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第十二届中国实验动物科学年会

作者：张圆圆陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150001

目的以干羊草为实验对象，比较辐照灭菌和高压灭菌前后及不同灭菌方法对其营养成分的影响情况.方法采用Co60γ射线进行辐照，高压灭菌，按照国标法测定并计算干羊草灭菌前后干常规养分及纤维素的含量.结果羊草经高压灭菌后干物质、... 详细信息

目的以干羊草为实验对象，比较辐照灭菌和高压灭菌前后及不同灭菌方法对其营养成分的影响情况.方法采用Co60γ射线进行辐照，高压灭菌，按照国标法测定并计算干羊草灭菌前后干常规养分及纤维素的含量.结果羊草经高压灭菌后干物质、粗纤维显著低于灭菌前(P＜0.05)，辐照后干物质显著低于灭菌前、显著高于灭菌后高压组(P＜0.05);辐照后粗纤维显著低于灭菌前及灭菌后高压组(P＜0.05);高压灭菌后粗灰分、粗蛋白、磷含量显著低于灭菌前及辐照组(P＜0.05);高压及辐照后无氮浸出物含量较灭菌前显著增加(P＜0.05).结论灭菌过程降低了干羊草营养成分的含量，辐照灭菌总体上对其营养成分造成的损失低于高压灭菌，辐照可作为羊草在反刍实验动物粗饲料中应用的灭菌的方法.

关键词：干羊草辐照灭菌高压灭菌营养成分纤维素

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鸡IL-10原核表达抗血清用于体内实验的初步分析

鸡IL-10原核表达抗血清用于体内实验的初步分析

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2016第十四届中国北方实验动物科技年会

作者：韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的：获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性. 方法：采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功... 详细信息

目的：获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性. 方法：采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10.转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清.分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性. 结果：构建成功chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,制备了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应. 结论：原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测.

关键词：鸡病毒病鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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谷氨酰胺对鸭瘟感染鸭十二指肠形态结构的影响

谷氨酰胺对鸭瘟感染鸭十二指肠形态结构的影响

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：张圆圆赵丽丽陆涛峰牛银杰韩凌霞刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队

目的为谷氨酰胺（Glutamine,Gln）在正常鸭及鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）感染模型中对肠道功能的影响研究提供依据。方法 120只无特定病原体（Specific pathogen free,SPF）7日龄雏鸭随机分为8组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别梯度剂量灌... 详细信息

目的为谷氨酰胺（Glutamine,Gln）在正常鸭及鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）感染模型中对肠道功能的影响研究提供依据。方法 120只无特定病原体（Specific pathogen free,SPF）7日龄雏鸭随机分为8组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别梯度剂量灌喂Gln（0、0.5、1、2 g每千克饲料每天）持续6d,及Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ组灌喂同等梯度剂量Gln 6d,于第一天灌喂30 min后攻鸭瘟病毒(2000TCID)0.2 mL,观察Gln对正常雏鸭的肠道结构保护作用及攻毒鸭肠道损伤的缓解作用。HE染色观察十二指肠肠壁结构形态,测定十二指肠绒毛高度和隐窝深度。结果 Gln的添加,缓解了十二指肠绒毛的蛋白样渗出现象和绒毛破损率;随着Gln添加量的增加,未攻毒组和攻毒组的十二指肠绒毛高度显著增加、隐窝深度降低、绒毛高度与隐窝深度的比值增加。结论Gln一定程度上保护了攻毒组十二指肠结构的完整性,维护了肠道结构。

关键词：谷氨酰胺鸭鸭瘟十二指肠肠道结构

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基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α的结合能分析

基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α...

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：张圆圆周妍刁晨曦陆涛峰赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/实验动物与比较医学团队

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结... 详细信息

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结合能。结果 E2和ZEN与ERα的结合能分别为-11.5 kcal·mol和-8.6 kcal·mol;两者都位于疏水性较强的活性口袋中,苯环都与Phe-404和Arg-394形成了CH-π和阳离子-π的相互作用;E2的羟基分别5个氨基酸形成氢键,其中一个羟基与水分子形成了保守的氢键。结论分子对接提供了E2和ZEN分别与ERα结合的相互作用力的可视化分析结果,证明了ZEN与ERα具有亲和力,但低于E2。

