检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医 2013年第11期40卷 50-53页

作者：刘朝霞刘永刚毕可东周顺崔尚金青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究从临床发病猪采集病料,以PK15传代细胞进行病毒分离,通过PCR、血液凝集试验(HA)和电镜鉴定为1株猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),命名为BQ-C。对分离的毒株进行测序,结果显示该毒株与GenBank登录的PPV BQ株同源性为100%。为... 详细信息

本研究从临床发病猪采集病料,以PK15传代细胞进行病毒分离,通过PCR、血液凝集试验(HA)和电镜鉴定为1株猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV),命名为BQ-C。对分离的毒株进行测序,结果显示该毒株与GenBank登录的PPV BQ株同源性为100%。为获得该毒株结构蛋白VP2基因的表达产物,将VP2基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+),得到表达重组质粒。经双酶切和测序鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE结果表明,获得的重组蛋白分子质量约为71.5ku,与预期大小相符。Western blotting结果显示获得的重组蛋白能与PPV阳性血清特异性结合,表明重组蛋白具有良好的反应原性。结果表明,本研究成功分离了1株PPV BQ-C株,且表达的VP2重组蛋白可用于PPV血清学诊断和疫苗的研发。

关键词：猪细小病毒重组VP2蛋白原核表达反应原性

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猪细小病毒的致病机制与防控策略

引用

世界华人消化杂志 2013年第1期21卷 66-70页

作者：仇铮任晓峰崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江省哈尔滨市150001 东北农业大学动物医学学院预防兽医系黑龙江省哈尔滨市150030

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是细小病毒科细小病毒属的成员,引起初孕母猪的繁殖障碍、仔猪的皮肤炎症和肠炎性腹泻.这些疾病在临床表现和病理特点上各不相同.近年来,PPV与其他病毒混合感染发生较多,是导致很多疾病综合征的病原... 详细信息

猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是细小病毒科细小病毒属的成员,引起初孕母猪的繁殖障碍、仔猪的皮肤炎症和肠炎性腹泻.这些疾病在临床表现和病理特点上各不相同.近年来,PPV与其他病毒混合感染发生较多,是导致很多疾病综合征的病原之一.本文主要针对猪细小病毒的病原、致病机制和防控策略做一综述,以期对动物细小病毒病的防治提供的借鉴.

关键词：猪细小病毒致病机制

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猪圆环病毒2型引起相关肠炎疾病的研究进展

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动物医学进展 2013年第10期34卷 92-95页

作者：袁婧魏萍刘长明东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)已成为世界范围内影响养猪业发展的重要疾病。由猪圆环病毒2型(PCV-2)引发的肠炎是PCVAD的症状之一,临床表现为生长仔猪腹泻、生长发育迟缓或体重减轻;在淋巴组织和肠组织中可检测到大量的PCV-2病原,并出现特... 详细信息

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)已成为世界范围内影响养猪业发展的重要疾病。由猪圆环病毒2型(PCV-2)引发的肠炎是PCVAD的症状之一,临床表现为生长仔猪腹泻、生长发育迟缓或体重减轻;在淋巴组织和肠组织中可检测到大量的PCV-2病原,并出现特征性组织学病变。试验证实,PCV-2单独感染或与其他病原混合感染可引发肠炎,经口服途径攻毒感染是引发PCV-2相关肠炎疾病的一种重要感染途径。因此,PCV-2是生长仔猪肠道疾病的一种致病因子,应予以足够重视。论文对PCV-2相关肠炎在临床表现、组织病理学特征、多病原混合感染对其影响、临床诊断以及防控措施等方面的研究进展进行综述,以期对PCV-2相关肠炎疾病的深入研究提供参考。

关键词：猪圆环病毒2型肠炎诊断

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东北地区野生鸟类B亚群禽白血病的分子流行病学调查及env基因的序列分析

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中国兽医科学 2013年第2期43卷 208-212页

作者：李德龙刘婉思杨波高奇曾祥伟秦立廷高宏雷刘思当高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为掌握我国东北地区野生鸟类感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从黑龙江、吉林和辽宁三省采集了300份野生鸟类样品,经PCR检测,4份野生鸟类样品为ALV-B阳性,并扩增了这4份样品的env基因,对其序列进行了遗传进化分析。结果显示,4份ALV-B阳性... 详细信息

为掌握我国东北地区野生鸟类感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从黑龙江、吉林和辽宁三省采集了300份野生鸟类样品,经PCR检测,4份野生鸟类样品为ALV-B阳性,并扩增了这4份样品的env基因,对其序列进行了遗传进化分析。结果显示,4份ALV-B阳性样品的env基因与原型毒株RAV-2的同源性为99.1%～99.4%,与美国的另外2株代表毒株Schmidt-Ruppin B和Prague subgroup B的同源性为93.3%～98.4%,而与2株中国蛋鸡分离株SDAU09C2和SDAU09E3的同源性为90.2%～90.6%。以上结果表明,目前我国野生鸟类已经存在禽白血病。env基因序列分析结果表明,这4份阳性样品的env基因部分位点发生了变异,并且在多处位点存在突变。

