检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2009年第9期39卷 779-785页

作者：黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%... 详细信息

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%。另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%。表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重。

关键词：猪圆环病毒2型中和抗体单克隆抗体阻断ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GD3株的分离鉴定及其分子特征

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中国预防兽医学报 2009年第1期31卷 28-33页

作者：马平蔡雪辉刘永刚石文达王淑杰王洪峰李成君张琪中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3... 详细信息

2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3株的6条基因大片段,扩增产物克隆于pMD18-T载体鉴定后测序,同时应用RACE技术对GD3株的5'末端进行扩增和测序。结果表明GD3株基因组全长15425nt,包含个9开放阅读框,5'UTR长189nt,3'UTR长150nt。序列分析结果表明,GD3株在分子遗传演化上介于PRRSV变异毒株(HuN4株、JXA1株)和CH-1a之间,与HuN4和JXA1之间的相似性为97.1%和97.2%;与CH-1a的核苷酸相似性为94.9%。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定

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猪流行性腹泻病毒N蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析

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畜牧兽医学报 2009年第5期40卷 691-696页

作者：吕茂杰冯力时洪艳陈建飞孙东波申识川崔小辰王承宝范秀萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150030

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中... 详细信息

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经过酶切鉴定和测序鉴定,将构建的重组质粒命名为pcD-NA3.1(+)-N,且未发现碱基的缺失和插入。用脂质体法将pcDNA3.1(+)-N转染Vero E6细胞,在48 h后,以针对猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白的鼠源`多抗血清进行Western blot、免疫荧光检测,并运用共聚焦显微镜分析N蛋白的亚细胞定位。结果表明N基因能在真核细胞Vero E6中正确表达,共聚焦分析结果表明N蛋白在细胞质和细胞核中定位。

关键词：猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白真核表达亚细胞定位

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冠状病毒核衣壳蛋白细胞核定位特征的研究进展

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中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 577-580页

作者：吕茂杰冯力陈建飞时洪艳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

冠状病毒属于尼多病毒目（Nidovirales），冠状病毒科（Coronaviridae），冠状病毒属（Coronavirus）成员，为单股正链RNA病毒，根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群：第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenterit... 详细信息

冠状病毒属于尼多病毒目（Nidovirales），冠状病毒科（Coronaviridae），冠状病毒属（Coronavirus）成员，为单股正链RNA病毒，根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群：第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、

关键词：冠状病毒属细胞核定位核衣壳蛋白特征猪传染性胃肠炎病毒正链RNA病毒冠状病毒科 virus

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猪细小病毒灭活疫苗安全性试验及佐剂的筛选

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中国预防兽医学报 2009年第6期31卷 462-465页

作者：张超范崔尚金苗岚飞陈长木中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究以猪细小病毒(PPV)现地分离株(BQ)第30代细胞培养毒株作为灭活疫苗研究用种毒,通过优化病毒增殖条件和培养方法,获得较高滴度的病毒传代细胞培养物用于PPV灭活疫苗的制备。PPV细胞培养毒株分别用甲醛和β-丙内酯进行灭活,对2种灭... 详细信息

本研究以猪细小病毒(PPV)现地分离株(BQ)第30代细胞培养毒株作为灭活疫苗研究用种毒,通过优化病毒增殖条件和培养方法,获得较高滴度的病毒传代细胞培养物用于PPV灭活疫苗的制备。PPV细胞培养毒株分别用甲醛和β-丙内酯进行灭活,对2种灭活剂灭活的病毒液分别用国产铝胶佐剂、进口矿物质白油佐剂以及法国赛比克公司的MONTANIDETMISA 206、ISA15AVG、IMS251CVG 3种佐剂制备10种灭活疫苗,然后分别进行10日龄乳鼠、60日龄仔猪、不同妊娠阶段母猪的安全性试验及成年豚鼠的免疫效果对比试验。通过比较不同灭活疫苗的安全性和对成年豚鼠的免疫效果,初步确认甲醛灭活的病毒液与佐剂ISA15AVG的组合为PPV灭活疫苗的最佳灭活剂和佐剂组合。

