检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张名岳张可心韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

本试验应用RT-PCR方法,从鹅的脾脏、骨髓和法氏囊等组织器官中扩增到3个新的鹅AvBDs基因。将其推导的氨基酸序列与其他β-防御素序列分析比较,结果显示这3个AvBDs基因分别为鹅β-防御素1（AvBD1）、鹅β-防御素3（AvBD3）和鹅β-防御素6... 详细信息

本试验应用RT-PCR方法,从鹅的脾脏、骨髓和法氏囊等组织器官中扩增到3个新的鹅AvBDs基因。将其推导的氨基酸序列与其他β-防御素序列分析比较,结果显示这3个AvBDs基因分别为鹅β-防御素1（AvBD1）、鹅β-防御素3（AvBD3）和鹅β-防御素6（AvBD6）。经核苷酸序列测定分析结果表明,鹅AvBD1cDNA由198个碱基组成,编码65个氨基酸残基;鹅AvBD3 cDNA由182个碱基组成,编码60个氨基酸;鹅AvBD6 cDNA由204个碱基组成,编码67个氨基酸残基。鹅AvBD3和鹅AvBD6与对应的鸡AvBD3和鸡AvBD6基因的同源性为100%,鹅AvBD1与鸵鸟AvBD1基因的同源性最高,为70.7%。将鹅AvBD1、3、6基因分别亚克隆到表达载pGEX-6p-1上,构建3个重组表达质粒pGEX-Goose-AvBD1、3、6将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达,后进行蛋白纯化。SDS-PAGE电泳表明,3种重组蛋白分子量为31～32kDa,3个重组菌的表达产物均以包涵体的形式存在。同时,根据这3个多肽的成熟序列,分别合成3个合成多肽（sAvBD1、3、6）。选用4株革兰氏阳性菌（四联球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌）和8株革兰氏阴性菌（奇异变形杆菌、绿脓杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、兔波氏杆菌）做为检测菌,利用菌落计数法测定抗菌活性,结果显示标签蛋白GST对各种细菌没有抑制作用;重组和合成蛋白对所测的12株细菌均具有不同程度的抑菌活性。本试验还以多杀性巴氏杆菌（G）和金黄色葡萄球菌（G）作为试验菌,测定不同盐浓度对重组蛋白以及合成蛋白的影响,结果显示,随着盐浓度的增加,其抗菌活性明显减弱,而在高盐浓度条件下,该重组蛋白仍具有抗菌活性。另外,对该重组、合成鹅AvBD1、3、6蛋白进行了溶血活性的试验,发现鹅AvBDs溶血活性极低,与阴性对照相比,无显著差异（P>0.05）。为探讨这3个鹅AvBDs的抗感染机制,本试验采用肠炎沙门氏菌人工感染15日龄东北籽鹅,分别于感染后6h、24h、48h、72h采取鹅部分组织样品,主要是免疫组织和肠组织,并用荧光定量PCR方法检测这3个基因,部分炎性细胞因子,及其鹅Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）4的表达量。结果表明,受感染后,这3个AvBD基因在不同组织中的表达量变化较大,其中AvBD1基因在骨髓中的表达量显著提高,AvBD3基因在骨髓、脾和大肠中的表达量显著提高,AvBD6基因在免疫组织中的表达量都显著提高。以上结果说明了鹅AvBDs具有可诱导性。同时发现,TLR4,以及鹅白细胞介素（IL）-2,IL-18,γ干扰素（IFN-γ）基因的表达量也相应提高。本研究结果初步表明,受肠炎沙门氏菌感染后,鹅机体可能通过TLR4激活细胞信号转导途径,提供刺激分子,诱导由T细胞分化产生的两种鹅细胞因子（IL-2和IL-18）以及鹅干扰素基因（IFN-γ）和3种鹅AvBDs基因的表达,激活天然免疫反应,协同建立机体获得性免疫防御,共同抵御肠炎沙门氏菌对鹅机体的攻击。

关键词：鹅β-防御素抗菌活性 Toll样受体诱导表达信号转导

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5个新的鸭β-防御素的分离、鉴定及其抗病毒机制的初探

5个新的鸭β-防御素的分离、鉴定及其抗病毒机制的初探

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会

作者：张可心蔺丽娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

本研究采用RT-PCR方法,分别从鸭肺脏和骨髓组织中扩增到5个新的β-防御素基因,将测序结果与已发现的禽β-防御素(AvBD)和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树并进行同源性分析。结果显示,这5个基因分别是鸭AvBD1、鸭AvBD3、... 详细信息

