检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 430-433页

作者：张鑫时洪艳徐佳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)与宿主细胞核仁素(NCL)蛋白的相互作用,本研究将重组质粒p EGFP-CSFV-C转染至猪睾丸细胞(ST)中,采用GST pull-down和免疫共沉淀方法沉淀ST细胞中的NCL蛋白,通过共聚焦显微镜分析C蛋白和NCL蛋白的共定位... 详细信息

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)与宿主细胞核仁素(NCL)蛋白的相互作用,本研究将重组质粒p EGFP-CSFV-C转染至猪睾丸细胞(ST)中,采用GST pull-down和免疫共沉淀方法沉淀ST细胞中的NCL蛋白,通过共聚焦显微镜分析C蛋白和NCL蛋白的共定位情况。结果表明,CSFV C蛋白与NCL蛋白在核仁中存在共定位现象,并且在体外和转染细胞中均存在相互作用。NCL蛋白被抑制后,CSFV的复制能力下降。本研究为进一步分析C蛋白核转运机制以及在CSFV复制过程中的功能提供了实验依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白核仁素相互作用

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猪伪狂犬病病毒HLJ8株的分离与鉴定

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中国兽医科学 2015年第1期45卷 20-24页

作者：姜成刚赵款叶超王淑杰郭金潮常晓博刘永刚田志军安同庆蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

2013年黑龙江省某猪场发生仔猪死亡并且伴有神经症状,采集死亡猪脑组织,经PCR检测、病毒电镜观察,确诊为伪狂犬病病毒(PRV)感染,遂将该毒株命名为HLJ8。进一步对病毒gE基因的序列分析表明,该毒株与2012年的中国分离株在同一个相对独立... 详细信息

2013年黑龙江省某猪场发生仔猪死亡并且伴有神经症状,采集死亡猪脑组织,经PCR检测、病毒电镜观察,确诊为伪狂犬病病毒(PRV)感染,遂将该毒株命名为HLJ8。进一步对病毒gE基因的序列分析表明,该毒株与2012年的中国分离株在同一个相对独立的分支中,氨基酸序列的同源性在94%~100%之间;与2011年之前分离的毒株的亲缘关系较远。小鼠毒力试验结果表明,高剂量(1×103 PFU/mL)的HLJ8株可以引起小鼠死亡以及皮肤瘙痒等典型的PRV感染症状,但其毒力略低于经典强毒株PRV SC株。

关键词：猪伪狂犬病病毒分离鉴定致病性

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hilA基因两端51bp序列对示踪标记性绿色荧光蛋白在禽肠炎沙门氏菌中倍增表达效率的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 409-413页

作者：王高玲李涛史冰田司微王斌刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 福建农林大学动物科技学院福建福州350000

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插... 详细信息

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插入p MD18-T载体中构建p MD-e GFP原核表达重组质粒,将其转化于***。结果显示e GFP能够在***中持续表达。进一步将*** hil A基因两端的51 bp序列分别添加到p MD-e GFP中e GFP表达盒的两端,构建p MD-He GFP重组质粒。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析与p MD-e GFP相比,p MD-He GFP转化***后,其e GFP的荧光强度提高约30倍。通过在无抗生素选择压力下连续传20代次,重组***中e GFP仍然能够稳定表达。本研究结果为进一步研究***在动物体内的分布和定植规律等提供了一种具有荧光示踪标记的目标菌,并为其他细菌的同类研究提供了借鉴。

关键词：肠炎沙门氏菌绿色荧光蛋白荧光标记 hilA基因

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肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：曹俊刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院吉林农业大学动物科学技术学院东北农业大学动物医学学院

肠炎沙门菌(Salmonella enterica)是一种无宿主特异性的病原菌,不但引起畜禽疾病,而且是一种重要的人类食源性致病菌,具有重要的公共卫生意义。肠炎沙门菌的热不稳定延伸因子EF-Tu(Elongation factorthermo unstable,EF-Tu)由tufA基因编... 详细信息

肠炎沙门菌(Salmonella enterica)是一种无宿主特异性的病原菌,不但引起畜禽疾病,而且是一种重要的人类食源性致病菌,具有重要的公共卫生意义。肠炎沙门菌的热不稳定延伸因子EF-Tu(Elongation factorthermo unstable,EF-Tu)由tufA基因编码,是细菌细胞中含量很丰富的一种蛋白质,其主要生物功能是在蛋白质合成过程

关键词：缺失株肠炎沙门菌 EF-Tu 延伸因子

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结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2015年第2期45卷 172-176页

作者：崔莹莹宋宁宁党光辉曹俊李华芳于申业刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋... 详细信息

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 rv3295基因原核表达单克隆抗体

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TK基因缺失对鸭肠炎病毒在鸡胚成纤维细胞中复制影响的评价

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 339-343页

作者：王玉龙李慧昕李冰胡永浩刘胜旺甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定鸭肠炎病毒(DEV)的非必需基因,本研究利用增强型绿色蛋白(EGFP)基因为报告基因,通过在转染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中同源重组,将其插入DEV基因组的TK基因中,经筛选和纯化绿色荧光病毒蚀斑,获得表达EGFP的重组DEV,命名为r DEVTK-EGF... 详细信息

为鉴定鸭肠炎病毒(DEV)的非必需基因,本研究利用增强型绿色蛋白(EGFP)基因为报告基因,通过在转染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中同源重组,将其插入DEV基因组的TK基因中,经筛选和纯化绿色荧光病毒蚀斑,获得表达EGFP的重组DEV,命名为r DEVTK-EGFP。对重组病毒与亲本病毒DEV Clone-03复制动力学比较结果显示,重组病毒滴度显著低于亲本病毒(p<0.01)。对重组病毒在复制过程中感染细胞能力和荧光表达时相检测结果表明,在感染后48 h^72 h表达荧光信号细胞明显增多,该结果与重组病毒复制动力学一致。将重组病毒在CEF中连续传代至20代,仍具有遗传稳定性。该研究结果表明,TK基因为DEV复制非必需基因,可以作为外源基因插入位点,用于禽用新型基因工程疫苗的研制。

