检索结果-内蒙古大学图书馆

养猪 2009年第3期 65-68页

作者：苗岚飞胡守萍张超范张卓崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏... 详细信息

本研究旨在研究猪细小病毒分离株感染初孕母猪后母猪和胎猪的病毒组织分布和组织病理学变化情况。试验选用妊娠35d的初孕母猪接种PPV-BQ株第15代细胞毒,以接种RPMI1640的母猪作为对照。攻毒40d后剖杀,采集母猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结,胎猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和小肠,进行组织病毒载量测定和组织病理学检测。实时定量PCR检测结果显示,攻毒组母猪的心脏、脾脏、肺脏、肾脏和子宫内膜存在病毒复制,子宫内病毒含量最高;胎猪的心脏、脾脏、肺脏中存在病毒复制。对照组脏器中无病毒复制。病理切片结果显示,攻毒组母猪肺脏出现细支气管性肺炎,脾脏出现淋巴细胞减少,心脏、肝脏、肾脏、扁桃体、子宫内膜和腹部淋巴结未见明显的组织病理学变化;胎猪的脏器未见明显的病理损伤。对照组未发现组织病理学变化。

关键词：猪细小病毒病毒组织分布组织病理学变化

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雪龙黑牛卵巢存放不同温度及不同时间对卵母细胞成熟及囊胚发育的影响

雪龙黑牛卵巢存放不同温度及不同时间对卵母细胞成熟及囊胚发育的...

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第四届中国牛业发展大会

作者：许红喜邢雪森吴蒙王秀利李曦大连雪龙产业集团股份有限公司大连水产学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

将雪龙黑牛卵巢分别于38.5℃、32℃、4℃3个不同温度放置4h、8h、12h、24h、48h不同时间间隔的卵母细胞成熟率、卵裂率及囊胚发育率。结果显示,放置于不同温度下(38.5℃、32℃、4℃)4h后,卵裂率依次为74.3%、80.3%、73.5%,囊胚发育率为3... 详细信息

将雪龙黑牛卵巢分别于38.5℃、32℃、4℃3个不同温度放置4h、8h、12h、24h、48h不同时间间隔的卵母细胞成熟率、卵裂率及囊胚发育率。结果显示,放置于不同温度下(38.5℃、32℃、4℃)4h后,卵裂率依次为74.3%、80.3%、73.5%,囊胚发育率为30.8%、34.5%、30%;8h后,观察其卵裂率为50.9%、71.3%、71.2%,囊胚发育率为24.6%、33.7%、23.1%;12h后,其卵裂率为0、4%、69.5%,囊胚发育率为0、4%、20.7%;24h后,仅放置于4℃的卵母细胞仍然可以观察到生长,其卵裂率55.8%,囊胚发育率为20%;48h后,放置于4℃的卵母细胞的卵裂率为20%、囊胚发育率为0.8%。上述观察结果表明,雪龙黑牛卵巢在≤8h的运输途中可以存放于4℃～38.5℃,≥12h的运输时间,则仅能于4℃下存储,若≥48h,雪龙黑牛卵巢卵裂率及囊胚发育率极低,即停止发育。因此,本试验结果提示,雪龙黑牛卵巢的运输应尽量在4℃条件下进行,且运输时间≤48。

关键词：卵母细胞卵丘细胞复合体卵裂率囊胚发育率体外受精技术

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5种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其初步应用

5种重要猪病病毒基因芯片探针的建立及其初步应用

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：陈微晶符芳蔡雪辉田志军宋淑萍李曦黑龙江省八一农垦大学黑龙江大庆1631109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究将猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、2型猪圆环病毒(PCV-2)5种病毒核酸的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上，以5种细胞培养毒的核酸作为模板，进行不对称PCR扩增... 详细信息

