检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2014年第7期34卷 1078-1082,1113页

作者：郝瑞军庄艳娜燕超么帅高宏雷秦立廷高玉龙曾祥伟王笑梅东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解雀形目野生鸟类感染禽内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）的情况,采集了352份样品,应用PCR方法进行了初筛。然后将阳性样品适当处理后接种CEF细胞,利用IFA等方法进一步鉴定。结果分离到2株病毒WB11042和WB110... 详细信息

为了解雀形目野生鸟类感染禽内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）的情况,采集了352份样品,应用PCR方法进行了初筛。然后将阳性样品适当处理后接种CEF细胞,利用IFA等方法进一步鉴定。结果分离到2株病毒WB11042和WB11043,分别来自黄喉鹀和燕雀。对2株REV分离株的gp90基因进行扩增、测序和序列分析。结果显示,其gp90序列与REV亚型Ⅲ的代表毒株（CSV、APC-566）亲缘关系最近,高达99%以上;与亚型Ⅱ代表株（SNV）和亚型Ⅰ代表株（HA9901）的亲缘关系相对较远,在95.5%~97.1%之间。遗传进化树分析也表明这2株野生鸟类分离株属于REV亚型Ⅲ。结果表明,雀形目野生鸟类也可以感染REV。

关键词：野生鸟类 REV gp90 序列分析

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牛副流感病毒3型TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2014年第6期44卷 617-623页

作者：董秀梅朱远茂蔡虹王姝吕闯马磊薛飞东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

根据牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)膜蛋白M基因设计引物及探针,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行了测定,并对人工感染BPIV3的牛群... 详细信息

根据牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)膜蛋白M基因设计引物及探针,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行了测定,并对人工感染BPIV3的牛群临床样本进行了检测。结果显示,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR的最低检测限为17.6copies/μL,同时进行批内、批间5次重复性试验,变异系数均小于2.5%。应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒1型,结果均为阴性,说明建立的方法特异性较强。用建立的方法检测人工感染BPIV3的犊牛鼻拭子样本,检测结果与样本TCID50的测定结果相符合,但比其更敏感。结果表明,本试验中建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR可以作为BPIV3早期诊断及定量分析的有效技术手段。

关键词：实时荧光定量RT-PCR TaqMan探针牛副流感病毒3型

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抗猪传染性胃肠炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 314-317页

作者：赵鑫张鑫时红艳陈建飞迟延彬韩斆李长龙刘宁胡桂学冯力吉林农业大学动物科学学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达重组N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,经4次细胞克隆纯化后,获得两株稳... 详细信息

为制备抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达重组N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,经4次细胞克隆纯化后,获得两株稳定分泌抗重组TGEV N蛋白的MAb,命名为3D7和5E8。通过western blot和间接免疫荧光试验对MAb的免疫活性和特异性进行鉴定,结果表明两株MAb均能够与TGEV全病毒反应并且特异性良好。利用合成的多肽对N蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 3D7识别的表位为241AGKGDVTRFYGARSSSANFG260;5E8为184NKKDDSVEQAVLAALKKLGV203。本研究制备了两株MAb并对其表位进行鉴定,为TGEV检测方法的建立和N蛋白功能的分析奠定了基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒重组核蛋白单克隆抗体抗原表位

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波形蛋白与猪瘟病毒衣壳蛋白定位分析

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 740-742页

作者：张鑫时洪艳徐佳赵鑫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为了解波形蛋白在ST细胞中的定位及其与猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)的共定位关系,本研究采用抗体对波形蛋白的细胞定位进行检测,并将CSFV C蛋白真核表达重组质粒转染于ST细胞中,转染12 h和24 h后利用激光共聚焦显微镜观察波形蛋白和CSFV ... 详细信息

为了解波形蛋白在ST细胞中的定位及其与猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)的共定位关系,本研究采用抗体对波形蛋白的细胞定位进行检测,并将CSFV C蛋白真核表达重组质粒转染于ST细胞中,转染12 h和24 h后利用激光共聚焦显微镜观察波形蛋白和CSFV C蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,波形蛋白在细胞核周围定位,并且与CSFV C蛋白在细胞中存在共定位现象。本研究为进一步研究波形蛋白在病毒复制过程中的机制奠定基础。

