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2016第十四届中国北方实验动物科技年会

作者：韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的：获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性. 方法：采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功... 详细信息

目的：获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性. 方法：采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10.转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清.分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性. 结果：构建成功chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,制备了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应. 结论：原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测.

关键词：鸡病毒病鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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猪内源性逆转录病毒在3种不同品系猪中的分布及序列特征研究

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中国预防兽医学报 2022年第11期44卷 1141-1148,1168页

作者：冯天悦 Kamal Shah 张文立付利芝李昌文王玉娥陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 重庆市畜牧科学研究院兽医兽药研究所重庆402460

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PE... 详细信息

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PERV-C)的分布情况。结果显示,PERV在3种猪种中均有分布,其中PERV-A分布最广泛。进一步分段扩增3种猪的PERV-A全基因组序列并测序分析。全基因组序列进化树与囊膜(env)基因进化树分析均显示,东北地区的大白猪与荣昌猪PERV-A归为同一分支,亲缘关系较近;对测序结果进行生物信息学分析和蛋白二级结构预测,结果显示,PERV-A Gag蛋白和Pol蛋白的变异程度较大,有多种结构,但Env蛋白保守性较高,结构较为单一。采用荧光定量PCR法检测SPF大白猪不同组织中的PERV-A,结果显示从SPF大白猪心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等7种组织中均检测出PERV-A,且在扁桃体等免疫器官组织中的转录水平最高。本研究共获得了5条不同猪种的PERV-A全基因组序列,首次鉴定了荣昌猪PERV全基因组序列,提示东北地区大白猪的引种来源可能与韩国猪种存在一定同源性,且五指山小型猪与荣昌猪、大白猪亲缘关系较远,有助于PERV分子特性的研究,并为评估不同猪种PERV在异种移植中的安全性并筛选合适猪种提供参考。

关键词：猪内源性逆转录病毒序列分析囊膜基因遗传进化分析

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西尼罗病毒重组新城疫病毒活载体疫苗的研究

西尼罗病毒重组新城疫病毒活载体疫苗的研究

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：王元智马芹陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学创新团队

西尼罗热(West Nile fever,WNF)是由是西尼罗病毒(West Nile fever virus,WNV)引起的人兽共患病,在世界范围内广泛分布,对我国造成严重威胁。WNV通过蚊子传播,感染宿主极广,包括鸟类、两栖动物、爬行动物和哺乳动物。对人类接触密切的... 详细信息

西尼罗热(West Nile fever,WNF)是由是西尼罗病毒(West Nile fever virus,WNV)引起的人兽共患病,在世界范围内广泛分布,对我国造成严重威胁。WNV通过蚊子传播,感染宿主极广,包括鸟类、两栖动物、爬行动物和哺乳动物。对人类接触密切的易感动物,如马、禽类和部分鸟类进行免疫,具有重要的兽医卫生和公共卫

关键词：重组新城疫病毒活载体疫苗

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抗水貂阿留申病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

抗水貂阿留申病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的...

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：王元智马芹陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学创新团队

水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AM D)又称浆细胞增多症(plasmacytasis),是一种由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)侵害水貂免疫细胞引起的自身免疫系统紊乱、衰竭,同时并发强烈的自身免疫的慢性、传染性疾病。A... 详细信息

水貂阿留申病(Aleutian mink disease,AM D)又称浆细胞增多症(plasmacytasis),是一种由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)侵害水貂免疫细胞引起的自身免疫系统紊乱、衰竭,同时并发强烈的自身免疫的慢性、传染性疾病。AMDV抗体不仅不能提供保护能力,相反可造成水貂持续性感染,迄今尚无特异的防治

关键词：双抗体夹心水貂阿留申病毒检测方法单克隆抗体 ELISA

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畜禽疫病防控用SPF猪的开发

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实验动物与比较医学 2018年第4期38卷 245-249页

作者：高彩霞辛畅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文就SPF猪在畜禽疫病防控研究中的重要性和国内外研究现状进行了阐述,分析了目前存在的问题,介绍了培育标准化SPF猪种群常用的方法,并探讨了SPF猪的应用前景,旨在为畜禽疫病防控研究用实验动物的开发提供一定的理论指导。

关键词：畜禽疫病防控 SPF猪开发

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基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α的结合能分析

基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α...