本研究采用RT-PCR方法,分别从鸭肺脏和骨髓组织中扩增到5个新的β-防御素基因,将测序结果与已发现的禽β-防御素(AvBD)和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树并进行同源性分析。结果显示,这5个基因分别是鸭AvBD1、鸭AvBD3、鸭AvBD5、鸭AvBD6和鸭AvBD16。其中,鸭AvBD1 cDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸,与鸵鸟AvBD1氨基酸同源性最高为78%;鸭AvBD3 cDNA大小为182 bp,编码60个氨基酸残基,与鸡AvBD3氨基酸同源性高达100%;鸭AvBD5cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸残基,与鸡AvBD5氨基酸同源性达97%;鸭AvBD6 cDNA大小为204 bp,编码67个氨基酸残基,与鸡AvBD6氨基酸同源性高达100%;鸭AvBD16 cDNA大小为155bp,编码50个氨基酸,与鸡AvBD3同源性最高,为62%。将这5个鸭AvBD基因分别亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1,转化大肠杆菌BL21,进行IPTG诱导表达。将表达的蛋白进行纯化,同时根据其各自的氨其酸序列分别合成相应的5条多肽。以4种革兰氏阳性菌和8种革兰氏阴性菌为检测菌,采用菌落计数法测定重组和合成的鸭AvBD1、鸭AvBD3、鸭AvBD5、鸭AvBD6、鸭AvBD16和GST蛋白的抗菌活性,以及盐离子浓度对其抗菌活性的影响。并对这些蛋白的溶血活性进行测定。结果表明,与GST标签蛋白相比,重组和合成鸭AvBD1、鸭AvBD3、鸭AvBD5、鸭AvBD6和鸭AvBD16蛋白对12种细菌均有显著的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。在高盐浓度下,这些蛋白对四联球菌和多杀性巴氏杆菌的抗菌活性显著降低(P<0.05或P<0.01)。此外,这些蛋白溶血活性极低,与阴性对照相比,无显著差异(P>0.05)。本试验还测定了这5个重组蛋白的体外抗鸭肝炎病毒作用,结果表明,与阳性对照(病毒组)相比,这些重组蛋白显著延长了鸭胚的存活时间(P<0.05或P<0.01),相反地,GST无显著作用(P>0.05),表明这些重组蛋白具有抗鸭肝炎病毒的作用。为探讨这些鸭AvBDs基因在体内组织中的表达水平是否受鸭肝炎病毒诱导,及其抗病毒作用的信号转导机制。本研究以鸭肝炎病毒感染鸭,采用荧光定量PCR方法,分别检测了攻毒后24h、32h、48h、72h、96h鸭体内法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓、肝脏、肾脏和肺脏组织中这5个鸭AvBDs基因的表达量,以及几个细胞因子:鸭白介素-2(IL-2)、白介素-18(IL-18)和γ干扰素(IFN-γ),以及Tol1样受体7(TLR7)基因在除肾脏和肺脏外的上述组织中的表达量。结果显示,经鸭肝炎病毒诱导后,除鸭AvBD1、鸭AvBD3和IFN-γ在肝脏中没有被诱导表达外,其余基因在肝脏组织中均被诱导表达或表达量显著上调(P<0.05或P<0.01)。此外,在攻毒后的各个时间点,也检测到这些基因在其他组织中发生诱导表达或表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01)。同时,本试验结果还显示,这些防御素和细胞因子在组织中的表达量与TLR7的表达量呈正相关。结果提示,这些鸭AvBDs与细胞因子在体内的抗病毒作用可能受TLR7介导的信号转导通路调控。

关键词：鸭β-防御素抗菌活性抗病毒活性诱导表达信号转导

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腺病毒/日本脑炎病毒复制子嵌合载体的构建

腺病毒/日本脑炎病毒复制子嵌合载体的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李红梅孙元亓文宝孟其麟田大勇廖明仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室，广东广州 510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室，广东广州 510642

日本脑炎病毒(JEV)复制子被证实是一种有前景的DNA疫苗栽体，但因其不稳定和递送效率低使得免疫效力不理想。本研究的目的是利用人复制缺陷型腺病毒(AdV)这个高效的递送系统来递送JEV复制子从而构建一个嵌合载体。将之前构建的含有增强... 详细信息

