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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李国新田志军周艳君于海童光志中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232

猪流感(swineinfluenza，SI)是由猪流感病毒(SIvirus，SIV)引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。目前，包括H1N1、H3N2和H1N2亚型在内的SI已成为危害许多国家猪群的疾病。猪流感的控制不仅有经济上的意义，更有其深远的公共卫生学意义... 详细信息

猪流感(swineinfluenza，SI)是由猪流感病毒(SIvirus，SIV)引起的一种急性高度传染性呼吸道疾病。目前，包括H1N1、H3N2和H1N2亚型在内的SI已成为危害许多国家猪群的疾病。猪流感的控制不仅有经济上的意义，更有其深远的公共卫生学意义。DNA疫苗因为能够同时诱导体液免疫应答和细胞免疫应答而受到青睐。但由于DNA疫苗蛋白表达量低，激发的免疫应答较弱，从而限制了它的应用。因此，提高DNA疫苗的免疫效力已成为基因免疫研究的热点。本文探讨了分子佐剂C3d对猪流感病毒HA-DNA疫苗免疫原性的影响，并评价了表达不同形式的HA的DNA疫苗在小鼠模型中对不同亚型的猪流感病毒攻击的保护效力。

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗分子佐剂 C3d HA融合表达保护性免疫免疫原性

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质粒DNA与rPRV-HA联合免疫增强了小鼠对猪流感病毒攻击的保护效力

质粒DNA与rPRV-HA联合免疫增强了小鼠对猪流感病毒攻击的保护效力

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李国新周艳君于海田志军闫丽萍童光志中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200232 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

本研究应用表达HA的DNA疫苗和重组病毒免疫小鼠，探讨了不同类型疫苗的联合免疫对猪流感病毒攻击的保护效力。

关键词：猪流感病毒 DNA疫苗 rPRV-HA C3d Prime-boost免疫策略联合免疫效力

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猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

猪瘟病毒JL-1(06)株的分离鉴定及其全基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：金美伶成丹孙元李娜彭伍平夏照和仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室延边大学农学院

用PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出1株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从细胞培养物中扩增得到了JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD1... 详细信息

用PK15细胞从吉林某猪场疑似急性猪瘟仔猪的脾脏中分离出1株猪瘟病毒,命名为JL-1(06)。参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物,用RT-PCR从细胞培养物中扩增得到了JL-1(06)基因组全长的9个cDNA片段,将所得cDNA片段分别克隆至pMD18-T载体中,经测序和拼接后,获得了JL-1(06)株基因组全序列。序列分析表明,JL-1(06)基因组全长12298bp,含有1个大的开放阅读框架(ORF),编码1个由3898个氨基酸组成的多聚蛋白,其5-UTR和3-UTR分别由373和231bp组成。该分离株与与石门株的核苷酸和氨基酸同源性在99.4%以上,表明JL-1(06)属于1基因型中的1.1基因亚型。

关键词：猪瘟病毒病毒分离基因组序列同源性分析

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IBDV强、弱毒VP2诱饵载体构建及在酵母双杂交系统中自激活作用的检测

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中国预防兽医学报 2008年第1期30卷 1-4页

作者：李铁强高玉龙高宏雷邓小芸王笑梅王立群中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室东北农业大学生命科学学院微生物系黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学生命科学学院微生物系

采用Gateway技术将鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)Gx株和Gt株vp2基因分别克隆到载体pDEST-32构建诱饵载体,通过酶切和PCR鉴定并测序正确后,用醋酸锂法转化酵母菌株MaV203,通过缺陷型平板筛选和X-gal颜色筛选检测诱饵载体有无自激活作用。... 详细信息

采用Gateway技术将鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)Gx株和Gt株vp2基因分别克隆到载体pDEST-32构建诱饵载体,通过酶切和PCR鉴定并测序正确后,用醋酸锂法转化酵母菌株MaV203,通过缺陷型平板筛选和X-gal颜色筛选检测诱饵载体有无自激活作用。结果表明,成功构建了诱饵载体pDEST-32-Gxvp2和pDEST-32-Gtvp2,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活作用。为下一步利用酵母双杂交方法从鸡法氏囊B淋巴细胞和鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库中筛选与强、弱毒VP2诱饵载体作用的分子奠定了基础。

关键词： IBDV 酵母双杂交诱饵载体自激活

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鸡传染性喉气管炎研究进展

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兽医导刊 2008年第11期 26-29页

作者：王云峰石星明王玫童光志杨桂花孙鹏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

鸡传染性喉气管炎（ILT）是一种由α-疱疹病毒，即鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的急性上呼吸道传染病。本病的特征为呼吸困难、喘气、咳出带血分泌物、喉部和气管黏膜肿胀、出血，并形成糜烂，该病急性暴发时的发病率为90％～... 详细信息

