马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒株EIAVDLV是EIAV驴强毒株EIAVDV在驴白细胞传120余代减毒而成。为阐明EIAV疫苗的致弱机理，本研究选取减毒过程中兼有强毒株和弱毒株生物学特性的中间代次毒株EIAVDLV61(体外61代毒株)，采用LA-PCR(Long accurate PCR)技术扩增几乎全长的前病毒基因组，获得了7941bp的片段。经T-A克隆和核苷酸序列测定，共得到16个EIAVDLV61的几乎全长的基因组克隆。测序结果显示，EIAVDLV61序列平均长为8234bp，16个克隆的核苷酸同源率为98.1±0.4％，与已发表的我国EIAV强毒辽宁株DIAVLV和疫苗株EIAVDLV的核苷酸同源率分别为98.0％和97.9％。本研究比较和分析了EIAVDLV61与EIAV强毒株和疫苗株基因组差异，为进一步探讨马传贫疫苗的致弱机理及免疫保护机制提供了有益的参考数据。
利用分子克隆和Splicing by overlapping extension(SOE)技术,表达了重组蛋白rM70-83-E6,Western blot分析rM70-83-E6具有很好的特异性。以蛋白rM70-83-E6作为诊断抗原建立了间接ELISA方法,ELISA诊断方法的判定标准,即S/P≥0.5为阳性,S/...
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利用分子克隆和Splicing by overlapping extension(SOE)技术,表达了重组蛋白rM70-83-E6,Western blot分析rM70-83-E6具有很好的特异性。以蛋白rM70-83-E6作为诊断抗原建立了间接ELISA方法,ELISA诊断方法的判定标准,即S/P≥0.5为阳性,S/P<0.4为阴性,0.5>S/P≥0.4为可疑。ELISA方法的特异性为96.0%、敏感性为69.4%。对67份PPD皮试阳性和50份PPD皮试阴性(117份)血清样品进行了检测,并与PPD皮试比较。67份PPD皮试阳性血清样品中有46份为ELISA检测阳性,阳性符合率为68.7%,50份PPD皮试阴性牛血清都为阴性,阴性符合率为100%,本ELISA方法与PPD皮试诊断方法总复合率为82.1%。研究表明,ELISA方法具有很好的开发和应用前景。
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