关键词：波形蛋白猪瘟病毒衣壳蛋白共定位

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马属动物SLFN11具有促进马传染性贫血病毒复制的能力

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中国预防兽医学报 2014年第10期36卷 747-750页

作者：孙留克林跃智汤艳东那雷王雪峰杜承王晓钧周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病与慢病毒创新团队黑龙江哈尔滨150001 哈药集团生物疫苗有限公司黑龙江哈尔滨150069

SLFN是一类干扰素诱导蛋白,还可以通过干扰素调节因子(IRF3)途径被病原体直接诱导表达。最新研究表明,SLFN11可通过抑制病毒蛋白合成,对慢病毒属的HIV-1具有明显抗病毒作用。为阐明SLFN11对马传染性贫血病毒(EIAV)的作用,本研究采用RT-... 详细信息

SLFN是一类干扰素诱导蛋白,还可以通过干扰素调节因子(IRF3)途径被病原体直接诱导表达。最新研究表明,SLFN11可通过抑制病毒蛋白合成,对慢病毒属的HIV-1具有明显抗病毒作用。为阐明SLFN11对马传染性贫血病毒(EIAV)的作用,本研究采用RT-PCR技术从健康马淋巴细胞中首次扩增获得SLFN11基因,构建了真核表达重组质粒pHA-eSLFN11。将其与EIAV的感染性克隆共转染HEK293T细胞,western blot检测结构蛋白的表达情况,并采用激光共聚焦试验分析SLFN11在亚细胞中的定位。研究结果显示,SLFN11能够促进EIAV结构基因(Gag)的表达,此外马源SLFN11(eSLFN11)与人源SLFN11(hSLFN11)明显定位不同。以上结果提示,eSLFN11与EIAV的作用明显区别于hSLFN11对HIV-1的限制作用,其机制有待进一步研究。

关键词： SLFN11 马传染性贫血病毒密码子偏性

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Leachii支原体LppA蛋白的表达及其粘附特性鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 641-645页

作者：王冠博常继涛刘云于力东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

Leachii支原体可以引起犊牛多发性关节炎,与犊牛肺炎有关。为研究*** LppA蛋白粘附特性,本研究采用大肠杆菌表达系统表达*** LppA蛋白,并制备抗LppA多克隆抗体。胰酶敏感试验结果显示,全菌体蛋白经胰酶处理后,LppA蛋白条带消失,表明Lpp... 详细信息

Leachii支原体可以引起犊牛多发性关节炎,与犊牛肺炎有关。为研究*** LppA蛋白粘附特性,本研究采用大肠杆菌表达系统表达*** LppA蛋白,并制备抗LppA多克隆抗体。胰酶敏感试验结果显示,全菌体蛋白经胰酶处理后,LppA蛋白条带消失,表明LppA蛋白是位于***细胞表面的膜脂蛋白。通过粘附抑制试验,利用激光共聚焦显微镜可以观察到抗LppA血清能够抑制***对胎牛关节滑膜细胞的粘附作用;同时,采用Columbas分析软件对共聚焦图片进行图像分析,结果显示1:25倍稀释的LppA多克隆抗体对***的粘附抑制率为58.3%,而同比稀释的***全菌体多抗的粘附抑制率为79.26%。此外,ELISA试验结果表明,重组LppA蛋白可以与关节滑膜细胞膜蛋白发生特异性粘附作用,并且这种粘附作用可以被抗LppA多抗特异性抑制。这些结果表明,LppA蛋白是***的一个粘附相关的外膜脂蛋白。

关键词： Leachii支原体膜脂蛋白 LppA蛋白粘附特性

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口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体(MAb)的制备及基于MAbELISA方法的初步建立

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 448-452页

作者：李超斯周国辉孙静刘云于力东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立区分口蹄疫病毒(FMDV)疫苗免疫和自然感染动物的血清学鉴别检测方法,本研究采用杆状病毒表达的FMDV非结构蛋白3ABC免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,并以原核表达的FMDV非结构蛋白3B作为抗原筛选融合细胞的培养上清液,... 详细信息

