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第十届全国免疫学学术大会

作者：贾悦李月健喻进张晨亮李娜娜卢晓晓张宁李欣张鼎郝卫芳马海利高文伟赵宇军高诗敏李建慧李桂兰闫芳韩凌霞宁官保田文霞山西农业大学动物科技学院太原市动物疫病预防控制中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学创新团队中心/兽医生物技术国家重点实验室

研究背景:红细胞不仅可以运输O2、CO2和调节p H,其自身还拥有一定的免疫功能。红细胞免疫功能方面的研究在哺乳动物及人的无核红细胞中起步较早,发展已比较完善,但在禽类等有核红细胞中起步较晚,发展比较滞后。目的 :本试验就采用转录... 详细信息

研究背景:红细胞不仅可以运输O2、CO2和调节p H,其自身还拥有一定的免疫功能。红细胞免疫功能方面的研究在哺乳动物及人的无核红细胞中起步较早,发展已比较完善,但在禽类等有核红细胞中起步较晚,发展比较滞后。目的 :本试验就采用转录组测序(RNA-Seq)技术对雏鸡不同日龄的红细胞基因表达进行研究,筛选出红细胞差异表达基因,并对其进行相关生物信息学分析。以期发现雏鸡红细胞免疫系统中的重要基因,并分析其表达蛋白的相互关系及其参与的信号通路,为更深入地研究红细胞免疫分子机制、疾病防治及疫苗研制开辟新的途径。方法 :通过RNA-Seq技术筛选雏鸡发育过程中三个不同日龄(13、18和26日龄)红细胞差异表达基因,并对获得的差异表达基因(FC≥2)进行NR、Swiss-Prot、GO、COG和KEGG生物信息学分析。结果 :与13日龄相比,18日龄雏鸡红细胞中检测出319个差异表达基因,其中表达上调的有113个,下调表达的有206个;26日龄与13日龄相比,有693个差异表达基因,上调272个,下调421个;26日龄与18日龄相比,有854个差异表达基因,上调319个,下调535个。将获得的差异表达基因在各个数据库中比对,发现有近83%的差异表达基因可以得到有效注释;这些差异表达基因参与正常的细胞发育且涉及机体发育主要的信号通路;同时随着雏鸡日龄的增加,相关信号通路中所涉及的差异表达基因数量都在逐渐增加;其中红细胞发育、红细胞免疫系统发育和红细胞黏附能力的相关基因表达都呈现时序性变化。结论 :本试验发现雏鸡红细胞同其它成熟细胞一样,基因功能全面,广泛参与机体大多数的生物学过程;同时,随着雏鸡发育过程中机体免疫系统的逐渐完善,红细胞免疫系统以及黏附能力也趋于完善和成熟。为未来研究红细胞免疫的分子机制提供新的途径。

关键词：红细胞雏鸡红细胞免疫系统 RNA-Seq 差异表达基因信号通路

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马立克病毒对鸡红细胞中免疫相关基因的影响

马立克病毒对鸡红细胞中免疫相关基因的影响

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第十届全国免疫学学术大会

作者：李月健贾悦喻进张晨亮卢晓晓李娜娜李欣张宁张鼎郝卫芳马海利高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳韩凌霞宁官保田文霞山西农业大学动物科技学院太原市动物疫病预防控制中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学创新团队中心/兽医生物技术国家重点实验室

研究背景:马立克病(MD)是鸡的一种病毒性肿瘤疾病,多年来虽获得了一定的成效,但马立克病仍经常发生。自1981年提出红细胞免以来,人们发现红细胞除运输氧气,还参与免疫、代谢等生理过程,而对鸡的红细胞免疫研究不够深入。

关键词：红细胞马立克病转录组测序红细胞免疫

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马立克病毒对鸡红细胞中免疫相关基因的影响

马立克病毒对鸡红细胞中免疫相关基因的影响

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：李月健贾悦喻进张晨亮卢晓晓李娜娜李欣张宁张鼎郝卫芳马海利高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳韩凌霞宁官保田文霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 太原市动物疫病预防控制中心太原030024 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学创新团队中心/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

研究背景：马立克病(MD)足鸡的一种病毒性肿瘤疾病，多年来虽获得了一定的成效，但马立克病仍经常发生。自1981年提出红细胞免以来，人们发现红细胞除运输氧气，还参与免疫、代谢等生理过程，而对鸡的红细胞免疫研究不够深入。

关键词：红细胞马立克病转录组测序红细胞免疫

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雏鸡红细胞免疫相关基因差异表达的时序性研究

雏鸡红细胞免疫相关基因差异表达的时序性研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：贾悦李月健喻进张晨亮李娜娜卢晓晓张宁李欣张鼎郝卫芳马海利高文伟赵宇军高诗敏李建慧李桂兰闫芳韩凌霞宁官保田文霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 太原市动物疫病预防控制中心太原030024 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学创新团队中心/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