关键词：猪细小病毒灭活疫苗生产工艺安全性

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我国部分地区猪圆环病毒2型分离株的遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2009年第11期31卷 856-859页

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株遗传变异情况,本研究对本实验室分离到的19株PCV2分离株通过病毒全基因组克隆和测序分析,将其分为2个大基因群和3个亚群,其基因组分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.5%。以1767n... 详细信息

为了解我国猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株遗传变异情况,本研究对本实验室分离到的19株PCV2分离株通过病毒全基因组克隆和测序分析,将其分为2个大基因群和3个亚群,其基因组分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.5%。以1767nt毒株为基准,其基因组第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766nt毒株;第1040位有1个碱基插入后突变成1768nt毒株。对19株病毒ORF2编码的Cap蛋白分析发现,有4株病毒编码基因发生了突变,出现了705nt和708nt两种突变型,使ORF2编码的Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸增加。同时,本实验选用AccⅠ和FbaⅠ内切酶对19株病毒基因组PCR产物进行了限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,其结果可作为流行毒株分型鉴别依据。

关键词：猪圆环病毒2型流行毒株遗传变异限制性片段长度多态性

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抗猪圆环病毒2型Cap蛋白中和性单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第2期31卷 132-136页

作者：黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华郭龙军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

以纯化的杆状病毒表达的重组猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白(PCV2-rCap)免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞瘤杂交技术获得了5株稳定分泌抗PCV2-rCap蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为1D2、2E8、3A10、5F2和6F10。这5株杂交瘤细胞诱导同品系小鼠产... 详细信息

以纯化的杆状病毒表达的重组猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白(PCV2-rCap)免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞瘤杂交技术获得了5株稳定分泌抗PCV2-rCap蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为1D2、2E8、3A10、5F2和6F10。这5株杂交瘤细胞诱导同品系小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶2048000、1∶512000、1∶1024000、1∶512000、1∶1024000;其中1D2、2E8、5F2和6F10单抗亚类为IgG2a,仅3A10为IgG1;2E8、3A10、5F2和6F10单抗轻链为λ型,仅1D2轻链为κ型。Western blot结果显示,这5株单抗中2E8、3A10、5F2和6F10可与自然PCV2-Cap发生反应,而1D2无反应。IPMA和抗原捕获ELISA结果表明,1D2单抗可与PCV2病毒蛋白发生反应,而与PCV1无交叉反应;病毒中和试验证实,1D2单抗具有中和活性,是一株针对PCV2-Cap蛋白中和表位的单抗。这些单抗的制备为PCV2抗原表位分析及分子诊断提供了技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型重组Cap蛋白中和活性单克隆抗体

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纹身法免疫增强DNA疫苗免疫效果的评价

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畜牧兽医学报 2009年第7期40卷 1048-1053页

作者：曾伟伟石星明黄婷婷王玫高宏博孙妍李继松王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

为评价不同DNA免疫方法(皮内穿刺、肌肉注射)对DNA疫苗免疫效果的影响,将自行构建的表达传染性喉气管炎病毒gJ基因的真核表达载体pCDNA3.1-gJ和表达新城疫病毒F基因的真核表达载体pVAX1-F通过普通注射器裸DNA肌肉注射和纹身器皮下裸DNA... 详细信息

为评价不同DNA免疫方法(皮内穿刺、肌肉注射)对DNA疫苗免疫效果的影响,将自行构建的表达传染性喉气管炎病毒gJ基因的真核表达载体pCDNA3.1-gJ和表达新城疫病毒F基因的真核表达载体pVAX1-F通过普通注射器裸DNA肌肉注射和纹身器皮下裸DNA纹身法投递,分别免疫BALB/c小鼠和SPF鸡,三免后2周用NDV强毒株进行攻毒。采集免疫后小鼠和鸡的血清,ELISA法检测抗体水平,并计算鸡攻毒后保护率,来评价这2种免疫途径的免疫效果。结果表明,纹身法皮下投递诱导的特异性免疫应答抗体水平显著高于DNA肌肉注射的抗体水平,而且通过纹身法投递质粒二免后产生的抗体水平显著高于肌肉注射三免后的抗体水平。此外,通过纹身法投递50μg质粒产生的抗体水平高于同一时期通过肌肉注射100μg质粒产生的抗体水平;攻毒试验表明,和肌肉注射免疫相比,纹身法皮肤免疫的免疫保护效果更佳。以上结果表明,纹身法皮下投递DNA疫苗,能诱导产生更强大的免疫应答,而且还是一种经济实用的方法,它将满足实验室条件下产生更快更强大免疫应答的需要,也为今后DNA疫苗免疫方法和途径研究提供新的思路。

