检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医 2014年第10期41卷 33-37页

作者：徐天石达陈建飞谷凤丽时洪艳张鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的... 详细信息

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×108 CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0kb,平均长度约为1.1kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。

关键词：猪腹泻病毒猪小肠上皮细胞酵母双杂交 cDNA文库

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VeroE6细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第3期41卷 124-127页

作者：迟延彬石达朱庆贺陈建飞时洪艳张鑫李长龙韩斅刘宁赵鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）相互作用的VeroE6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个VeroE6细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的VeroE6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术... 详细信息

为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）相互作用的VeroE6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个VeroE6细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的VeroE6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术合成双链cDNA，并利用同源重组的方法构建VeroE6细胞的酵母cDNA文库。结果显示，文库滴度为9．7×10^8 CFU／mL，插入的双链cDNA片段大小为0．5～3kb，平均长度约为1．6kb，文库重组率为87％，此文库可以用来筛选与病毒相互作用的VeroE6蛋白。该文库的构建为发现和研究与PEDV结构蛋白相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 Vero E6细胞 cDNA文库 SMART技术酵母双杂交

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副猪嗜血杆菌单克隆抗体的制备及其B细胞抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 400-403页

作者：杨玉菊郑楠符芳柴政姜福成王香玲张雪云王卓李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨学院黑龙江哈尔滨150086 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 哈尔滨师范大学黑龙江哈尔滨150080

为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌（***）单克隆抗体（MAb）,本研究采用*** 5型强毒株（HPS-5）免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了一株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌... 详细信息

为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌（***）单克隆抗体（MAb）,本研究采用*** 5型强毒株（HPS-5）免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了一株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫共沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别的蛋白为ATP结合盒转运蛋白（ABCT）家族的寡肽透过酶（OppA）;利用MAb对噬菌体12肽库进行淘选,8个阳性噬菌体克隆展示有“KTPAE-R”保守序列,对应于*** SH29755株和SH0165株的469位～475位的氨基酸残基.对OppA氨基酸序列比对结果表明***与其它10种猪常见细菌病病原序列一致性为9.1％～74.5％,本研究结果为进一步研究***感染的病原学诊断建立了良好的基础.

关键词：副猪嗜血杆菌 ABCT OppA 病原学诊断

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鉴别猪伪狂犬病病毒强弱毒的高效纳米PCR检测试剂盒及初步应用

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养猪 2014年第5期 100-104页

作者：马兴杰仇铮崔宇超王晓玲张晶朱宝孔苗苗罗亚坤崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

试验建立了鉴别猪伪狂犬病病毒（PRV）强弱毒高效纳米PCR检测方法，并对相关条件进行优化，组装了试剂盒。根据PRV保守序列设计3对引物分别扩增PRV基因组的gB（431 bp）、gE（316 bp）和gG（202 bp）3个基因，用于区分PRV强毒与基因缺... 详细信息

试验建立了鉴别猪伪狂犬病病毒（PRV）强弱毒高效纳米PCR检测方法，并对相关条件进行优化，组装了试剂盒。根据PRV保守序列设计3对引物分别扩增PRV基因组的gB（431 bp）、gE（316 bp）和gG（202 bp）3个基因，用于区分PRV强毒与基因缺失毒株，优化反应条件后建立了纳米PCR检测PRV强弱毒的方法并组装试剂盒，对试剂盒进行了特异性、敏感性、批内批间可重复性及保存期评估试验，并对临床样品进行检测。特异性试验表明，此试剂盒对于PRV能够扩增出431（gB）、316（gE）和202 bp（gG）的目的片段，对于PRV-Bartha-K61能够扩增出431和202 bp的目的片段，对于猪捷申病毒、非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒及大肠杆菌等DNA或cDNA均未扩增出条带。敏感性试验表明，此试剂盒的方法比常规PCR方法敏感100-1000倍，最低核酸拷贝数检出量可以达到101 copy/μL数量级。试剂盒的批内、批间检测结果无明显差异，稳定性良好。-20℃至少可保存12个月。在对中国黑龙江、吉林等7个省市的临床送检的117份样品进行检测，结果显示，PRV强毒阳性率为51%，阴性率为49%，未发现有弱毒感染。鉴别PRV强弱毒纳米PCR试剂盒的研制，对PRV感染的早期检测、野毒株和疫苗株的鉴别、疾病控制等都有重要意义，而且也可以用于其他动物PRV感染的检测和早期诊断。

