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饲料与畜牧(规模养猪) 2012年第9期 9-11页

作者：陈建飞冯力时洪艳张鑫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种急性、高度接触传播的肠道疾病.自2010年10月以来,我国暴发了"新生仔猪腹泻病",该病主要侵害7日龄以内的乳猪,发病率和死亡率高达100%,给我国的养猪业造成了严重的经济损失.... 详细信息

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种急性、高度接触传播的肠道疾病.自2010年10月以来,我国暴发了"新生仔猪腹泻病",该病主要侵害7日龄以内的乳猪,发病率和死亡率高达100%,给我国的养猪业造成了严重的经济损失.通过对现地病料的追踪检测,我们发现猪流行性腹泻病毒(PEDV)是该次疫情的主要病原.2011年PEDV的检出率是62.10%(136/219),2012年1-7月PEDV的检测率是82.82%(270/326).29个省、直辖市的猪场中存在猪流行性腹泻病毒.

关键词：新生仔猪腹泻病猪流行性腹泻病毒乳猪

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猪捷申病毒TaqMan实时定量RT-PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 206-210页

作者：胡峰赵亚荣吕超超王贵华崔玉东王春仁崔尚金黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 大北农动物医学研究中心北京100097

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、... 详细信息

为建立猪捷申病毒(PTV)的早期检测及定量分析方法,本研究基于PTV 11个血清型基因组5'端非编码区保守序列,设计引物和TaqMan探针,建立了检测PTV的TaqMan实时定量RT-PCR方法。应用该方法对PTV、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒以及猪瘟病毒进行特异性试验,结果除PTV为阳性外其它均为阴性;针对PTV最低可检测到10个拷贝;批内、批间重复试验的变异系数均小于3%。应用建立的方法与病毒分离方法分别对91份临床样品进行检测,检出率分别为79.12%和57.14%,两者的符合率是78.02%。经临床应用表明,该实时定量RT-PCR方法可为PTV的早期诊断及定量分析提供技术手段。

关键词：猪捷申病毒实时定量RT-PCR TaqMan

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兔抗猪CD163蛋白多克隆抗体制备及鉴定

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1624-1628页

作者：郭娟娟彭金美安同庆冷超良吴江宫大庆陈家锃杨永倩田志军张德礼西北农林科技大学、动物医学院病毒免疫与生物信息研究室、生物信息研究中心、分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100 中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室、猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所... 详细信息

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达105,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体-CD163相互作用机制打下了基础。

关键词： CD163 抗体鉴定

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猪圆环病毒疫苗的研究进展

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兽医导刊 2012年第2期 55-56页

作者：刘长明陆月华郭龙军危艳武中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV2）主要引起以患猪全身性淋巴结肿大为特征的多系统功能衰竭性疾病，临床上表现为断奶仔猪多系统衰竭综合征、猪皮炎与肾炎综合征、猪呼吸道疾病综合征、母猪繁殖障碍、坏死性淋巴结炎、肉芽肿性肠炎和渗出性表皮炎等，统称为猪圆环病毒病。

关键词：猪圆环病毒2型断奶仔猪多系统衰竭综合征病毒疫苗猪呼吸道疾病综合征淋巴结肿大母猪繁殖障碍猪圆环病毒病猪皮炎

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猪圆环病毒(PCV)2a/2b亚型毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交叉保护性试验

猪圆环病毒(PCV)2a/2b亚型毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCan)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠... 详细信息

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCan)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b毒株攻毒。攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型毒株均可获得完全保护。以PCV2a和PCV2b各为指示毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型毒株。病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗对PCV2a和PCV2b可提供交叉保护。

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2) PCV2a/2b基因型毒株交互免疫

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猪圆环病毒2a和2b亚型灭活疫苗及亚单位疫苗的交互免疫研究

猪圆环病毒2a和2b亚型灭活疫苗及亚单位疫苗的交互免疫研究

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生态环境与畜牧业可持续发展学术研讨会暨中国畜牧兽医学会2012年学术年会和第七届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会会议

作者：付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠... 详细信息

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b毒株攻毒。攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型毒株均可获得完全保护。以PCV2a和PCV2b各为指示毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型毒株。病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗对PCV2a和PCV2b可提供交叉保护。

关键词：猪圆环病毒2型(PCV2) PCV2a/2b基因型毒株交互免疫

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高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究

高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究

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生态环境与畜牧业可持续发展学术研讨会暨中国畜牧兽医学会2012年学术年会和第七届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会会议

作者：范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺... 详细信息

为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。试验结果表明,HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子(尤以TNF-α)变化也最为明显。HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染协同致病性

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抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

抗猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白单克隆抗体制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：张龙刘建波黄立平郭龙军危艳武唐青海吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa),引物两端设计了SalⅠ和NotⅠ酶切位点,将PC... 详细信息

