检索结果-内蒙古大学图书馆

中关村全球农业生物技术创新论坛

作者：张志榜陈建飞时洪艳杨斌石达陈小金冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特 010018

为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白单克隆抗体(MAb)，本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BABL/c小鼠：以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原，采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，通过间接ELISA进行筛选，得到一株稳... 详细信息

为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白单克隆抗体(MAb)，本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BABL/c小鼠：以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原，采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，通过间接ELISA进行筛选，得到一株稳定分泌抗M蛋白MAb。MAb亚类鉴定为IgG2b型，轻链为k链，杂交瘤细胞培养上清和诱导的小鼠腹水抗体效价分别为1：3000和1：(2×105)。Western blot验证明该MAb能够识别重组及天然的PEDVM蛋白。IFA试验表明该MAb能够与PEDV感染的Veto E6细胞产生特异性免疫荧光。

关键词：猪流行性腹泻病毒跨膜蛋白原核表达单克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用的研究

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用的研究

引用

第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛

作者：张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨 150030

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 c... 详细信息

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp，编码66个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基，分别在分子内形成Cys1-Cys5，Cys2-Cys4，Cys3-Cys6共3对二硫键，与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97％。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后，通过菌落计数法测定其体外抗菌活性，盐离子浓度对其抗菌活性的影响，以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 ku，具有良好的抗菌活性，对11种细菌均有不同程度的抑制作用，高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外，该重组蛋白对鸭血红细胞无明显溶血活性。

关键词：鸭β-防御素重组蛋白分离鉴定生物学作用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用

引用

中国林牧渔业经济学会饲料经济专业委员会第八届学术交流大会

作者：张可心蔺丽娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201bp，编码66个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基，分别在分子内形成Cys1-Cys5，Cys2-Cys4，Cys3-Cys6共3对二硫键，与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97％。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后，通过菌落计数法测定其体外抗菌活性，盐离子浓度对其抗菌活性的影响，以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 ku，具有良好的抗菌活性，对11种细菌均有不同程度的抑制作用，高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外，该重组蛋白对红细胞溶血活性极低。

关键词：鸭β-防御素5基因生物学特性抗菌活性重组蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

禽网状内皮组织增生病诊断与防制研究进展

引用

畜牧兽医科技信息 2011年第5期27卷 12-13页

作者：吴俊铭任晓峰邓小芸王笑梅东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江科技职业学院双城150111

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,鸡群中REV流行比较严重;REV与马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和J亚... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,鸡群中REV流行比较严重;REV与马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus,ALV-J)等几种免疫抑制性病毒的混合感染也比较普遍。鉴于REV正越来越受到重视。本文就RE的诊断和综合防制作一综述。

关键词：禽网状内皮组织增生病(RE) 诊断防制

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定

引用

中国农业科学 2010年第7期43卷 1480-1486页

作者：郭龙军陆月华黄立平危艳武刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室

【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原,其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,起保护性抗原作用,对其进行抗原表位鉴定十分必要。【方法】本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免... 详细信息

【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原,其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,起保护性抗原作用,对其进行抗原表位鉴定十分必要。【方法】本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免疫原制备5株单克隆抗体,通过原核表达系统对ORF2基因进行了截短表达,先行对Cap蛋白抗原表位进行宽幅定位,然后利用合成多肽对Cap抗原表位做精确扫描定位。【结果】5株单抗中有4株针对同一抗原表位,坐落在Cap蛋白N末端核定位信号区,经多肽扫描证实,核心序列为26RPWLVHPRHRY36;另1株单抗(1D2)仅与重组Cap蛋白产生免疫活性反应,对4个分段截短表达的Cap蛋白无免疫活性反应,鉴于该单抗具有中和病毒活性,针对的可能是构象表位。【结论】本研究首次鉴定出位于Cap蛋白核定位信号区的一个抗原表位,为以后Cap蛋白功能及核定位机理的研究奠定基础。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白抗原表位多肽扫描核定位信号

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪瘟病毒野毒株与疫苗株双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

引用

中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 854-857页

作者：王伟符芳陈欣李雪松李海忠李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSF... 详细信息

为建立猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗(C株)与野毒株的快速鉴别检测方法,本研究根据GenBank登录的CSFV C株与野毒株的E2基因序列差异,设计2对特异性引物,建立了同时检测C株与野毒株的双重SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。应用该方法对CSFV野毒和疫苗株的最低检出量为10拷贝;检测牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型4种病毒均呈阴性;批内、批间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法检测从黑龙江省各地区猪场采集的600份样品,结果表明野毒株的阳性率为30.5%。该方法可应用于CSFV野毒株和C株的鉴别检测。

关键词： SYBRGreenⅠ实时荧光PCR 猪瘟病毒野毒株 C株

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

引用

中国兽医科学 2010年第2期40卷 174-179页

作者：陈小金陈建飞时洪艳张志榜冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中登录的A群猪轮状病毒(PoRV)代表株OSU毒株序列,针对VP7基因设计了1对特异性引物,将150bp目的片段与pMD18-T载体连接构建标准品,建立了检测A群PoRV的SYBR GreenⅠreal-timePCR方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行... 详细信息