关键词：玉米赤霉烯酮雌激素受体α 分子对接结合能

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MHC单倍体型SPF鸭的遗传学检测技术的优化

MHC单倍体型SPF鸭的遗传学检测技术的优化

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

目的优化无特定病原体(SPF)主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭HBW-SPF的遗传学稳定性检测技术。方法以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(国家禽类实验动物种子中心)培育并保存的F1至F5世代HBW-SPF鸭为基础,根据位于MHC区域的鸭抗原处理... 详细信息

目的优化无特定病原体(SPF)主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭HBW-SPF的遗传学稳定性检测技术。方法以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(国家禽类实验动物种子中心)培育并保存的F1至F5世代HBW-SPF鸭为基础,根据位于MHC区域的鸭抗原处理相关转运体分子(Tap)基因,分别基于Tap1基因组序列的短串联重复序列(STR)、Tap2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列,分析F1-F3代HBW-SPF鸭的遗传稳定性。结果 F0鸭的STR技术,在F1代完全稳定;F1代约2 kb的编码区序列存在多个变异点,且都有2个等位基因,根据STR标记确定的单倍型与毗邻的Tap2基因未完全连锁;利用基因组序列对F2代的遗传学检测中,B1和B2群鸭完全保守,B3鸭出现24个变异点,且皆为2个等位基因。利用Tap2基因组1-714和1-663 nt的核苷酸序列与F0代进行比对,结果 1-663 nt检测序列完全纯合。结论根据Tap2基因组的1-663 nt的核苷酸序列区域建立的分型技术,适合MHC单倍型SPF鸭的遗传学质量监测。

关键词：主要组织相容性复合体无特定病原体单倍体型鸭抗原处理相关转运体

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玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展

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中国饲料 2017年第16期 35-39,42页

作者：周妍张圆圆刁晨曦陆涛峰陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011

玉米赤霉烯酮是由镰刀菌产生的类雌激素样真菌毒素。本文结合国内外的研究成果,对玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展进行了综述,为真菌毒素如玉米赤霉烯酮检测方法的探索提供参考。

关键词：玉米赤霉烯酮检测方法研究进展

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鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体的制备及其初步应用

鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体的制备及其初步应用

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为制备鸭抗原处理相关转运体（TAP）肽结合区（PBD）特异性单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达鸭截短的TAP2蛋白（TAP2PBD）,并对表达的TAP2PBD进行纯化免疫BAIB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,... 详细信息

为制备鸭抗原处理相关转运体（TAP）肽结合区（PBD）特异性单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达鸭截短的TAP2蛋白（TAP2PBD）,并对表达的TAP2PBD进行纯化免疫BAIB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,以原核表达纯化的TAP2PBD蛋白为检测抗原,采用ELISA的检测方法筛选杂交瘤细胞系,获得一株稳定分泌抗TAP2PBD的mAb杂交瘤细胞系（1A6）。该mAb亚型鉴定为IgM型,轻链为k链。免疫组化试验显示1A6可以特异性识别真核组织表达的TAP蛋白。通过截短表达TAP2PBD蛋白鉴定该mAb的抗原表位为NARHQMLQQAVLDATAGTGMVAQEAI,序列分析表明该抗原表位在鸭中保守。本研究制备的mAb首次利用鸭TAP蛋白特异性单抗检测到TAP蛋白在亚细胞水平的表达,为进一步研究鸭TAP同免疫遗传的关系奠定了基础。

关键词：鸭抗原处理相关转运体原核表达单克隆抗体

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H9N2亚型AIV对海兰白鸡感染和传播特性的研究

H9N2亚型AIV对海兰白鸡感染和传播特性的研究

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：孟庆文周长良王伟邓瑞坡臧凤霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨

目的建立H9N2亚型禽流感病毒感染海兰白鸡的感染模型,了解其对海兰白鸡的致病性,为评价抗流感转基因鸡研究奠定基础.方法将80只4周龄的海兰白鸡随机分为8组,每组10只,其中感染组5只,同居组5只;攻毒剂量为100 ～ 107 EID50/0.4mL,攻毒... 详细信息