研究背景：红细胞不仅可以运输O2、CO2和调节pH,其自身还拥有一定的免疫功能。红细胞免疫功能方面的研究在哺乳动物及人的无核红细胞中起步较早,发展已比较完善,但在禽类等有核红细胞中起步较晚,发展比较滞后。

关键词：红细胞雏鸡红细胞免疫系统 RNA-Seq 差异表达基因信号通路

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B19和B21单倍型鸡NK细胞受体B-NK19和B-NK21的多克隆抗体制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第12期30卷 1274-1277页

作者：杨超张晓娜许峰铭文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学研究团队黑龙江哈尔滨150001

目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-... 详细信息

目的利用大肠杆菌系统表达对多种禽病存在敏感性差异的B19和B21单倍型鸡NK细胞抑制性受体B-NK基因,并制备其多克隆抗体。方法分别提取B19和B21鸡外周血淋巴细胞总RNA,采用反转录PCR法扩增B-NK基因(分别命名为B-NK19和B-NK21),克隆至pET-30a原核表达载体中,经酶切和PCR鉴定构建重组质粒。转入到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析外源蛋白的表达。将含有与组氨酸(His)标签融合表达的外源蛋白胶条切下,多点皮下免疫新西兰兔,分别制备B-NK19和B-NK21特异性多克隆抗体。利用Western blot法鉴定其组织相容性复合体(MHC)单倍型特异性。结果成功构建了原核表达重组质粒pET-B-NK19和pET-B-NK21,利用IPTG在37℃诱导4 h后目的蛋白获得表达,免疫5次后收获兔多克隆抗体,Western blot表明B-NK19和B-NK21蛋白存在免疫学交叉反应和部分特异性。结论对多种禽病具有敏感性差异的MHC单倍体型B19和B21鸡的NK细胞抑制性受体B-NK蛋白存在抗原反应交叉性,其多克隆抗体具有部分特异性。

关键词：鸡NK细胞受体 B-NK B19单倍型 B21单倍型多克隆抗体

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鸡自然杀伤细胞的分离与免疫表型分析

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 236-238页

作者：杨超张晓娜张园华廉传江文辉强陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

为研究鸡自然杀伤(NK)细胞,本实验采用冷胰酶消化法消化14日胚龄鸡胚脾脏组织,分离收获鸡胚脾脏淋巴细胞,在含有重组鸡白介素-2和条件培养基的IMDM培养液中培养48 h,收获悬浮细胞,暂时命名为TCR0细胞(即鸡NK细胞)。流式前向角和侧向角... 详细信息

为研究鸡自然杀伤(NK)细胞,本实验采用冷胰酶消化法消化14日胚龄鸡胚脾脏组织,分离收获鸡胚脾脏淋巴细胞,在含有重组鸡白介素-2和条件培养基的IMDM培养液中培养48 h,收获悬浮细胞,暂时命名为TCR0细胞(即鸡NK细胞)。流式前向角和侧向角分析显示培养的TCR0细胞中85.1%的细胞大小均一,颗粒度一致;瑞氏吉姆萨染料染色结果表明TCR0细胞内一侧含有嗜酸性大颗粒,符合鸡NK细胞的形态特征;流式细胞术单克隆抗体染色结果显示,TCR0细胞中,97.4%高表达MHCⅠ类分子,30.8%低表达CD8a,不表达T细胞表面标记CD3和B细胞表面标记CD4和Bu-1,符合鸡NK细胞表面标记特点。本实验是国内成功分离并纯化鸡NK细胞的首次报道。

关键词：鸡自然杀伤细胞分离与培养免疫表型

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猪圆环病毒2型重组病毒分离株的鉴定

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动物医学进展 2014年第6期35卷 26-31页

作者：李海超韩凌霞东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解某猪场猪圆环病毒2型（PCV-2）的流行及毒株基因组变异情况，应用 PCR 方法从6个疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）病死猪的心脏、淋巴结、脾脏和肺脏等病料中进行猪圆环2型病毒的检测，并对阳性病料进行 PCV-2全基因组的扩... 详细信息