根据GenBank中登录的A群猪轮状病毒(PoRV)代表株OSU毒株序列,针对VP7基因设计了1对特异性引物,将150bp目的片段与pMD18-T载体连接构建标准品,建立了检测A群PoRV的SYBR GreenⅠreal-timePCR方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了评价。结果显示,该方法在1.3×108copies/μL～1.3×102copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.999;最低检测限为1.3×101copies/μL;用该方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪病毒性腹泻病毒均为阴性;批内及批间变异系数均低于2%。表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好。用该方法抽检58份疑似病例的腹泻病料,结果检出53份阳性,同时用普通RT-PCR和快速检测试剂盒对这些病料进行检测,结果分别检出42份和32份阳性。用这3种方法对11例已知阳性的临床粪便样品进行检测,结果建立的检测方法与其他两种方法的符合率为100%。用该方法检测PoRV细胞培养物中的病毒载量为1.0×105copies/μL。结果表明,建立的检测方法为PoRV的早期诊断、分子流行病学调查以及疫苗质量的监测等提供了新的快速检测技术。

关键词：猪轮状病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达猪瘟病毒E2蛋白的三种重组腺病毒在兔体上的免疫效力比较

引用

中国兽医科学 2010年第10期40卷 1028-1032页

作者：孙元李宏宇张兴娟李伟杰梁冰冰李娜仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了筛选1株免疫效果好的候选猪瘟疫苗,在家兔模型上对表达猪瘟病毒E2基因的3种重组腺病毒(rAdV-E2、rAdV-optiE2和rAdV-E2UL49)进行了免疫效力评价,从抗体、攻毒后产生定型热反应以及兔脾中病毒载量等几个方面进行了比较。结果显示,rAd... 详细信息

为了筛选1株免疫效果好的候选猪瘟疫苗,在家兔模型上对表达猪瘟病毒E2基因的3种重组腺病毒(rAdV-E2、rAdV-optiE2和rAdV-E2UL49)进行了免疫效力评价,从抗体、攻毒后产生定型热反应以及兔脾中病毒载量等几个方面进行了比较。结果显示,rAdV-E2UL49免疫组(n=5)在免疫后第2周,3只家兔产生了特异性的猪瘟抗体,免疫后第4周,所有免疫家兔的抗体阻断率均达到了70%;相比之下,rAdV-E2和rAdV-optiE2免疫组(n=5)家兔在免疫后第4周,只有个别家兔检测到了猪瘟特异性抗体。用猪瘟弱毒疫苗(C株)攻毒后,rAdV-E2UL49免疫组家兔均未出现定型热反应,在其脾中也未检测到C株病毒RNA,其免疫效果接近于C株;rAdV-E2和rAdV-optiE2免疫组各有3只家兔出现了定型热反应,在个别兔的脾中检测到了病毒RNA。结果表明,伪狂犬病病毒UL49基因编码的VP22蛋白可以增强重组腺病毒的免疫原性,rAdV-E2UL49有望成为一株有潜力的猪瘟疫苗。

关键词：猪瘟病毒重组腺病毒免疫效力比较家兔

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1R株全基因组序列测定及遗传变异分析

引用

中国预防兽医学报 2010年第7期32卷 512-516页

作者：石文达刘永刚王洪峰王淑杰马平徐敏武佳斌蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪繁殖与呼吸综合征的弱毒(PRRSV)株在基因组水平上的变异和分子遗传特征,本研究对致弱毒株CH-1R株进行了全基因组序列的测定。结果表明,CH-1R株基因组序列全长15424nt,具有典型的动脉炎病毒基因组结构。通过与亲本株CH-1a株序列... 详细信息

为了解猪繁殖与呼吸综合征的弱毒(PRRSV)株在基因组水平上的变异和分子遗传特征,本研究对致弱毒株CH-1R株进行了全基因组序列的测定。结果表明,CH-1R株基因组序列全长15424nt,具有典型的动脉炎病毒基因组结构。通过与亲本株CH-1a株序列进行比对,发现其基因组内碱基的缺失和突变主要分布在ORF1a基因的第2191位～2193位、ORF5基因的第439位、ORF6基因的第49位和ORF7基因的第28位和第139位。其中PRRSVCH-1R株的Nsp2蛋白和结构蛋白的变异相对较大,尤其是Nsp2蛋白的变异,同CH-la株相比,CH-1R株的Nsp2蛋白存在多处核苷酸的突变,其中包括连续3个核苷酸发生缺失;由结构蛋白基因推导的氨基酸序列共有17处变异,在各结构蛋白中以GP3和GP5蛋白变异较大,而高度保守的M蛋白和N蛋白,同样发生了变异,由此预测了Nsp2蛋白的R631E、GP5蛋白的L146Q、M蛋白的Q16L和N蛋白的K46N处毒力相关的氨基酸位点,推测其在毒株致弱过程中起到了重要的作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

引用

中国兽医学报 2010年第4期30卷 444-448页

作者：危艳武刘长明张朝霞黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株Nsp2基因序列设计1对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了1种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在10^1-10^6拷贝/μL范... 详细信息

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株Nsp2基因序列设计1对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了1种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在10^1-10^6拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.999 8,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0%。用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7-10 d达到高峰,其病毒核酸载量能达到10^6拷贝/μL。试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7-11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性。对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝、脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在。试验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株荧光定量RT-PCR 体内分布规律

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：