰孔宪刚相文华周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物室哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江省乳品工业技术开发中心哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院哈尔滨150001

为阐明我国马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)弱毒疫苗致弱及免疫保护的分子机制,作者分析了疫苗株及其亲本强毒株共34个囊膜基因序列。结果发现疫苗株在膜基因gp90 V3区的潜在N-连接糖基化位点出现稳定的碱基替换... 详细信息

为阐明我国马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)弱毒疫苗致弱及免疫保护的分子机制,作者分析了疫苗株及其亲本强毒株共34个囊膜基因序列。结果发现疫苗株在膜基因gp90 V3区的潜在N-连接糖基化位点出现稳定的碱基替换,使该位点消失。为研究囊膜糖基化的作用,以疫苗株全长感染性克隆pLG-FD3-8为亲本,利用反向遗传技术对该突变位点进行糖基化序列回复操作,构建全基因感染性克隆pLGFDg5。将pLGFDg5转染驴胎皮肤细胞(FDD),通过逆转录酶活性和RT-PCR方法评价其感染性。结果表明,将pLGFDg5在FDD细胞中盲传3代后,可在细胞培养上清中检测到逆转录酶活性,用RT-PCR检测到EIAV保守基因片段,在电镜下可见典型的EIAV粒子。在FDD细胞上的病毒复制动力学分析显示,与其亲本克隆pLGFD3-8的衍生病毒pLGFD3-V相比,回复突变克隆衍生的pLGFDg5-V复制速度较慢,获得较低的病毒载量。体外抗体中和试验表明,与其亲本pLGFD3-V相比,引入潜在的糖基化位点g5降低了衍生病毒对中和抗体的敏感性。这一结果为N-连接糖基化在我国马传贫弱毒疫苗致弱机理的作用研究提供了重要依据。

关键词：马传染性贫血病毒 N-连接糖基化定点突变感染性克隆

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禽分枝杆菌副结核亚种map0862基因与map2154c基因的串联重组表达

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中国兽医科学 2008年第10期38卷 856-859页

作者：迟磊刘思国王春来宫强赵昆刘建东王勇云孟克刘慧芳赵福广中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118

以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重... 详细信息

以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明,表达的重组蛋白map0862-2154c的分子质量为76 ku,可用于建立诊断副结核病的ELISA。

关键词：禽分枝杆菌副结核亚种 map0862基因 map2154c基因重叠延伸剪接技术重组表达

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