为了解某猪场猪圆环病毒2型（PCV-2）的流行及毒株基因组变异情况，应用 PCR 方法从6个疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）病死猪的心脏、淋巴结、脾脏和肺脏等病料中进行猪圆环2型病毒的检测，并对阳性病料进行 PCV-2全基因组的扩增，将成功扩增到的6株 PCV-2全基因组克隆到 pMD-18T Simple Vector，构建重组质粒。对全基因组进行测序，然后对全基因组进行同源性、遗传进化、重组以及毒力分析。结果表明，6株 PCV-2基因组长度均为1767 bp，与参考序列的同源性在88．1％～99．6％之间，并且 LNF3、HEBF5和 HEN65为 PCV-2b1C 基因型，LN51为 PCV-2b1B 基因型，HEN60株为 PCV-2b1A 基因型，HEBF7属于 PCV-2a，但不属于任何亚型，可能为 PCV-2a 向 PCV-2b 的过渡株。利用重组分析软件RDP4．25和 SIMPLOT3．5．1分析，表明 LN51株可能来自 PCV-2a2A 和 PCV-2b1A 基因型的重组。根据PCV-2 Cap 的76位和131位氨基酸残基，有5株符合强毒特征（76I、131T），而 HEBF7株存在强、弱毒的特征。本研究为我国 PCV-2流行株的分子特征研究提供了参考。

关键词：猪圆环病毒2型毒力重组基因型

来源：评论

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MHC单倍型SPF鸭的培育及其TAP基因组序列分析

MHC单倍型SPF鸭的培育及其TAP基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：张晓娜武永淑吴少莲廉传江文辉强陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室

引言鸭主要组织相容性复合体（MHC）是一组紧密连锁高度多态的基因簇,其单倍型与宿主的抗病性和免疫应答水平密切相关,其中抗原提呈相关转运蛋白（TAP）基因毗邻MHCⅠ基因。HBK鸭排除了10种特定病原体,现已培育至第8代。本研究对获得的... 详细信息

引言鸭主要组织相容性复合体（MHC）是一组紧密连锁高度多态的基因簇,其单倍型与宿主的抗病性和免疫应答水平密切相关,其中抗原提呈相关转运蛋白（TAP）基因毗邻MHCⅠ基因。HBK鸭排除了10种特定病原体,现已培育至第8代。本研究对获得的HBK鸭MHCⅠ区域基因组序列分析,旨在为鸭MHC基因和TAP基因的结构及功能提供了依据。

关键词：基因组序列分析单倍型 TAP MHC SPF

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鸡BLec基因重组蛋白的原核表达及兔多抗制备

鸡BLec基因重组蛋白的原核表达及兔多抗制备

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第十二届中国北方实验动物科技年会

作者：廉传江张园华张晓娜吴少莲文辉强陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了制备鸡BLec蛋白的多克隆抗体,本实验采用RT-PCR技术从2月龄B15单倍型鸡的胸腺组织扩增了ChBLec基因,并以pET-30a(+)为原核表达载体成功构建重组质粒pET-30a-ChBLec,并在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG(0.02mmol/L)诱导表达,获得大小约为... 详细信息

为了制备鸡BLec蛋白的多克隆抗体,本实验采用RT-PCR技术从2月龄B15单倍型鸡的胸腺组织扩增了ChBLec基因,并以pET-30a(+)为原核表达载体成功构建重组质粒pET-30a-ChBLec,并在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG(0.02mmol/L)诱导表达,获得大小约为17kDa以包涵体形式存在的ChBLec重组蛋白.把含有重组蛋白的SDS-PAGE胶研磨后制备免疫原,免疫新西兰兔,获得兔抗血清.Western blot检测显示,兔抗血清能检测到pET-30a-ChBLec外源蛋白.结果表明：ChBLec基因在大肠杆菌成功表达,且成功制备了兔抗ChBLec血清,该血清可进一步用于检测ChBLec蛋白在鸡体内的表达情况.

关键词：鸡 ChBLec基因重组蛋白原核表达

来源：评论

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抗流感病毒候选基因的筛选:单链抗体

抗流感病毒候选基因的筛选:单链抗体

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王伟李越赵颖慧臧凤霞周长良孟庆文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001

本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选出了3株与... 详细信息

本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选出了3株与流感病毒中和效果较好的单克隆抗体。以单抗杂交瘤细胞RNA反转录产物为模板，PCR成功扩增了轻(321 bp)、重链(360 bp)基因。选用(Gly4Ser),15肽序列的Linker序列，以重叠延伸拼接法成功组建了3条单链抗体基因，构建真核表达载体pCDNA31-ScFvo Lipoinfectamine2000转染MDCK细胞，在细胞水平上对3条单链抗体抗流感病毒活性进行了检测，间接免疫荧光实验结果表明单链抗体Q1-B1-BB具有一定的抑制流感病毒复制的能力，为以后小鼠模型验证其抗流感病毒活性奠定了基础，为抗流感转基因动物研究提供候选基因。

关键词：鸡流感病毒抗病毒基因单链抗体

来源：评论

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