为表达猪输血传播病毒1型(PTTV1)Cap蛋白用于单抗的制备,以含PTTV1全长基因组的质粒(pMD18-TTV1-SY13)为模板,用高保真PCR法扩增PTTV1-ORF1(1501～2475 nt)编码的Cap蛋白C末端截短序列(324 aa),引物两端设计了SalⅠ和NotⅠ酶切位点,将PCR产物克隆到pGEX-6P-1载体,构建的重组质粒命名为pGEX-TTV1-ORF--C1。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后进行诱导表达,获得了含GST标签的PTTV1-rCap重组融合蛋白,经SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定,目的蛋白获得了高效表达,分子量约为64.0 kDa,以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得了8株稳定分泌抗PTTV1-rCap蛋白的杂交瘤细胞株,依次命名为1H4、1E9、1E11、4G12、5C5、7B8、8C2、8G2,单抗亚类鉴定均为IgG1,轻链为κ型;单抗培养上清效价为400～3200倍,腹水为4.0×105～6.4×106倍;有7株单抗与PTTV1-rCap蛋白产生特异性反应,另1株单抗(1E11)呈阴性,可能针对构象表位。为验证8株单抗与真核表达的Cap蛋白的免疫反应性,将全长与截短的PTTV1-ORFI基因片段克隆到pcDNA3.1/V5-His TOPO表达载体,转染293T细胞进行蛋白表达,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测表明,这8株单抗均能够与表达的Cap蛋白产生特异性反应。本研究表达的PTTVl-Cap蛋白及制备的单抗,为该病毒诊断方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础。

关键词：猪输血传播病毒1型(PTTV1) 重组Cap蛋白单克隆抗体鉴定

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表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定

表达V5表位的重组猪圆环病毒2型毒株及其生物学特性鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：黄立平陆月华危艳武郭龙军吴洪丽张飞雁付玉洁刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性,本研究构建了以PCV2基因组为骨架,在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签,用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞,拯救出一株表达V5... 详细信息

为了探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作为表达外源表位的可行性,本研究构建了以PCV2基因组为骨架,在ORF2编码Cap蛋白的C末端插入了源自副流感病毒5型的一个含14氨基酸序列的V5表位标签,用构建感染性分子克隆重组质粒转染细胞,拯救出一株表达V5表位标签的重组毒株,命名为recPCV2/CL-V5。采用免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、血清中和试验(SNA)、捕获ELISA及免疫电镜对重组毒株进行了鉴定。结果表明:在recPCV2/CL-V5株感染细胞中检出PCV2和V5表位抗原;PCV2阳性血清和中和性单克隆抗体(1D2)能够完全中和recPCV2/CL-V5株的细胞感染性;recPCV2/CL-V5株在繁殖动力学和形态学上与亲本病毒基本一致。鉴于recPCV2/CL-V5株插入了一个V5表位,采用PCR、IPMA和捕获ELISA与亲本毒株相鉴别。recPCV2/CL-V5株经细胞连续传10代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达106.25 TCID50/mL。拯救的带有V5表位标签的重组PCV2毒株,为深入研究该病毒复制理、抗原表位展示及分子标记疫苗和鉴别诊断等开创了新的平台。

关键词：猪圆环病毒2型 V5表位标记毒株生物学特性

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR株不同代次水平的毒力比较试验

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR株不同代次水平的毒力比较试验

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：危艳武范培虎郭龙军吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况,本试验采用第5代、10代和125代PRRSVVIBR株病毒进行了人工感染试验。结果表明,低代次(第5和10代)病毒接种组可复制出以"高热综合... 详细信息

为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况,本试验采用第5代、10代和125代PRRSVVIBR株病毒进行了人工感染试验。结果表明,低代次(第5和10代)病毒接种组可复制出以"高热综合征"为特点的症候群,第5代毒株感染组死亡率达40%(2/5),第10代感染组症状明显减轻且无死亡,第125代毒株感染组基本无临床症状。这3个代次的毒株感染组于第3 d检测病毒血症呈阳性,第7～14 d到达高峰,第125代于21 d消失,较第5和10代毒株提前1 w。病毒感染后抗原检测主要分布于脾脏、扁桃体、淋巴结等组织,第5和10代毒株感染组脏器出现严重的病理损伤,第125代毒株感染组仅见轻微病理损伤。对3个代次毒株的ORF5、ORF6和ORF7测序显示,仅在ORF5出现了3个氨基酸位点突变,第29位:第5、10代为缬氨酸→第125代为丙氨酸;第32位:第5、125代为丝氨酸,第10代为甘氨酸;第196位:第5、10代为谷氨酰胺→第125代为精氨酸。研究表明,低代次毒株能够完全复制出典型的"猪高热综合征",而高代次毒株无明显临床症状,证明该毒株经细胞传代后毒力下降。鉴于高代次毒株感染动物仍能够引起毒血症和持续感染,表明其仍具一定毒力,作为疫苗种毒需要进一步毒力弱化。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒传代毒株毒力比较

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