检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2007年第6期29卷 427-431页

作者：高玉龙高宏雷王晓艳李俊山邓小芸刘伟王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株vp2基因克隆到载体pFastBac HTA中,构建重组转座载体pFVP2,然后将其转化DH10Bac感受态大肠杆菌,将vp2基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidVP2;通过脂质体转染将其转染Sf9昆虫细胞,获得... 详细信息

将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株vp2基因克隆到载体pFastBac HTA中,构建重组转座载体pFVP2,然后将其转化DH10Bac感受态大肠杆菌,将vp2基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidVP2;通过脂质体转染将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacVP2。用Western blot和间接免疫荧光试验分析表明IBDV VP2蛋白在Sf9昆虫细胞获得正确表达,所表达的重组VP2蛋白分子量约50 Ku。以rBacVP2感染Sf9细胞裂解物免疫3周龄SPF鸡,在免疫后7 d可检测到ELISA抗体;免疫后14 d可检测到琼脂免疫扩散抗体。攻毒试验表明,初次免疫后14 d对IBDV超强毒株的攻击保护率为75%,2次免疫后14 d对其的攻击保护率为100%。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 vp2基因杆状病毒免疫原性

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鸡传染性喉气管炎病毒WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达

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中国预防兽医学报 2007年第6期29卷 417-422页

作者：木古丽王云峰侯绍华石星明王玫冉多良童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

根据传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)SA-2株ICP4基因序列设计并合成3对引物,以ILTV中国王岗株(WG)DNA为模板扩增ICP4基因,并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列,分别与ILTV S... 详细信息

根据传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)SA-2株ICP4基因序列设计并合成3对引物,以ILTV中国王岗株(WG)DNA为模板扩增ICP4基因,并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列,分别与ILTV SA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现,ILTV毒株之间ICP4基因相对保守,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99.7%和99.1%,但与其它α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低,低于3.0%。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示,在人工感染ILTV WG株后第10 d～60 d内均能检测到ICP4特异RNA,而gB、gC、TK则未能检出。鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究,ILTV WG株ICP4基因的克隆和序列测定,以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达,为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础。

关键词：传染性喉气管炎病毒 WG株 ICP4基因序列分析潜伏感染

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猪戊型肝炎诊断方法的研究进展

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中国预防兽医学报 2007年第12期29卷 981-984页

作者：曲娟娟于婧王滨于敏赵立平相文华李柱刚黑龙江省农业科学院生物技术研究所黑龙江省生物与家畜分子育种重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室青岛市动物卫生监督所山东青岛266071

戊型肝炎（Hepatitis E，HE）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis Evirus，HEV）感染引起的一种急性、自限性疾病，病毒经粪．口途径传播，其暴发和流行主要分布在发展中国家，常因饮用水被污染而引起，散发病例呈全球分布。1997年，发现了动... 详细信息

戊型肝炎（Hepatitis E，HE）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis Evirus，HEV）感染引起的一种急性、自限性疾病，病毒经粪．口途径传播，其暴发和流行主要分布在发展中国家，常因饮用水被污染而引起，散发病例呈全球分布。1997年，发现了动物源性的戊型肝炎病毒，随后，各发达国家及印度等国陆续都有猪HEV的相关报道，确定戊型肝炎为一种人畜共患病，并成为各国密切关注的公共卫生问题。最新研究结果表明人的戊型肝炎病毒的感染主要来源于猪。猪常常作为人类食物的重要来源和器官移植的供体，因此存在着普通人群、器官移植者及其家人、医务人员感染戊肝的风险。伏丽萍等对全国22个省、市、地区的血清学检测研究表明，几乎所有被检地区都或多或少存在猪戊型肝炎病毒（SHEV）的污染。

关键词：戊型肝炎病毒诊断方法猪公共卫生问题器官移植发展中国家人畜共患病血清学检测

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牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat6融合基因的分子克隆及表达

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中国预防兽医学报 2007年第8期29卷 588-590页

作者：迟磊刘思国王春来宫强赵昆王勇刘建东云孟克赵福广中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学生物技术学院吉林长春130118

以牛分枝杆菌valleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和esat6串联到同一原核表达载体pET32a(+)中获得重组质粒pET64-85... 详细信息

以牛分枝杆菌valleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和esat6串联到同一原核表达载体pET32a(+)中获得重组质粒pET64-85b-e6。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)进行诱导,SDS-PAGE电泳分析表达情况,以Ni^(21)亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western blot分析融合蛋白的免疫活性。结果表明:表达的融合蛋白大约为76 Ku,与预测大小相符,以Ni^(21)亲和层析柱纯化的融合蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应。

关键词：牛分枝杆菌融合基因重组表达

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猪戊型肝炎病毒大庆株DQ1全基因序列分析

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 507-510页

作者：于敏曲娟娟郭巍赵立平相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

本试验采用RT-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF... 详细信息

本试验采用RT-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF1区与IV型HEV核苷酸的同源性为82.6%～83.6%,氨基酸同源性为93.5%。ORF2区与IV型HEV核苷酸的同源性为87.0%～88.4%,氨基酸同源性为95.8%～97.4%。ORF3区与IV型HEV核苷酸的同源性为94.4%～96.5%,氨基酸同源性为90.3%～96.5%。其结果表明DQ1HEV株为IV型HEV。