关键词：检测猪伪狂犬病病毒

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猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用的研究

猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王一平刘丹郭龙军危艳武吴红丽刘建波李胜斌黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病原现已在世界各地广泛流行,给养猪业造成巨大经济损失.PCV2 Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病原现已在世界各地广泛流行,给养猪业造成巨大经济损失.PCV2 Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原.研究表明,IFN-γ、IL-2和GM-CSF等细胞因子佐剂对疫苗具有免疫增强作用,可显著增强疫苗的免疫保护效力.本研究采用细胞因子佐剂与PCV2-Cap蛋白组合的策略来研制预防PCV2感染的新型基因工程亚单位疫苗,目的是验证猪源WN-γ(PoIFN-γ)、IL-2 (PoIL-2)和GM-CSF(PoGM-CSF)这3种细胞因子能否增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效力. 研究表明，用PoIFN-与PCV2-Cap蛋白混合免疫时，PoIFN-能显著增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫保护效力，但以Cap-PoIFN-γ融合蛋白免疫时，PoIFN-对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用;用PoIL-2或PoGM-CSF与PCV2-Cap蛋白混合免疫或以Cap-PoGM-CSF融合蛋白免疫时，PoIL-2和PoGM-CSF对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的抗体应答均无增强作用，但可促进免疫应答向Th1型免疫应答转变，从而增强疫苗的免疫保护效力，然而以Cap-PoIL-2融合蛋白免疫时，PoIL-2对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用。

关键词：对猪圆环病毒2型 Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用

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猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：危艳武夏伟刘长明张志慧黄立平刘建波吴洪丽刘丹李胜斌王一平张辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了探索猪鼻支原体(Mhr)对仔猪的致病性,本试验从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株Mhr,命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rRNA序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的... 详细信息

为了探索猪鼻支原体(Mhr)对仔猪的致病性,本试验从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株Mhr,命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rRNA序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和74.0％.电镜负染观察该菌为多形性,大小为500 nm～600 nm.取Mhr-DL株培养物(1.8×109 ccu/mL)经腹腔和气管途径接种SPF小型巴马猪,临床症状表现为精神沉郁、粪便干燥、食欲不振、结膜炎、体温高达41.6℃;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏等器官纤维渗出,淋巴结充血肿胀、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾内样病变.菌株核酸检测发现,肺脏和扁桃体检出率最高;组织病理表现为间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生.本研究获得的Mhr-DL菌株对巴马猪具有显著的致病性,为今后深入开展Mhr的致病机理和防控技术的研究奠定了基础.

关键词：巴马猪猪鼻支原体分离鉴定致病性分析

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猪圆环病毒基因组复制分子机制研究进展

猪圆环病毒基因组复制分子机制研究进展

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：张辉唐青海刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒(PCV)基因组为单链、环状***基因组在自身编码蛋白Rep和Rep'及宿主分子的参与下以滚环复制机制(Rolling-circle replication,RCR)进行复制.Rep和Rep'结合到PCV部分复制起点组成的双链DNA片段上,但这2种蛋白的结合位... 详细信息

猪圆环病毒(PCV)基因组为单链、环状***基因组在自身编码蛋白Rep和Rep'及宿主分子的参与下以滚环复制机制(Rolling-circle replication,RCR)进行复制.Rep和Rep'结合到PCV部分复制起点组成的双链DNA片段上,但这2种蛋白的结合位点有细微差别.在DNA合成期间,PCV DNA复制起始区域(含有一对反向重复序列)存在于一个非稳定的四链结构中(熔炉模型),这一结构能使回文链和互补链同时作为DNA合成起始与终止的模板,这一机制对于PCV DNA复制过程中的校对和基因转换非常重要.本文全面综述了近年来有关PCV DNA复制的分子机制研究进展,以期为相关研究者提供参考.

