检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第8期31卷 654-656页

作者：于丹韩宗玺邵昱昊李慧昕金鑫孔宪刚刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院吉林延边134000

为建立抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的单克隆抗体(MAb),利用浓缩的IBV致弱株CK/CH/LDL97ⅠF115病毒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经间接ELISA和有限稀释法,经筛选和克隆后获得了一株抗IBV N蛋白MAb的杂交瘤细胞系(2D2)。经鉴定,其MAb... 详细信息

为建立抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的单克隆抗体(MAb),利用浓缩的IBV致弱株CK/CH/LDL97ⅠF115病毒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经间接ELISA和有限稀释法,经筛选和克隆后获得了一株抗IBV N蛋白MAb的杂交瘤细胞系(2D2)。经鉴定,其MAb的重链为IgG1亚型,轻链为κ链。ELISA和western blot试验结果表明,所获得的这株2D2 MAb可特异性识别IBV N蛋白。2D2 MAb可与多种血清型IBV发生反应,表明该MAb识别的表位可能位于N蛋白的保守区域。为进一步鉴定IBV的表位及诊断试剂的研究奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒 N蛋白单克隆抗体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

正链RNA病毒感染性克隆的构建策略及影响因素

引用

东北农业大学学报 2009年第8期40卷 134-139页

作者：申识川冯力时洪艳陈建飞东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家兽医生物技术重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

利用全长cDNA构建感染性克隆是拯救RNA病毒的基础和关键,也是反向遗传技术的核心。文章综述了构建正链RNA病毒感染性克隆的基本思路和关键技术,总结了影响克隆感染性的因素,并对感染性克隆技术的应用做一简述。

关键词：正链RNA病毒感染性克隆构建影响因素

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基因修饰的鸡新城疫病毒HN基因DNA疫苗免疫效力评价

引用

畜牧兽医学报 2009年第10期40卷 1526-1531页

作者：石星明贺笋王玫杨桂花曾伟伟崔红玉童光志王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001 河北北方学院动物科技学院动物医学系张家口075131 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为了评价基因修饰对提高DNA疫苗免疫效果的影响,将NDV F48E9株HN基因进行密码子优化和信号肽替换,修饰后的基因命名为SoptiHN,将HN和SoptiHN基因分别克隆至pVAX 1和含CpG-ODN刺激序列的载体pVAX 1-CpG中,共获得pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN... 详细信息

为了评价基因修饰对提高DNA疫苗免疫效果的影响,将NDV F48E9株HN基因进行密码子优化和信号肽替换,修饰后的基因命名为SoptiHN,将HN和SoptiHN基因分别克隆至pVAX 1和含CpG-ODN刺激序列的载体pVAX 1-CpG中,共获得pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-HN和pVC-HN 4种质粒。将4种质粒股四头肌多点注射3周龄SPF鸡,每只鸡200μg,以PBS为非免疫对照;一免后3周以相同的剂量加强免疫,二免后2周以103EID50NDV的F48E9强毒株进行攻毒,计算发病率、死亡率以及排毒情况。试验期间每周采集血清进行HI抗体的检测,同时采集抗凝血分离外周血淋巴细胞,分析免疫后各试验组IFN-γ和IL-18的变化情况。结果表明,疫苗免疫1周后,所有免疫组均能产生抗NDV的HI抗体,pV-SoptiHN和pVC-SoptiHN组最高,与其他组差异显著;pVC-SoptiHN和pVC-HN质粒免疫组IFN-γ和IL-18表达水平要略高于pV-SoptiHN和pV-HN质粒免疫组。攻毒结果显示,pV-SoptiHN与pVC-SoptiHN免疫组的死亡保护率均为71%,排毒检出率均为25%,而pV-HN和pVC-HN免疫组的保护率均为50%,排毒检出率分别为50%和44%,pVAX1、pVAX1-CpG和PBS对照组攻毒后的死亡率均为100%,排毒检出率均为100%,pV-SoptiHN与pVC-SoptiHN免疫组的排毒时间与其他5组相比有所缩短。以上结果表明,修饰后的HN基因可以诱导鸡产生更强烈的免疫反应,获得更好的保护效率。

关键词：基因修饰 NDV DNA疫苗免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株VP1蛋白的原核表达及其反应原性

引用

中国兽医科学 2009年第10期39卷 847-851页

作者：申识川时洪艳陈建飞孙东波吕茂杰王承宝范秀萍陈小金冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