关键词：猪戊型肝炎病毒克隆序列分析

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PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

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中国兽医科学 2006年第11期36卷 880-884页

作者：谭斌刘长明危艳武张超范刘永刚冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比... 详细信息

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒免疫过氧化物酶单层细胞试验

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鹅细小病毒vp基因片段的原核表达及抗血清的制备

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中国病毒学 2006年第6期21卷 581-584页

作者：卲昱昊王静王懂帅韩宗玺刘胜旺冉多良孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 甘肃省商业科技研究院甘肃兰州730020 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-... 详细信息

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-30a,阳性重组质粒经确证性序列测定,证明外源片断插入到pET-30a的预期位置。将其转入大肠杆菌BL21,经终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE表明外源基因获得表达,融合蛋白分子量约为34kDa。将诱导后的工程菌用6mol/L盐酸胍裂解,经超声处理后离心,利用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。用纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗该融合蛋白的抗血清。Westernblotting结果表明制备的兔抗血清与该融合蛋白及亲本病毒的结构蛋白都具有反应性。结合前期工作进展对GPVVP蛋白的B细胞线性抗原表位进行定位。

关键词：鹅细小病毒 vp基因片断原核表达抗血清

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鸵鸟新城疫病毒分子流行病学研究

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 705-711页

作者：尹燕博龚振华司微蒋金书崔尚金高齐瑜山东省莱阳农学院动物科技学院山东青岛266109 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业大学动物医学院北京100094

应用RT-PCR、基因序列测定和分析以及鸡胚平均死亡时间(MDT)等方法,对1997～2000年间从中国北方分离的10株鸵鸟源新城疫病毒进行了F-糖蛋白基因序列测定、系统进化分析、基因分型和毒力测定。结果显示：10株鸵鸟源新城疫病毒分属Ⅱ、Ⅲ... 详细信息

应用RT-PCR、基因序列测定和分析以及鸡胚平均死亡时间(MDT)等方法,对1997～2000年间从中国北方分离的10株鸵鸟源新城疫病毒进行了F-糖蛋白基因序列测定、系统进化分析、基因分型和毒力测定。结果显示：10株鸵鸟源新城疫病毒分属Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ四个基因型。除1株为中发型毒株,其他均为速发型毒株；分析表明,引起鸵鸟发病的新城疫毒株有多种不同的来源。

关键词：鸵鸟 NDV 毒力测定基因序列基因型

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牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东赵昆迟磊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-esat-6(简称为pCE6)和pCDNA-mpb70-mpb83-esat-6(简称为pC70-83-E6).体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光检测目的基因的表达情况.然后进行动物免疫,实验动物分四组即:pCE6组、pC70-83-E6组、pCDNA3.1(+)组和PBS组,每组10只BALB/c小鼠,pCE6组、pC70-83-E6组和pCDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量(胫前肌)免疫,PBS组每只小鼠胫前肌免疫100μl 1 ×PBS,各组均进行了三次免疫,每次间隔两周.间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况.结果表明,两种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,而pCDNA3.1(+)组和PBS组的血清抗体始终维持在较低水平,且pC70-83-E6组抗体水平高于pCE6.经PPD(5 μg/ml)刺激后,pCE6组和pC70-83-E6组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P＜0.05),而两重组质粒免疫组差异不显著(P＞0.05);PPD刺激后两重组质粒免疫的小鼠脾细胞产生的IFN～γ均显著高于两对照组产生的IFN～γ(P＜0.05),且pC70-83-E6组明显高于其他三组(P＜0.05),pCE6组只分泌很低的IFN～γ,而两对照组则未检测到IFN～γ的产生.本试验成功构建了牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83-esat-6融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制提供了理论依据.

关键词：牛分枝杆菌 esat-6基因 mpb70基因 mpb83基因 DNA疫苗免疫应答

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番鸭呼肠孤病毒σB编码基因克隆、表达与间接ELISA诊断方法的建立

番鸭呼肠孤病毒σB编码基因克隆、表达与间接ELISA诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会

作者：郭东春张云耿宏伟胡奇林郝雪欧阳岁东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科技学院黑龙江哈尔滨150030 福建省农业科学院动物病毒研究室福建福州350003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

本文对DRV S12 σB编码基因进行克隆,测序和原核表达,序列分析表明S12 σB与ARV的核苷酸和氨基酸同源性分别为59.3％-64.0％和60.9％-62.5％;表达的σB蛋白分子量为45kDa,与预期大小一致,Western blots表明σB蛋白能与抗番鸭呼肠孤病毒... 详细信息

本文对DRV S12 σB编码基因进行克隆,测序和原核表达,序列分析表明S12 σB与ARV的核苷酸和氨基酸同源性分别为59.3％-64.0％和60.9％-62.5％;表达的σB蛋白分子量为45kDa,与预期大小一致,Western blots表明σB蛋白能与抗番鸭呼肠孤病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性;将表达的σB蛋白按5ug/ml包被,血清做1:160倍稀释,经30份鸭阴性血清确定阳性临界点为0.2;对117份濒死期鸭血清进行检测,与中和试验(SN)的符合率为100％,AGID的符合率为79.5％,表明该σB-ELISA诊断方法可用于诊断番鸭胡肠孤病毒的抗体监测.

关键词：番鸭呼肠孤病毒基因表达 ELISA 基因克隆

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