鸡传染性喉气管炎（ILT）是一种由α-疱疹病毒，即鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）引起的鸡的急性上呼吸道传染病。本病的特征为呼吸困难、喘气、咳出带血分泌物、喉部和气管黏膜肿胀、出血，并形成糜烂，该病急性暴发时的发病率为90％～100％，死亡率为5％～70％（平均20％），蛋鸡的产蛋量明显下降，是危害养禽业的重要疫病之一，被国际兽医局在《国际动物卫生法典》1999年版中列为B类疾病。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒《国际动物卫生法典》呼吸道传染病疱疹病毒呼吸困难 B类疾病分泌物发病率

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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：陈建飞冯力时洪艳孙东波白兴华佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨维科生物技术开发公司

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777... 详细信息

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和ZhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白基因序列同源性重组蛋白免疫学活性

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传染性法氏囊病病毒血清2型23/82株VP5蛋白的原核表达及多克隆血清的制备

传染性法氏囊病病毒血清2型23/82株VP5蛋白的原核表达及多克隆血...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：秦立廷祁小乐高宏雷高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

本实验构建传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清2型23/82株非结构蛋白vp5基因的原核表达质粒,在大杆菌中进行了有效表达,并制备多克隆血清。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双切PUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株vp5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET... 详细信息

本实验构建传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清2型23/82株非结构蛋白vp5基因的原核表达质粒,在大杆菌中进行了有效表达,并制备多克隆血清。利用EcoRⅠ和XhoⅠ双切PUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株vp5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET28a-23/82-vP5,转化到宿主BL21(DE3),在IPTG诱导下成功表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot表明目的蛋白获得表达,分子量大小为23 kDa。利用Ni-NTA柱纯化,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后采血,间接ELISA检测血清抗体效价为1:1×105;Western blot分析能够与纯化蛋白发生特异性反应,具有良好的免疫原性。23/82株VP5蛋白的表达和多克隆血清的制备为研究不同血清型VP5蛋白在致病性中的差异提供有力工具,同时为深入研究VP5蛋白的结构和功能奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP5 原核表达多克隆血清

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鸡传染性法氏囊病病毒Gt株vp5基因缺失株感染性克隆的构建

鸡传染性法氏囊病病毒Gt株vp5基因缺失株感染性克隆的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：秦立廷祁小乐高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是双链RNA病毒,属于双RNA病毒科(Birnaviridae)禽双RNA病毒属(Avibirnavirus),其基因组由A、B两个节段组成,编码4个结果VP1-VP4和非结构蛋白VP5。已有报道,VP5蛋白在病毒复制和体内外致病性中发挥重要作用,其... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是双链RNA病毒,属于双RNA病毒科(Birnaviridae)禽双RNA病毒属(Avibirnavirus),其基因组由A、B两个节段组成,编码4个结果VP1-VP4和非结构蛋白VP5。已有报道,VP5蛋白在病毒复制和体内外致病性中发挥重要作用,其分子机制至今不清楚。本研究利用体外定点突变法,缺失IBDVGt株VP5基因。在基因组两端分别引入锤头状核酶序列(HamRz)和丁肝病毒核酶序列(HdvRz)。将带有核酶序列的IBDV基因组插入载体pCAGG的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV感染性克隆pCAGGmGtA△VP5HRT,该感染性克隆与pCAGGmGtBHRT共转染DFⅠ细胞。RT-PCR、间接免疫荧光、均显示拯救出了重组IBDV。IBDV非结构蛋白VP5基因缺失感染性克隆的成功构建为从分子水平上深入研究5基因功能奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP5 核酶结构病毒拯救

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免疫层析快速诊断试纸条的制备及在养猪业上的应用

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畜禽业 2008年第1期19卷 72-75页

作者：周盛华崔尚金戚亭岳丰雄张超范东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

胶体金免疫层析技术是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法,非常适用于基层兽医和猪场。本文综述了免疫层析快速诊断试纸条的基本原理、制备方法、标记技术以及目前在养猪业上的应用情况。

关键词：胶体金试纸条猪病

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DNA疫苗免疫增强技术的比较研究

DNA疫苗免疫增强技术的比较研究

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第六届全国免疫学学术大会

作者：曾伟伟石星明王云峰王玫黄婷婷高宏博中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

自1990首次发现肌肉注射DNA盐溶液后可自发转染肌细胞以来,DNA免疫已经有了巨大的发展。然而,简单的肌肉注射被认为是一种低效的免疫途径,现已有各种改进方法,其中最常用和最有效的就是电穿孔法和基因枪投递法。然而,这两者都受到条件... 详细信息

自1990首次发现肌肉注射DNA盐溶液后可自发转染肌细胞以来,DNA免疫已经有了巨大的发展。然而,简单的肌肉注射被认为是一种低效的免疫途径,现已有各种改进方法,其中最常用和最有效的就是电穿孔法和基因枪投递法。然而,这两者都受到条件的限制。纹身法是DNA多种免疫方法中一种较为经济实用的方法,改良的纹身机已在医学研究上广泛应

关键词： DNA 抗体水平疫苗免疫比较研究

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