关键词：鸭肠炎病毒 TK基因重组病毒病毒复制

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抗禽白血病病毒p27蛋白线性抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 632-635页

作者：李晓菲朱海波高奇王琦孙佳善高玉龙祁小乐王永强高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病科技创新团队黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨动物用生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150001

为鉴定禽白血病病毒(ALV)p27蛋白中的线性抗原表位,本研究以原核表达的重组p27蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,将免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA方法筛选纯化获得一株能够稳定分泌特异性单克隆抗体(MAb)的杂交... 详细信息

为鉴定禽白血病病毒(ALV)p27蛋白中的线性抗原表位,本研究以原核表达的重组p27蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,将免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA方法筛选纯化获得一株能够稳定分泌特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株。Western blot试验结果显示,该MAb可以识别ALV的群特异性抗原p27蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,MAb与A、B和J亚群ALV均呈阳性反应。对p27蛋白进行截短表达,利用western blot和间接ELISA进行表位鉴定,确定了MAb所识别的抗原表位位于129LVAITASALQAFRE142。氨基酸序列比对结果显示,本研究所鉴定出的p27表位在A、B和J亚群ALV之间高度保守。本研究为ALV检测方法的建立及其免疫学功能的研究提供了有利的工具。

关键词：禽白血病病毒 p27蛋白单克隆抗体抗原表位

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鸡痘病毒复制非必需位点的筛选及鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 422-425页

作者：张雪梅赵妍张晓彩王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物科学与技术学院黑龙江哈尔滨150030 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150001

为筛选新的高效的鸡痘病毒(FPV)中外源基因的插入位点,本研究选择FPV ORF161与ORF162之间的基因间隔区作为重组位点,构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的转移载体,以表达鸡传染性喉气管炎病毒g B基因的重组FPV(r FPV-g B)为亲本病毒,通... 详细信息

为筛选新的高效的鸡痘病毒(FPV)中外源基因的插入位点,本研究选择FPV ORF161与ORF162之间的基因间隔区作为重组位点,构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的转移载体,以表达鸡传染性喉气管炎病毒g B基因的重组FPV(r FPV-g B)为亲本病毒,通过在鸡胚成纤维细胞(CEF)中同源重组,并经过蚀斑纯化筛选获得能够稳定表达gfp报告基因的重组病毒,命名为r FPV-g B161gfp。将r FPV-g B161gfp与亲本病毒连续传代20代,每5代进行荧光显微镜观察、PCR检测及复制动力学比较,结果表明重组病毒遗传稳定性良好,而且重组病毒与亲本病毒生长特性一致。本研究鉴定的新外源基因插入位点为构建多价重组FPV疫苗奠定了基础。

关键词：重组鸡痘病毒插入位点增强型绿色荧光蛋白

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一株抗猪脑心肌炎病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第7期37卷 553-556页

作者：张泉张元峰黄丽王胜男蔡雪辉熊涛翁长江长江大学生命科学学院湖北荆州434025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为制备抗猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达的重组VP2蛋白(r VP2),纯化后将其免疫BALB/c小鼠,取免疫的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,通过间接ELISA方法筛选出一株稳定分泌... 详细信息

为制备抗猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达的重组VP2蛋白(r VP2),纯化后将其免疫BALB/c小鼠,取免疫的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,通过间接ELISA方法筛选出一株稳定分泌抗VP2 MAb(1D3)。通过间接免疫荧光试验和western blot对该MAb的免疫活性和特异性进行鉴定,结果表明1D3 MAb仅能够特异性与EMCV全病毒反应。此外,通过构建截短的VP2蛋白重组质粒,采用western blot的方法对VP2蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 1D3识别的线性表位区域为89DGGVFGAALRRH100。本实验结果为进一步研究VP2蛋白的功能及建立EMCV检测方法奠定了基础。

关键词：猪脑心肌炎病毒 VP2蛋白单克隆抗体抗原表位

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牛支原体及其脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞IL-1β表达的分子机制研究

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 444-447页

作者：刘素丽汪洋李媛周玉梅高利萍邵佳日王琪陈莹辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为研究牛支原体(***)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL-1β表达的分子机制,本研究首先以***及其LAMPs刺激EBL细胞,利用荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β的动态变化;然后将融合表达的细胞p65(Rel A)蛋白和绿色荧光蛋白重组... 详细信息

为研究牛支原体(***)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL-1β表达的分子机制,本研究首先以***及其LAMPs刺激EBL细胞,利用荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β的动态变化;然后将融合表达的细胞p65(Rel A)蛋白和绿色荧光蛋白重组质粒p EGFP-p65转染EBL细胞,以LAMPs刺激EBL细胞,通过激光共聚焦观察p65的亚细胞分布。荧光定量PCR结果显示,***及其LAMPs能够诱导EBL细胞IL-1β的表达;而且LAMPs作用的最佳剂量为2μg/m L,最佳时间为12 h。同时,激光共聚焦试验检测到LAMPs能够诱导p65进入EBL细胞核中。上述实验结果表明LAMPs能够诱导EBL细胞中p65进入细胞核内,从而激活NF-κB信号通路,诱导IL-1β上调表达。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白胎牛肺细胞 NF-κB信号通路 IL-1β IL-1β

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