日本脑炎病毒(JEV)复制子被证实是一种有前景的DNA疫苗栽体，但因其不稳定和递送效率低使得免疫效力不理想。本研究的目的是利用人复制缺陷型腺病毒(AdV)这个高效的递送系统来递送JEV复制子从而构建一个嵌合载体。将之前构建的含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的J1三V复制子插入到经过改造后带有SwaI位点的的pShuttle-CMV载体中，再将来自pCI载体的嵌合内含子插入JEV复制子中，得到转移载体DSh-JEV-In-EGFP，经SwaI线形化后转化BJ5183感受态细胞，将所得重组腺粒经PacI线形化后转染HEK293细胞。传代直至出现细胞病变，得到含有表达EGFP的JEV复制子的重组腺病毒，命名为rAdV-JEV-In-EGFP。结果表明，pSh-JEV-In-EGFP在细菌中传20代仍然保持稳定，EGFP蛋白在rAdV-JEV—In—EGFP感染的HEK293细胞中稳定、高效地表达。腺病毒／日本脑炎病毒复制子嵌合载体有望用于开发能同时预防日本脑炎和其它传染性疾病的二价疫苗。

关键词：日本脑炎病毒复制子腺病毒嵌合载体内含子稳定性

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种鸡禽肺病毒感染的血清学调查

种鸡禽肺病毒感染的血清学调查

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第三届(2012)中国白羽肉鸡产业发展大会暨第二届全球肉鸡产业论坛

作者：贠炳岭 YUN Bing-ling LIU Zai-si 刘在斯 WU Guan 吴关 LI Jiukuan 李久宽 QIN Li-tin 秦立廷 QI Xiao-le 祁小乐 WANG Yong-qiang 王永强 GAO Hong-lei 高宏雷高玉龙 GAO Yu-long WANG Xiao-mei 王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 Division of Avian Infectious Diseases State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Vete

禽肺病毒(Avian pneumovirus,APV)感染火鸡称为火鸡支气管炎(TRT),能够感染火鸡上呼吸道,并继发细菌感染。除感染火鸡以外,APV与鸡的肿头综合征(SHS)有关,能够引起蛋鸡产蛋量短期下降和轻微呼吸道症状。许多国家对该病毒都有报道。为明... 详细信息

禽肺病毒(Avian pneumovirus,APV)感染火鸡称为火鸡支气管炎(TRT),能够感染火鸡上呼吸道,并继发细菌感染。除感染火鸡以外,APV与鸡的肿头综合征(SHS)有关,能够引起蛋鸡产蛋量短期下降和轻微呼吸道症状。许多国家对该病毒都有报道。为明确该病对中国家禽的影响,收集2011年-2012年黑龙江、吉林、河北、山东、湖北等地区种鸡群的血清。通过禽肺病毒抗体检测,发现种鸡群中普遍存在禽肺病毒感染,多个鸡群血清阳性率达到100％。

关键词：禽肺病毒抗体检测血清学流行病学调查

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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

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第三届(2012)中国白羽肉鸡产业发展大会暨第二届全球肉鸡产业论坛

作者：贠炳岭 YUN Bing-ling LIU Wen 刘文 LI De-long 李德龙 QIN Li-ting 秦立廷 L1U Zai-si 刘在斯 WU Guan 吴关 QI Xiao-le 祁小乐 WANG Yong-qiang 王永强 GAO Hong-lei 高宏雷高玉龙 GAO Yu-long WANG Xiao-mei 王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 Division of Avian Infectious Diseases State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Vete

本文为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法.该方法对p27的最小检出量... 详细信息

本文为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法.该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML,且与禽类常见的病毒(IBV,MDV,ILTV等)无交叉反应.动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12天后有效检测泄殖腔分泌物中的ALV.利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法符合率分别为96.5％和93.8％.结果表明,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具.

关键词：禽白血病病毒早期诊断抗体检测双抗体夹心法

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新城疫疫苗的研究进展

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现代农业科技 2012年第2期 325-327页

作者：杨煦刘玉芬刘怀然哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150025 东北农业大学农业生物功能基因重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

综述了常规疫苗和基因工程疫苗2种类型新城疫疫苗的研究进展,分析新城疫疫苗的发展方向,以促进新城疫疫苗的研究。

关键词：新城疫病毒疫苗研究进展

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猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白与感染细胞核磷蛋白的共定位分析

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微生物学报 2011年第5期51卷 643-647页

作者：吕茂杰陈建飞时洪艳陈小金范秀萍申识川冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

【目的】阐明猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白与病毒感染细胞核仁成分B23.1蛋白的共定位特征。【方法】分别参照GenBank中PEDV CV777株的N基因序列(AF353511)和编码人细胞核仁蛋白B23.1基因序列(BC050628.1),设计、合成扩增N基因和B2... 详细信息