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：张圆圆周妍刁晨曦陆涛峰赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/实验动物与比较医学团队

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结... 详细信息

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结合能。结果 E2和ZEN与ERα的结合能分别为-11.5 kcal·mol和-8.6 kcal·mol;两者都位于疏水性较强的活性口袋中,苯环都与Phe-404和Arg-394形成了CH-π和阳离子-π的相互作用;E2的羟基分别5个氨基酸形成氢键,其中一个羟基与水分子形成了保守的氢键。结论分子对接提供了E2和ZEN分别与ERα结合的相互作用力的可视化分析结果,证明了ZEN与ERα具有亲和力,但低于E2。

关键词：玉米赤霉烯酮雌激素受体α 分子对接结合能

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MHC单倍体型SPF鸭的遗传学检测技术的优化

MHC单倍体型SPF鸭的遗传学检测技术的优化

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

目的优化无特定病原体(SPF)主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭HBW-SPF的遗传学稳定性检测技术。方法以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(国家禽类实验动物种子中心)培育并保存的F1至F5世代HBW-SPF鸭为基础,根据位于MHC区域的鸭抗原处理... 详细信息

目的优化无特定病原体(SPF)主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭HBW-SPF的遗传学稳定性检测技术。方法以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(国家禽类实验动物种子中心)培育并保存的F1至F5世代HBW-SPF鸭为基础,根据位于MHC区域的鸭抗原处理相关转运体分子(Tap)基因,分别基于Tap1基因组序列的短串联重复序列(STR)、Tap2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列,分析F1-F3代HBW-SPF鸭的遗传稳定性。结果 F0鸭的STR技术,在F1代完全稳定;F1代约2 kb的编码区序列存在多个变异点,且都有2个等位基因,根据STR标记确定的单倍型与毗邻的Tap2基因未完全连锁;利用基因组序列对F2代的遗传学检测中,B1和B2群鸭完全保守,B3鸭出现24个变异点,且皆为2个等位基因。利用Tap2基因组1-714和1-663 nt的核苷酸序列与F0代进行比对,结果 1-663 nt检测序列完全纯合。结论根据Tap2基因组的1-663 nt的核苷酸序列区域建立的分型技术,适合MHC单倍型SPF鸭的遗传学质量监测。

关键词：主要组织相容性复合体无特定病原体单倍体型鸭抗原处理相关转运体

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玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展

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中国饲料 2017年第16期 35-39,42页

作者：周妍张圆圆刁晨曦陆涛峰陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011

玉米赤霉烯酮是由镰刀菌产生的类雌激素样真菌毒素。本文结合国内外的研究成果,对玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展进行了综述,为真菌毒素如玉米赤霉烯酮检测方法的探索提供参考。

关键词：玉米赤霉烯酮检测方法研究进展

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鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体的制备及其初步应用

鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体的制备及其初步应用

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为制备鸭抗原处理相关转运体（TAP）肽结合区（PBD）特异性单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达鸭截短的TAP2蛋白（TAP2PBD）,并对表达的TAP2PBD进行纯化免疫BAIB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,... 详细信息

为制备鸭抗原处理相关转运体（TAP）肽结合区（PBD）特异性单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达鸭截短的TAP2蛋白（TAP2PBD）,并对表达的TAP2PBD进行纯化免疫BAIB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,以原核表达纯化的TAP2PBD蛋白为检测抗原,采用ELISA的检测方法筛选杂交瘤细胞系,获得一株稳定分泌抗TAP2PBD的mAb杂交瘤细胞系（1A6）。该mAb亚型鉴定为IgM型,轻链为k链。免疫组化试验显示1A6可以特异性识别真核组织表达的TAP蛋白。通过截短表达TAP2PBD蛋白鉴定该mAb的抗原表位为NARHQMLQQAVLDATAGTGMVAQEAI,序列分析表明该抗原表位在鸭中保守。本研究制备的mAb首次利用鸭TAP蛋白特异性单抗检测到TAP蛋白在亚细胞水平的表达,为进一步研究鸭TAP同免疫遗传的关系奠定了基础。

关键词：鸭抗原处理相关转运体原核表达单克隆抗体

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实验牛微生物学和寄生虫学等级及监测地方标准的研究和制定

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实验动物科学 2021年第6期38卷 66-71页

作者：李昌文朱远茂夏长友陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家禽类实验动物资源库黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

标准化是实验动物的根本属性,质量标准是实验动物质量控制体系中的重要组成部分,实验动物微生物和寄生虫控制水平是实验动物分级的根本依据。本文介绍了黑龙江省地方标准《实验动物牛微生物学等级及监测》和《实验动物牛寄生虫学等级及... 详细信息

标准化是实验动物的根本属性,质量标准是实验动物质量控制体系中的重要组成部分,实验动物微生物和寄生虫控制水平是实验动物分级的根本依据。本文介绍了黑龙江省地方标准《实验动物牛微生物学等级及监测》和《实验动物牛寄生虫学等级及监测》的编制背景、实验牛等级设定、检测项目的选择、检测方法、预期社会效益等主要内容。本标准的制定可为黑龙江省农业实验动物新资源提供标准及技术保障、为公共卫生和生物安全提供重要的基础条件、为重大动物疫病研究提供高质量实验动物以及为生物制品的研发、生产及检定提供标准化实验动物,进而推动我省及全国畜牧行业技术进步及畜牧业的健康发展。

关键词：实验牛微生物学寄生虫学地方标准

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