关键词：野生鸟类 B亚群禽白血病流行病学调查序列分析

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我国东北地区野生鸟类A亚群禽白血病病毒分子流行病学调查及env基因序列分析

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中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 245-247页

作者：杨波高玉龙高宏雷秦立廷刘婉思李德龙高奇曾祥伟王笑梅东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 山东农业大学动物科技学院山东泰安271000

为了解野生鸟类禽白血病病毒(ALV)的感染情况,本研究采集了300份野生鸟类样品,将样品处理后接种DF-1细胞,利用p27抗原ELISA、IFA、PCR等方法检测,其中两份样品为ALV阳性并对其env基因扩增。结果表明,其中gp85编码序列与已发表的A亚群ALV... 详细信息

为了解野生鸟类禽白血病病毒(ALV)的感染情况,本研究采集了300份野生鸟类样品,将样品处理后接种DF-1细胞,利用p27抗原ELISA、IFA、PCR等方法检测,其中两份样品为ALV阳性并对其env基因扩增。结果表明,其中gp85编码序列与已发表的A亚群ALV(ALV-A)的同源性最高,为91.1%～100%,而与已发表的鸡的B、C、D、E、J亚群ALV的gp85编码序列的同源性仅在28.0%～80.3%之间。遗传进化树分析也表明这两份ALV阳性样品的gp85编码序列属于ALV-A。本实验在我国野生鸟类群体中首次分离和鉴定出ALV-A,表明目前我国野生鸟类已经存在A亚群ALV的感染。

关键词：野生鸟类 A亚群禽白血病 gp85 序列分析

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猪B7-H4的克隆鉴定与单克隆抗体制备

猪B7-H4的克隆鉴定与单克隆抗体制备

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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议

作者：刘培欣李涛彭金美田志军刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

B7家族分子是T细胞免疫应答的重要调控分子之一,在抗病毒和抗肿瘤免疫应答中发挥重要的免疫调节作用.B7-H4分子是新发现的B7家族成员之一,在人和小鼠中研究表明,它对T细胞免疫应答具有负调控功能.目的:克隆鉴定猪B7-H4基因,研究该分子... 详细信息

B7家族分子是T细胞免疫应答的重要调控分子之一,在抗病毒和抗肿瘤免疫应答中发挥重要的免疫调节作用.B7-H4分子是新发现的B7家族成员之一,在人和小鼠中研究表明,它对T细胞免疫应答具有负调控功能.目的:克隆鉴定猪B7-H4基因,研究该分子在猪体内的分布情况,并制备该分子的单克隆抗体.方法:用人B7-H4基因序列在GeneBank上进行Blast搜索猪B7-H4的EST序列,采用PCR方法从猪PBMC中扩增B7-H4分子;通过荧光定量PCR方法检测该分子在猪不同组织器官中的分布情况;利用GST融合方法将B7-H4的胞外区进行原核表达和纯化后免疫小鼠,利用经典杂交瘤技术将免疫小鼠脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,然后用稳定表达猪B7-H4的HEK293细胞系通过免疫荧光试验筛选阳性杂交瘤细胞.

关键词：猪 B7-H4分子原核表达单克隆抗体

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鸭肠炎病毒VP5蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医杂志 2013年第1期49卷 9-12页

作者：李慧昕刘胜旺韩宗玺邵昱昊刘晓丽华育平刘娣孔宪刚东北林业大学博士后流动站黑龙江省农业科学院博士后工作站黑龙江哈尔滨150086 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

应用截短表达的鸭肠炎病毒(DEV)VP5-C蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及筛选,获得4株稳定分泌抗VP5蛋白的杂交瘤细胞株,命名为1B5、3A1、4F9、6F6。抗体亚类鉴定表明,4株单克隆抗体均为IgG、k链。间接免疫荧光检测结果表明,4株单克隆... 详细信息

应用截短表达的鸭肠炎病毒(DEV)VP5-C蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及筛选,获得4株稳定分泌抗VP5蛋白的杂交瘤细胞株,命名为1B5、3A1、4F9、6F6。抗体亚类鉴定表明,4株单克隆抗体均为IgG、k链。间接免疫荧光检测结果表明,4株单克隆抗体均能够与DEV感染CEF发生特异性反应,而不与CEF对照发生反应。Western blot检测,4株单克隆抗体均能够识别大小约为150kDa的蛋白,说明4株单抗隆抗体是特异性识别VP5蛋白的抗体。DEV VP5蛋白单克隆抗体的制备为进一步鉴定VP5蛋白B细胞抗原表位及VP5蛋白功能研究提供了有效工具。

关键词：鸭肠炎病毒 VP5蛋白单克隆抗体

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猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗免疫增强作用的研究

猪IFN-γ、IL-2及GM-CSF对猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白亚单位疫苗...