目的建立H9N2亚型禽流感病毒感染海兰白鸡的感染模型,了解其对海兰白鸡的致病性,为评价抗流感转基因鸡研究奠定基础.方法将80只4周龄的海兰白鸡随机分为8组,每组10只,其中感染组5只,同居组5只;攻毒剂量为100 ～ 107 EID50/0.4mL,攻毒方式为滴鼻和点眼,感染24h后放入同居组.感染14d内每天进行临床观察,采集咽拭子和泄殖腔拭子用于病毒分离,感染后7、10、14d测定HI抗体滴度.结果 4周龄海兰白鸡感染H9N2流感病毒后未出现明显的临床症状;攻毒剂量为100～ 101 EID50/0.4mL的感染组和同居组均未分离到病毒;攻毒剂量为102～ 103 EID50/0.4mL的感染组排毒期为2～6d,同居组排毒期为4～ 6d;攻毒剂量为104 ～ 107 EID50/0.4mL感染组排毒期为1～ 6d,同居组排毒期为2～8d;攻毒剂量为102～107 EID50/0.4mL感染组和同居组鸡分别于感染后7和10d开始产生抗体,第14d感染组和同居组鸡的平均抗体滴度(log 2)分别为7.8±1.4和6.7±1.1.结论该毒株使4周龄海兰白鸡全部感染的最低攻毒剂量为103 EID50/0.4mL,以106 EID50/0.4mL的攻毒剂量感染鸡,能刺激感染组与同居组鸡产生较高的HI抗体,建立了海兰白鸡的H9N2亚型禽流感病毒感染模型,为H9N2亚型流感病毒的致病机理及表达抗流感基因的转基因鸡研究奠定了基础.

关键词： H9N2 禽流感病毒海兰白鸡感染传播

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兽用疫苗中实验动物替代方法的研究进展

兽用疫苗中实验动物替代方法的研究进展

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：王兴童韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文介绍了兽用生物制品中非动物替代方法的应用及研究进展,并从兽用疫苗效力检验、安全检验方面介绍了部分兽用疫苗的非动物替代方法.同时对适合建立替代方法的兽用疫苗进行分析,以期为兽用疫苗替代方法研究提供参考.

关键词：兽用疫苗效力检验安全检验非动物实验

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鸭肠炎病毒在HBK-SPF鸭B3系和B1系的体外致病性的比较

鸭肠炎病毒在HBK-SPF鸭B3系和B1系的体外致病性的比较

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：王兴童牛银杰彭蔚宇王丽廷孟兴赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学创新团队山西农业大学动物科技学院

主要组织相容性复合体(MHC)是紧密连锁、富含多种免疫相关蛋白的基因簇,其基因型对特定疫病的致病性或免疫应答水平密切相关。HBK-B1和B3鸭是以中国禽类实验动物种子选育的无特定病原体(SPF)绍兴麻鸭HBK-SPF鸭为基础,根据毗邻MHCⅠ类分... 详细信息

主要组织相容性复合体(MHC)是紧密连锁、富含多种免疫相关蛋白的基因簇,其基因型对特定疫病的致病性或免疫应答水平密切相关。HBK-B1和B3鸭是以中国禽类实验动物种子选育的无特定病原体(SPF)绍兴麻鸭HBK-SPF鸭为基础,根据毗邻MHCⅠ类分子的抗原转运相关蛋白(TAP)基因的多态性选育成功的4个纯系SPF鸭群,本研究将DEV疫苗株C-KCE同DEV人工感染鸭血清均2倍倍比稀释后,将不同浓度的血清和病毒棋盘法混合接种于B3系和B1系鸭原代鸭胚成纤维细胞(DEF),96 h后比较DEV特异性致病变效应(CPE),对相同稀释度但病变程度有差异的8个孔进行实时荧光定量PCR,检测DEV拷贝数。结果血清抗体和病毒相同浓度时,B3系DEF出现的CPE比B1的严重,且被检孔的平均病毒拷贝数(8.38E×10～5)大于B1(1.89E×10～5)品系。被相同浓度血清抗体中和时,B3系的病毒含量更高,即增殖更快。本研究表明鸭的MHC基因型影响鸭肠炎病毒的复制能力,并且B3系HBK鸭比B1系更敏感,HBK单倍型鸭是开展水禽病免疫遗传学研究的良好模式动物。

关键词：鸭主要组织相容性复合体 HBK-SPF鸭鸭肠炎病毒敏感性

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