关键词： DNA免疫纹身法 DNA疫苗免疫途径

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鸡马立克氏病病毒流行毒株高代次细胞毒株Meq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因变异分析

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病毒学报 2009年第5期25卷 368-375页

作者：刘爱玲刘长军张艳萍李晶梅施维松闫福海张锋程志伟中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

根据鸡马立克氏病病毒（Marek′s disease virus,MDV）GA株的全基因组序列,设计合成了用于扩增MDVMeq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因的引物,分别扩增4株MDV流行强毒株的高代次细胞毒株（L-SYp85C、L-MSp75C、L-CZp75C、L-ZYp75C）及相应亲本毒株（L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY）、MDV强毒J-1株、814疫苗株等10个毒株的Meq、RLORF4、RLORF12和132bpr基因。经克隆测序后,分析4个高代次细胞毒株中相应基因的变异,并与MDV强毒J-1株、814疫苗株及GenBank中已发表MDV毒株的相应序列进行比较。序列比对分析发现,L-CZp75C株Meq基因的第625位存在碱基C插入突变;L-ZYp75C株Meq基因第529位存在碱基C插入,且第602位缺失碱基T,从而致使Meq基因推导的相应氨基酸序列在第177~200位发生移码突变。L-SYp85C株RLORF4基因在第215~265位缺失51bp,致使该基因推导的氨基酸序列相应缺失17个氨基酸残基。分析RLORF12基因序列,发现L-MSp75C株在第67位存在碱基T缺失,814疫苗株在第18~86位缺失69 bp,缺失位置均位于复制起点（Origin of replication,,Ori）内;而L-ZYp75C毒株在RLORF12基因第168~174位存在独特的TGTTGGG碱基缺失。4个细胞高代次毒株的132 bpr基因的扩增结果表明,该基因在病毒基因组中的拷贝数明显增加,可达到10个拷贝以上。上述分析结果提示,4株MDV流行强毒株经体外连续传代后,MDV致瘤相关基因Meq、RLORF4、RLORF12和132bpr基因等发生了缺失突变或插入突变。

关键词：马立克氏病病毒 Meq RLORF4 RLORF12 132bpr

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优化的复合自动诱导培养基(CAI-4)对外源蛋白在大肠杆菌中表达的影响

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微生物学报 2009年第1期49卷 128-134页

作者：徐灵龙石星明王云峰孙妍王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 北京爱德士元亨生物科技有限公司北京101300

[目的]原核表达系统是目前最为广泛使用的一种外源蛋白表达系统。在利用原核表达系统表达目的蛋白的过程中，可溶性外源蛋白的产量是决定成本和效率的决定性因素。[方法]本项研究中利用本实验室构建的7种不同的重组质粒（p-1、p-2、p-3... 详细信息

[目的]原核表达系统是目前最为广泛使用的一种外源蛋白表达系统。在利用原核表达系统表达目的蛋白的过程中，可溶性外源蛋白的产量是决定成本和效率的决定性因素。[方法]本项研究中利用本实验室构建的7种不同的重组质粒（p-1、p-2、p-3、p-4、p-5、p-6、p-7），检测其在复合自动诱导培养基中的表达情况，评价哪一种培养基更适合于外源蛋白的表达，提高目的蛋白的产量。[结果]结果显示，这7种重组蛋白在复合自动诱导培养基的表达量是普通LB培养基的4-8倍；并在此基础上，对复合培养基的成份进行进一步优化，形成了一种优化培养基（改良培养基-4），P-1、P-2、P-3这3种融合蛋白在这种改良培养基中的表达量比优化前提高了至少2倍。

关键词：蛋白表达培养基自动诱导条件优化

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