【目的】阐明猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白与病毒感染细胞核仁成分B23.1蛋白的共定位特征。【方法】分别参照GenBank中PEDV CV777株的N基因序列(AF353511)和编码人细胞核仁蛋白B23.1基因序列(BC050628.1),设计、合成扩增N基因和B23.1基因的引物,利用RT-PCR技术扩增了N基因和Vero E6细胞的B23.1基因的cDNA,分别克隆到真核表达载体pAcGFP1-C1和pDsRed2-N1,获得重组质粒pAcGFP1-C1/N和pDsRed2-N1/B23.1,共转染Vero E6细胞。【结果】Western blots分析表明这些融合蛋白在转染的Vero E6细胞中表达;共聚焦显微镜技术分析表明在共转染Vero E6细胞中猪流行性腹泻病毒N蛋白与Vero E6细胞核磷蛋白B23.1发生共定位。【结论】为进一步鉴定PEDV N蛋白中核仁定位信号和N蛋白核仁定位机制提供可靠依据。

关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白核磷蛋白B23.1 共定位

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR变异株第125代的毒力试验

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中国兽医科学 2011年第2期41卷 152-158页

作者：危艳武刘长明范培虎吴洪丽温士刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

从临床病例中分离到1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株HBR,经细胞传代和蚀斑克隆获得了1株增殖性能稳定的传代毒株。为了检测该毒株在Marc-145细胞传代过程中毒力的变化,用PRRSV-HBR株第125代培养物(毒价为107.5 TCID50/... 详细信息

从临床病例中分离到1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株HBR,经细胞传代和蚀斑克隆获得了1株增殖性能稳定的传代毒株。为了检测该毒株在Marc-145细胞传代过程中毒力的变化,用PRRSV-HBR株第125代培养物(毒价为107.5 TCID50/mL)经肌肉注射和滴鼻途径接种18头35日龄PRRSV抗体阴性猪,同时设未接种对照组。结果试验猪未出现明显的临床症状。用RT-PCR法检测试验猪血清,从第3天开始出现阳性,第7～14天达到高峰,第28天后转为阴性。对同一时间迫杀的试验猪检测各脏器组织中的病毒抗原分布情况,结果表明,感染后第7～14天试验猪多数脏器呈阳性反应,第21～42天病毒集中在脾、腹股沟淋巴结、颌下淋巴结等组织。病理学观察发现,第7～14天试验猪淋巴结及肺出现轻度病变。动物感染试验表明,尽管试验猪未显示明显的临床症状,但从病毒血症、病毒体内分布、病理变化等方面看,该毒株仍然具有一定的毒力,用于弱毒疫苗的研制还有待进一步驯化致弱。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株细胞传代毒力试验

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猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒混合感染的检测及TTV遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 6-10页

作者：刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨150001

为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,本研究采用PCR方法对采自14个省280份病料样品进行检测,结果显示,TTV1和TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1与TTV2混合感染率为18.2%;PCV1和PCV2阳性率分别为41... 详细信息

为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,本研究采用PCR方法对采自14个省280份病料样品进行检测,结果显示,TTV1和TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1与TTV2混合感染率为18.2%;PCV1和PCV2阳性率分别为41.1%和37.5%,PCV1与PCV2混合感染率为19.6%;PCV2阳性样品中TTV1和TTV2混合感染率达75.0%。此外,对2株TTV1基因组进行测序,与GenBank中登录的6个TTV1序列比对,相似性结果为67.3%～95.1%;对4株TTV2基因组测序,与GenBank登录的4条TTV2序列比对,相似性为84.7%～90.4%;将TTV1与TTV2进行序列比对,相似性仅为44.0%。TTV1和TTV2基因高变区分别位于520 nt～2 594 nt和720 nt～2 170 nt;TTV1基因保守区位于1 nt～520 nt和2 595 nt～2 800 nt;而TTV2基因保守区位于1 nt～719 nt和2 171 nt～2 800 nt。以上结果表明,我国猪群中存在TTV与PCV2的混合感染,并且两种病毒混合感染引起的相关疾病可能存在协同致病性;TTV1和TTV2基因型差异较大,具有遗传变异多样性的特点。

关键词：猪输血传播病毒猪圆环病毒混合感染遗传变异分析

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禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定

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病毒学报 2011年第4期27卷 353-357页

作者：孙美玉秦立廷高玉龙祁小乐高宏雷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞... 详细信息

本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)σC基因的杆状病毒,感染sf9细胞获得表达重组蛋白。首先,将ARVσC基因克隆至pFastBacHTA载体,构建重组供体载体pFσC,将其转化大肠杆菌DHl0Bac感受态细胞,使σC基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidσC。通过脂质体介导将其转染到sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rBacσC。通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:σC蛋白在重组杆状病毒rBacσC感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达,分子质量约为37kD,表达的σC蛋白具有良好的反应活性。

关键词：禽呼肠孤病毒 σC基因 sf9细胞杆状病毒

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