本研究将猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、2型猪圆环病毒(PCV-2)5种病毒核酸的特异cDNA片段作为探针点制于氨基修饰的玻片上，以5种细胞培养毒的核酸作为模板，进行不对称PCR扩增，制备靶物，经绿色荧光染料Cy3标记后，分别与cDNA微阵列的芯片探针进行杂交。杂交信号经Genepix4000A扫描仪扫描。结果显示，芯片探针可以分别特异地与Cy3标记的5种特异靶物结合。应用本研究制备的基因芯片对100份现地采集的猪全血样品进行检测，其中，PRRSV阳性样品26份，PCV-2阳性样品47份，且PRRSV、PCV-2混合感染阳性样品17份，PPV阳性样品5份，PRV阳性样品2份，CS-FV检测阳性样品20份。结果表明，本研究设计并点制的cDNA芯片可以特异的检出5种病毒，具有明确的、潜在的诊断应用性。

关键词：猪病病毒病毒感染免疫学检验基因芯片探针

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TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

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检验检疫科学 2009年第5期19卷 17-20页

作者：白兴华原志伟李军民王亚文贺同欣冯力菏泽出入境检验检疫局山东菏泽274000 荣成出入境检验检疫局中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检... 详细信息

本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 TaqMan探针荧光定量RT-PCR

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不同启动子在昆虫杆状病毒表达系统中的活性分析

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生物工程学报 2008年第4期24卷 598-603页

作者：王煜高辉陈川赵和平李淼孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

为了比较不同启动子在杆状病毒/昆虫细胞中的活性,利用对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,wssv)的ie1启动子及其截短的mie1启动子、杆状病毒ETL启动子及其加长的mETL启动子以及杆状病毒多角体启动子P_(PH),构建了含有不同... 详细信息

为了比较不同启动子在杆状病毒/昆虫细胞中的活性,利用对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,wssv)的ie1启动子及其截短的mie1启动子、杆状病毒ETL启动子及其加长的mETL启动子以及杆状病毒多角体启动子P_(PH),构建了含有不同启动子控制下的EGFP报告基因的重组杆状病毒,分别感染Sf9昆虫细胞,利用流式细胞术检测报告基因的表达水平。结果表明,WSSV的ie1启动子和杆状病毒的mETL启动子在昆虫细胞sf9细胞中都具有较强而旱的启动子活性,能够控制报告基因早期高效表达,而P_(PH)在感染后期才表现较强活性。并且研究中发现,杆状病毒同源重复区(hr1)可以增强ETL启动子的活性。

关键词：重组杆状病毒启动子活性流式细胞术

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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析

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生物工程学报 2008年第10期24卷 1734-1739页

作者：孙元祁巧芬梁冰冰成丹李娜于墨洋王宇飞刘霓虹朱庆虎仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱... 详细信息

为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱毒疫苗株(C株)进行攻击,攻毒后3 d取其脾脏,用实时荧光定量RT-PCR检测C株病毒RNA。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010 TCID50/mL;外源基因可在其中得到稳定表达;rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体,免疫后5 w抗体达到峰值,攻毒后rAdV-E2接种兔和C株接种兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到C株病毒RNA,而野生型腺病毒接种兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测大量C株病毒RNA,其含量达到了103拷贝/μL以上。由此表明,rAdV-E2可望开发为猪瘟候选疫苗。

关键词：猪瘟病毒 E2基因重组腺病毒免疫原性家兔

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鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建

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生物工程学报 2008年第4期24卷 569-575页

作者：崔红玉王云峰石星明童光志兰德松何来仇华吉刘长军王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

为构建全基因组鸡马立克氏病病毒814株感染性细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC),首先通过构建表达Eco-gpt(xanthine-guanine phosphoribosyl transferase,XGPRT,gpt)的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1-3 kb)和带有细菌人工染色体的基本功能基因序列的鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11,将重组病毒转移载体与鸡马立克氏病病毒细胞总DNA共转染鸡胚成纤维细胞,在选择培养基中经过8轮加压筛选,获得并纯化重组病毒;将重组病毒细胞总DNA电转化大肠杆菌,筛选共获得38个BAC分子克隆化病毒,提取BAC-DNA转染鸡胚成纤维细胞以拯救重组病毒。结果表明,MDV-BAC2 DNA再次启动病毒感染,拯救了重组鸡马立克氏病病毒。成功构建了鸡马立克氏病病毒814株基因组全长感染性细菌人工染色体,为方便利用现代RED/ET基因重组系统对病毒进行反向遗传操作提供了技术平台;同时为研究鸡马立克氏病病毒的基因功能和开发新型马立克氏病疫苗奠定了基础。