关键词：猪圆环病毒基因组复制脱氧核糖核酸分子机制

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基于反向遗传操作的传染性法氏囊病新型重组疫苗研究

基于反向遗传操作的传染性法氏囊病新型重组疫苗研究

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第九届全国免疫学学术大会

作者：祁小乐高立王永强高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病。超强毒(vvIBDV)的感染造成50%以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展。IBD疫苗目前存在问题... 详细信息

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病。超强毒(vvIBDV)的感染造成50%以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展。IBD疫苗目前存在问题:技术瓶颈是疫苗株需要通过人工盲传驯化获得,费事费力;使用误区是中等或中等偏强毒力毒株被用作疫苗,存在生物安全隐患。目的:优化基于反向遗传操作的IBD疫苗研究新型技术平台,研制高效低毒的IBD新型重组疫苗。方法:建立IBD反向遗传操作技术;研究IBDV毒力和细胞嗜性的分子基础;构建和拯救重组病毒;通过动物实验评估重组疫苗株的有效性和安全性。结果:1、建立了RNA聚合酶Ⅱ介导的IBDV新型反向遗传操作系统,比国际同类系统更高效陕捷。2、构建和拯救系列氨基酸突变病毒,证明了VP2的253、284位氨基酸突变协同决定IBDV的细胞嗜性;VP2的253、284位氯基酸是IBDV重要的毒力位点。Q253H/A284T可以使vvIBDV毒力降低,且适应体外细胞培养。3、构建了一株以弱毒疫苗株为亲本骨架、表达流行毒株主要保护性抗原的IBDV重组病毒rGtktLJVP2,该候选疫苗株抗原性与流行毒株更匹配、安全、有效。已获国家发明专利。4、重组病毒rGtHLJVP2,对鸡无致病力。在CEF细胞和SPF鸡上分别盲传15代和5代,毒力没有返强,遗传稳定性良好。已获国家"农业转基因安全证书"。5、rGtHLJVP2免疫效果良好。能100%保护同源(HLJ-0504株)和异源强毒(HuB-1)的攻击,免疫效果和中等毒力疫苗株(B87)相当。目前,正在进行系统的临床评估。结论:建立了IBD疫苗株新型培育平台,构建了一株IBDV重组疫苗株rGtHLJVP2,安全稳定,免疫效果良好,为疫苗株培育方法的升级和疫苗的更新换代奠定了坚实基础。

关键词：传染性法氏囊病(IBD) 重组疫苗反向遗传

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基于反向遗传操作的传染性法氏囊病新型重组疫苗研究

基于反向遗传操作的传染性法氏囊病新型重组疫苗研究

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：祁小乐高立王永强高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病.超强毒(vvIBDV)的感染造成50％以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展.IBD疫苗目前存在问题:... 详细信息

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病.超强毒(vvIBDV)的感染造成50％以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展.IBD疫苗目前存在问题:技术瓶颈是疫苗株需要通过人工盲传驯化获得,费事费力;使用误区是中等或中等偏强毒力毒株被用作疫苗,存在生物安全隐患.目的:优化基于反向遗传操作的IBD疫苗研究新型技术平台,研制高效低毒的IBD新型重组疫苗.方法:建立IBD反向遗传操作技术;研究IBDV毒力和细胞嗜性的分子基础;构建和拯救重组病毒;通过动物实验评估重组疫苗株的有效性和安全性.

关键词：传染性法氏囊病(IBD) 重组疫苗反向遗传

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J亚群禽白血病流行病学研究新进展

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中国家禽 2014年第16期36卷 38-40页

作者：邓小芸祁小乐张久丽华育平高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 东北林业大学林学博士后流动站黑龙江哈尔滨150040

J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康... 详细信息

J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康发展。ALV-J与其他免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中普遍存在,使得鸡群免疫力低下,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,使疫病的诊断和防控难度加大。本文从分子流行病学的角度对ALV-J的发生发展进行综述,以期揭示ALV-J致病性增强的分子机制。

关键词： J亚群禽白血病流行病学进展

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