根据猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的基因组序列(GenBank登录号:DQ355222)设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了PTV的VP1基因片段,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET-VP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21... 详细信息

根据猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的基因组序列(GenBank登录号:DQ355222)设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了PTV的VP1基因片段,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET-VP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子质量为45 ku的融合蛋白,在1.0 mmol/L IPTG诱导6 h后,重组菌的表达效果最好,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的63.4%,表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。表达产物经Ni柱纯化后,薄层扫描显示,目的蛋白的纯度达到了97%。Western-blot结果显示,纯化后的VP1蛋白能与PTV Swine/CH/IMH/03株阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,表明,原核表达的VP1蛋白具有良好的反应原性。

关键词：猪捷申病毒 VP1基因克隆原核表达纯化免疫印迹

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达传染性支气管炎S1基因和IFN-γ基因重组鸡痘病毒安全性与最适免疫剂量分析

引用

畜牧兽医学报 2009年第5期40卷 712-716页

作者：石星明王云峰王玫兰德松任刚李继松曾伟伟孙妍刘胜旺童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001 东莞出入境检验检疫局东莞523071 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

对共表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因和II型干扰素基因的重组鸡痘病毒（rFPV-IFNγS1）冻干疫苗进行安全性和最适免疫剂量的研究。取冻干疫苗，加生理盐水恢复至冻干前体积，分别取0.1 mL经翅内侧无血管处皮下接种1周龄SPF鸡，接种剂量... 详细信息

对共表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因和II型干扰素基因的重组鸡痘病毒（rFPV-IFNγS1）冻干疫苗进行安全性和最适免疫剂量的研究。取冻干疫苗，加生理盐水恢复至冻干前体积，分别取0.1 mL经翅内侧无血管处皮下接种1周龄SPF鸡，接种剂量为1.0×10^5PFU，接种后3 d出现局部反应，5 d局部肿胀达到最大，接种鸡无其它全身反应，精神、食欲以及发育等均不受影响，说明重组病毒对实验鸡是安全的。将重组疫苗用生理盐水作倍比稀释后翅内侧无血管处皮下接种4周龄SPF鸡，接种剂量为1.0×10^1-1.0×10^4PFU，免疫后3周攻击传染性支气管炎病毒LX4株。结果表明，在接种剂量为1.0×10^2-1.0×10^4PFU的剂量范围内均可以使全部实验鸡产生局部反应，并对IBV的攻击形成保护，降低免疫鸡的发病率和死亡率，发病保护率达到73%以上；1.0×10^1PFU接种实验鸡后，仅有5/11的鸡出现局部反应，对IBV攻击的发病保护率为64%，与对照组差异不显著（P〉0.05）。以上结果说明，疫苗接种后的局部反应与重组疫苗的免疫效力之间具有相关性，根据疫苗生产使用实际情况确定传染性支气管炎重组鸡痘病毒疫苗的最适免疫剂量为10^3PFU。

关键词：传染性支气管炎重组鸡痘病毒 S1基因最适免疫剂量

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

不同宿主源NDV毒株对SPF鸡致病性研究

引用

中国预防兽医学报 2009年第2期31卷 99-103,109页

作者：刘怀然孙敏华葛鑫刘胜旺刘培欣孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为阐明不同宿主及不同基因型新城疫病毒(NDV)对SPF鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的基因Ⅶd亚型NDV6株,鸡源基因Ⅲ型和鸽源基因Ⅵb型毒株各1株,以及基因Ⅸ型强毒F48E9,共9株NDV毒株进行致病性试验。在对各毒株的EID50及主... 详细信息

为阐明不同宿主及不同基因型新城疫病毒(NDV)对SPF鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的基因Ⅶd亚型NDV6株,鸡源基因Ⅲ型和鸽源基因Ⅵb型毒株各1株,以及基因Ⅸ型强毒F48E9,共9株NDV毒株进行致病性试验。在对各毒株的EID50及主要致病指数MDT、ICPI测定基础之上,以相同剂量感染15日龄SPF鸡,观察临床症状及剖检病变,计算发病率和死亡率,并在攻毒后不同时间采集主要组织样品,以SYBR GreenI Real-timePCR检测病毒最早出现时间及病毒载量。结果表明,6株基因Ⅶd亚型NDV毒株导致SPF鸡100%发病,死亡率90%以上,属于高致病性毒株;基因Ⅲ、Ⅵb型毒株导致SPF鸡发病但不死亡,属于中等毒力毒株。Ⅶd亚型毒株与F48E9株攻毒后SPF鸡在病理变化、组织嗜性及病毒载量上没有显著差异。根据毒株的MDT、ICPI指数及攻毒鸡病程综合判断,Ⅶd亚型毒株在致病性上与F48E9株差异不显著。健康野鸟携带基因Ⅶd亚型高致病性NDV,在NDV的自然生态传播过程中起重要作用,提示应该加强对野鸟的流行病学监测及相关研究。