关键词：鸡马立克氏病病毒细菌人工染色体分子克隆化病毒感染性分子克隆

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4株鸡马立克氏病病毒国内分离株Meq基因的克隆与序列分析

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病毒学报 2008年第2期24卷 117-125页

作者：施维松刘长军张艳萍秦运安张晓巍李晶梅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

根据鸡马立克氏病病毒（MDV）GA株Meq基因序列，设计并合成一对用于扩增Meq基因的引物，利用这对引物通过PCR方法分别扩增4株东北地区分离的强毒株、国内标准强毒株J-1株、国内疫苗株814株的Meq基因片段，进行克隆测序，对4株MDV分离毒... 详细信息

根据鸡马立克氏病病毒（MDV）GA株Meq基因序列，设计并合成一对用于扩增Meq基因的引物，利用这对引物通过PCR方法分别扩增4株东北地区分离的强毒株、国内标准强毒株J-1株、国内疫苗株814株的Meq基因片段，进行克隆测序，对4株MDV分离毒株Meq基因与国内传统毒株Meq基因及GenBank上收录的国内外9株毒株Meq基因序列进行比较分析。序列比较显示，不同的MDV株的Meq基因序列相对比较保守，它们相互间氨基酸序列的同源性在96．5％～99．7％之间。4株MDV分离毒株Meq基因在相关报道中提到的与毒力相关的脯氨酸重复区存在点突变；3株分离毒株Meq基因上相同位置均存在两个定点突变，这两处点突变是国内近几年分离株所特有的，国外已发表的MDV毒株Meq序列中不存在这种变化。分离株Meq基因的这些突变和毒株毒力的关系具有一定的规律性，但是这些规律性还有待进一步研究。

关键词：马立克氏病病毒 Meq基因序列比较定点突变

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几种鸡传染性支气管炎病毒活疫苗对中国流行毒株CK／CH／LDL／97I的保护作用评价

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病毒学报 2008年第2期24卷 111-116页

作者：张晓楠王钰李成仁刘乔然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

选择我国应用的五株鸡传染性支气管炎活疫苗毒株（JAAS、IBN、Jilin、J9和H120）和当地流行毒株（CK／CH／LDL／97I）作为研究对象，对其S1基因进行序列比对分析，结果表明疫苗株与流行毒株的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别不... 详细信息

选择我国应用的五株鸡传染性支气管炎活疫苗毒株（JAAS、IBN、Jilin、J9和H120）和当地流行毒株（CK／CH／LDL／97I）作为研究对象，对其S1基因进行序列比对分析，结果表明疫苗株与流行毒株的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别不超过76．4％和78．7％。Sl基因的核苷酸系统发育树显示，疫苗株与流行毒株分属不同进化群，亲缘关系较远，属于不同的基因型。用这五株活疫苗进行针对强毒株CK／CH／LDL／97I株的免疫保护实验，可见临床发病率为30％～100％；攻毒5d后每组随机扑杀10只鸡，采集器官，应用RT-PCR法检测病毒，气管样品病毒检出率为50％～90％，肾脏样品病毒检出率为10％～30％。由此可见：我国目前使用的主要活疫苗对异种IBV分离株的感染不能提供完全的保护作用。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 Sl基因疫苗交叉保护

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猪圆环病毒2型去核定位信号ORF2基因的原核表达与初步应用

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中国预防兽医学报 2008年第5期30卷 384-388页

作者：苗丽娟符芳王小武陈微晶鲁晶红李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的Cap基因(ORF2),通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,转化大肠杆菌M15。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达。... 详细信息

根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的Cap基因(ORF2),通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,转化大肠杆菌M15。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达。Western blot、ELISA鉴定蛋白活性,继而,以重组蛋白为抗原包被ELISA板,对28份临床样品进行检测。结果表明,该蛋白具有良好的抗原活性,可以作为抗原应用于临床样品的检测。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白原核表达

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