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第二届免疫学博士生论坛

作者：王一平刘丹郭龙军危艳武吴红丽刘建波李胜斌黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

背景:猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明,IFN-γ、IL-2及GM-CSF等细胞因子佐剂能增强疫苗的免疫保护效力,因此可采用细... 详细信息

背景:猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明,IFN-γ、IL-2及GM-CSF等细胞因子佐剂能增强疫苗的免疫保护效力,因此可采用细胞因子与抗原组合的策略研制PCV2新型亚单位疫苗,以验证这3种细胞因子对PCV2-Cap蛋白的免疫增强作用。方法 :采用杆状病毒表达系统表达PCV2-Cap蛋白、猪IFN-γ(Po IFN-γ)、猪IL-2(Po IL-2)、猪GM-CSF(Po GM-CSF)及这3种细胞因子与PCV2-Cap蛋白的融合蛋白Cap-Po IFN-γ、Cap-Po IL-2和Cap-Po GM-CSF,制备几种不同形式的PCV2亚单位疫苗,并经鼠体模型鉴定其免疫原性;采用IPMA和阻断ELISA方法测定免疫及攻毒后PCV2特异性抗体滴度,通过监测淋巴细胞增殖反应和细胞因子分泌水平评价细胞免疫应答;采用常规PCR检测PCV2病毒血症,并经定量PCR检测攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒载量。结果 :采用杆状病毒表达系统成功地表达了PCV2-Cap蛋白、Po IFN-γ及CapPo IFN-γ融合蛋白,制备了3种PCV2亚单位疫苗:Cap-Po IFN-γ疫苗、PCV2-Cap+Po IFN-γ疫苗及PCV2-Cap疫苗,并经鼠体试验证实,PCV2-Cap+Po IFN-γ疫苗能诱导产生更高水平的PCV2特异性IPMA抗体和中和抗体滴度,明显提高T淋巴细胞的增殖能力,并显著降低攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒核酸载量。以杆状病毒表达系统成功地表达了Po IL-2、Po GM-CSF、Cap-Po IL-2融合蛋白及Cap-Po GM-CSF融合蛋白,制备了5种PCV2亚单位疫苗:Cap-Po IL-2疫苗、PCV2-Cap+Po IL-2疫苗、Cap-Po GM-CSF疫苗、PCV2-Cap+Po GM-CSF疫苗及PCV2-Cap疫苗,并经鼠体试验证实,PCV2-Cap+Po IL-2疫苗、Cap-Po GM-CSF疫苗和PCV2-Cap+Po GM-CSF疫苗均可明显提高T淋巴细胞的增殖能力,刺激淋巴细胞分泌更高水平的IFN-γ和IL-2,并显著降低攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒核酸载量。结论 :研究表明,用Po IFN-γ与PCV2-Cap蛋白混合免疫时,Po IFN-γ能显著增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫保护效力,但以Cap-Po IFN-γ融合蛋白免疫时,Po IFN-γ对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用;用Po IL-2或Po GM-CSF与PCV2-Cap蛋白混合免疫或以Cap-Po GM-CSF融合蛋白免疫时,Po IL-2和Po GM-CSF对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的抗体应答均无增强作用,但可促进免疫应答向Th1型免疫应答转变,从而增强疫苗的免疫保护效力,然而以Cap-Po IL-2融合蛋白免疫时,Po IL-2对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白亚单位疫苗 IFN-γ、IL-2及GM-CSF 免疫增强

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与PCV2基因组茎环结构相互作用宿主细胞蛋白的筛选与鉴定

与PCV2基因组茎环结构相互作用宿主细胞蛋白的筛选与鉴定

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：张辉唐青海危艳武黄立平张志慧刘建波吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库... 详细信息

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆;通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,序列分析确认。本实验成功地构建了酵母单杂交文库,筛选出1.01×106个酵母克隆,其中196个为阳性克隆,经PCR产物测序,并通过NCBI Blast法进行序列比对,确定有4种蛋白可与PCV2基因组茎环序列发生作用。本研究为进一步阐明这些宿主蛋白对PCV2复制的调节作用奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型茎环结构宿主细胞互作蛋白

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猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

猪鼻支原体的分离鉴定及其对巴马猪的致病性试验

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动物生态养殖、疫病防控、食品安全与人类健康——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会

作者：危艳武张志慧黄立平刘建波吴洪丽刘丹李胜斌王一平张辉夏伟刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

1引言猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是引起猪多发性浆膜炎、肺炎、心包炎、胸膜炎、关节炎、中耳炎等疾病的主要病原,该病在猪群中发病率高,死亡率低。临床上Mhr常与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)等混合... 详细信息

1引言猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是引起猪多发性浆膜炎、肺炎、心包炎、胸膜炎、关节炎、中耳炎等疾病的主要病原,该病在猪群中发病率高,死亡率低。临床上Mhr常与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)等混合感染,造成严重的猪呼吸道综合征,致使断奶仔猪的死亡率显著升高,给我国养猪业造成巨大的经济损失。2006年台湾学者Lin等[1]报道Mhr

关键词：猪鼻支原体 SEP 肠系膜淋巴结间质性肺炎相对增重率淋巴细胞增生主要病原分离鉴定巴马猪

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