为建立区分口蹄疫病毒(FMDV)疫苗免疫和自然感染动物的血清学鉴别检测方法,本研究采用杆状病毒表达的FMDV非结构蛋白3ABC免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,并以原核表达的FMDV非结构蛋白3B作为抗原筛选融合细胞的培养上清液,获得一株稳定分泌抗3B蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞。经间接免疫荧光鉴定其为一株抗FMDV非结构蛋白3B的特异性MAb,为IgG1/κ亚类,间接ELISA检测杂交瘤细胞上清液和腹水的抗体效价分别为1∶12 800和1∶106。硫氰酸盐洗脱法测定其相对亲和力常数为1.5 mol/L。采用该MAb作为包被抗体并特异性的结合原核表达的3B重组蛋白用于检测血清中抗FMDV的非结构蛋白抗体,初步建立了以MAb为基础的ELISA方法。其MAb包被浓度为5μg/mL,3B重组蛋白浓度为1.1μg/mL,被检血清1∶100稀释,通过检测猪血清并与3B间接ELISA和prioCHECKRNSP ELISA试剂盒进行比较,表明该方法具有更强的特异性。

关键词：口蹄疫病毒 3B重组蛋白 MAb ELISA

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猪A群轮状病毒VP6蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 885-888页

作者：韩斅陈建飞时洪艳张鑫石达迟延彬李长龙冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为制备猪A群轮状病毒(RV)VP6蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达、纯化的重组VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,r VP6-GST为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗VP6蛋白的MAb杂... 详细信息

为制备猪A群轮状病毒(RV)VP6蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达、纯化的重组VP6蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,r VP6-GST为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗VP6蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1F4)。MAb鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1型,轻链为κ链;细胞上清液及腹水效价分别为1∶12 800和1∶106。Western blot和间接免疫荧光结果显示该MAb能够与天然的VP6蛋白反应。应用肽扫描技术鉴定显示该MAb对应抗原表位核心序列为134DYIENWNLQNR144。该MAb的制备为进一步研究VP6蛋白功能和建立RV检测方法奠定基础。

关键词： A群轮状病毒 VP6蛋白单克隆抗体抗原表位

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猪瘟病毒衣壳蛋白的细胞核定位研究

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 71-72,80页

作者：刘宁时洪艳陈建飞冯力张鑫胡桂学吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白在ST细胞中的定位情况,本研究将CSFV C蛋白基因克隆于真核表达载体pEGFP-C2中,构建重组质粒pEGFP-CSFV-C。将该重组质粒转染ST细胞,转染2 h、4 h和6 h后利用激光共聚焦显微镜分析C表达蛋白在细胞中的定... 详细信息

为了解猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白在ST细胞中的定位情况,本研究将CSFV C蛋白基因克隆于真核表达载体pEGFP-C2中,构建重组质粒pEGFP-CSFV-C。将该重组质粒转染ST细胞,转染2 h、4 h和6 h后利用激光共聚焦显微镜分析C表达蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,CSFV表达蛋白在ST细胞中主要定位于细胞质和核仁。本研究为进一步分析CSFV的复制机理提供依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白 ST细胞核仁定位

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两种阿卡斑病毒抗体ELISA检测方法的建立与初步应用

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 289-292页

作者：刘晓婧王芳赵权于力吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立阿卡斑病ELISA血清学诊断方法,本研究利用原核表达的阿卡斑病毒(AKAV)核衣壳(N)蛋白和全病毒作为包被抗原,分别建立两种AKAV抗体的间接ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。应用两种间接ELISA检测方法分别对不同省份来源的247... 详细信息

为建立阿卡斑病ELISA血清学诊断方法,本研究利用原核表达的阿卡斑病毒(AKAV)核衣壳(N)蛋白和全病毒作为包被抗原,分别建立两种AKAV抗体的间接ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。应用两种间接ELISA检测方法分别对不同省份来源的247份牛血清样本进行检测,与中和试验结果进行比较。结果表明,中和试验抗体检出阳性率为29.55%,N蛋白间接ELISA(N-ELISA)和AKAV全病毒间接ELISA(AKAV-ELISA)与中和试验的符合率分别为72.5%和76.5%。本研究建立的N-ELISA及AKAV-ELISA方法均可以用于AKAV感染的流行病学调查。其中,N-ELISA方法安全性好,更适合推广应用。

关键词：阿卡斑病毒核衣壳N蛋白间接ELISA 中和试验

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