关键词：新城疫病毒基因型致病性病毒载量

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

O型FMDV VP1基因的表达鉴定及其多克隆抗体的制备

引用

中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 568-571页

作者：任宪刚薛飞朱远茂冯军科史鸿飞高欲燃中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1。重组质粒鉴定验证后,转化至大... 详细信息

为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1。重组质粒鉴定验证后,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果显示重组蛋白的分子量约为38ku,以包涵体的形式存在。Westernblot与间接ELISA结果显示重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应。进一步将纯化的重组蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶1600。本研究为FMDV的其他研究工作提供了基础材料。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因表达鉴定多克隆抗体制备

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

重组鸡β-防御素6基因的表达和生物学特性的研究

引用

中国预防兽医学报 2009年第6期31卷 476-480页

作者：韩宗玺廖文艳王瑞琴邵昱昊马得莹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030

从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因。经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204bp,编码68个氨基酸残基。根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树。发现鸡AvBD6氨基酸序... 详细信息

从鸡骨髓细胞中分离提取总RNA,经过RT-PCR扩增出鸡β-防御素-6(AvBD6)基因。经克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为204bp,编码68个氨基酸残基。根据已发现的禽β-防御素和鼠β-防御素-6的氨基酸序列构建系统进化树。发现鸡AvBD6氨基酸序列与鸡AvBD7氨基酸序列同源性最高,为62.7%。将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,进行原核表达。SDS-PAGE电泳表明,表达的重组鸡AvBD6融合蛋白分子量约为32ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定。结果表明,重组鸡AvBD6融合蛋白对多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌有较高抗菌活性,对大肠杆菌的抗菌活性较弱,对猪霍乱沙门氏菌无抗菌活性。重组鸡AvBD6蛋白对上述细菌的最小抑菌浓度范围为31.25μg/mL～250μg/mL。此外,重组鸡AvBD6蛋白对温度和酸碱度有较高的稳定性。

关键词：鸡β-防御素-6 遗传进化抗菌活性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

1型鸭肝炎病毒E53株和HP-1株全基因组序列分析

引用

中国兽医科学 2009年第12期39卷 1057-1061页

作者：陈晓丹张云王钰郭冬春李永锋王君伟中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院传染病研究室黑龙江哈尔滨150030

根据已发表的1型鸭肝炎病毒（DHV-1）基因组序列设计并合成引物,通过RT-PCR方法对DHV-1 E53株和HP-1株的基因组序列进行分段扩增并测序。BLAST分析确定为DHV-1型基因组序列,GenBank登录号分别为EF151313和EF151312。E53株与已发表的参... 详细信息

根据已发表的1型鸭肝炎病毒（DHV-1）基因组序列设计并合成引物,通过RT-PCR方法对DHV-1 E53株和HP-1株的基因组序列进行分段扩增并测序。BLAST分析确定为DHV-1型基因组序列,GenBank登录号分别为EF151313和EF151312。E53株与已发表的参考毒株的核苷酸同源性为94.6%~99.4% HP-1株与已发表的参考毒株的核苷酸同源性为94.4%~99.6%。系统进化树分析结果表明,E53株与北京BJ株进化关系最近 HP-1株与R85952株进化关系最近。

关键词： 1型鸭肝炎病毒全基因组序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪传染性萎缩性鼻炎流行特点、危害状况、诊断与防治净化

引用

猪业科学 2009年第6期26卷 22-28页

作者：崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

猪传染性萎缩性鼻炎(AR)是世界性分布的一种广泛流行的严重接触性上呼吸道传染病,临床以打喷嚏、鼻骨变形、鼻甲骨萎缩或消失以及鼻中隔弯曲等为特征。AR作为隐性疾病,临床上不表现明显的全身症状或死亡,但给养猪

关键词：猪传染性萎缩性鼻炎病变鼻甲骨呼吸道传染病多杀性巴氏杆菌多杀性巴氏德氏菌巴氏杆菌属支气管败血波氏杆菌

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：