检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：刘丹陆月华吴洪丽危艳武唐青海王一平李胜斌刘建波魏萍刘长明东北农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

摘要猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1编码的Rep蛋白与病毒复制相关,其与转录中剪切所得的小Rep'蛋白是病毒复制所必须的。为了构建表达PCV2-Rep和Rep'蛋白的重组杆状病毒,采用PCR法从病毒感染细胞中扩增Rep和Rep'蛋白基因,并克隆... 详细信息

摘要猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1编码的Rep蛋白与病毒复制相关,其与转录中剪切所得的小Rep'蛋白是病毒复制所必须的。为了构建表达PCV2-Rep和Rep'蛋白的重组杆状病毒,采用PCR法从病毒感染细胞中扩增Rep和Rep'蛋白基因,并克隆到杆状病毒转移载体(pBlueBac4.5/V5-His-TOPO)。将重组质粒与线性化杆状病毒DNA共转染昆虫细胞(Sf-21),经同源重组和蚀斑筛选,获得2株高效表达PCV2-Rep和Rep'蛋白的重组杆状病毒。经3次克隆的重组毒株毒价达7.0×10～7和3.0×10～7pfu/mL。蛋白表达分析表明,PCV2-Rep和Rep'蛋白分子量为36.0 ku和20.4ku,占总蛋白含量的6.2%和10.1%;这两种重组蛋白均可与PCV2抗体产生特异性反应,具有良好的免疫活性。用Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,其纯度达到92.5%和93.6%。本研究获得的PCV2-Rep和Rep'蛋白,为PCV2疫苗免疫与野毒感染之间鉴别诊断及病毒复制机制的研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型 Rep/Rep'蛋白杆状病毒表达

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A群猪轮状病毒JS株VP6基因序列分析

A群猪轮状病毒JS株VP6基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：高秀春时洪艳佟有恩吴波平孙东波白兴华陈建飞冯力东北农业大学生命科学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

参考GenBank中发表PRV OSU毒株VP6序列ORF两端保守区,设计1对特异引物,以PRV JS株反转录cDNA为模板,通过PCR方法获得约113kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明:获得了VP6的1320bp全基因序列;将其ORF与国内外9... 详细信息

参考GenBank中发表PRV OSU毒株VP6序列ORF两端保守区,设计1对特异引物,以PRV JS株反转录cDNA为模板,通过PCR方法获得约113kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明:获得了VP6的1320bp全基因序列;将其ORF与国内外9株PRV VP6基因的ORF进行核苷酸和氨基酸同源性比较,核苷酸同源性在77.11%～91.11%之间,氨基酸的同源性在89.17%～99.15%之间;在氨基酸系统发育进化树中,JS毒株与A131、OSU、CN86毒株亲缘关系较近,为一个进化群。

关键词： PRV VP6基因序列分析

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PEDV N蛋白亚细胞定位信号的鉴定

PEDV N蛋白亚细胞定位信号的鉴定

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：石达陈建飞时红艳张莎王璐刘随新刘孝珍冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨 150001 东北农业大学生命科学院哈尔滨150030

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实时荧光定量PCR检测Ⅱ型猪圆环病毒

实时荧光定量PCR检测Ⅱ型猪圆环病毒

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：许红喜符芳鲁晶红李曦黑龙江八一农垦大学大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

本试验建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测PCV-2.分析表明,10倍系列稀释的标准质粒9个点均在一条直线上,二者相关系数R2＞0.999,扩增效率达到97％.敏感性、特异性及重复性实验证明,批间、批内重复试验的变异系数均小于1.5％;... 详细信息

本试验建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测PCV-2.分析表明,10倍系列稀释的标准质粒9个点均在一条直线上,二者相关系数R2＞0.999,扩增效率达到97％.敏感性、特异性及重复性实验证明,批间、批内重复试验的变异系数均小于1.5％;可检测10-5.5TCID50.40份被检样品,SyReTi-PCR检测阳性率为87.5％,与普通PCR检测的符合率为94.6％,其敏感性是普通PCR 100倍.本研究建立的SyReTi-PCR检测PCV-2的方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性.

关键词： Ⅱ型猪圆环病毒 SyReTi-PCR检测标准曲线 PCV-2方法

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禽网状内皮组织增生病诊断与防制研究进展

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畜牧兽医科技信息 2011年第5期27卷 12-13页

作者：吴俊铭任晓峰邓小芸王笑梅东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江科技职业学院双城150111

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,鸡群中REV流行比较严重;REV与马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和J亚... 详细信息

禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,鸡群中REV流行比较严重;REV与马立克氏病病毒(Marek's disease virus,MDV)、鸡贫血病病毒(Chicken infectious anemia,CAV)和J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian Leukosis Virus,ALV-J)等几种免疫抑制性病毒的混合感染也比较普遍。鉴于REV正越来越受到重视。本文就RE的诊断和综合防制作一综述。

关键词：禽网状内皮组织增生病(RE) 诊断防制

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鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用的研究

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用的研究

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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛

作者：张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨 150030

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 c... 详细信息

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp，编码66个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基，分别在分子内形成Cys1-Cys5，Cys2-Cys4，Cys3-Cys6共3对二硫键，与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97％。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后，通过菌落计数法测定其体外抗菌活性，盐离子浓度对其抗菌活性的影响，以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 ku，具有良好的抗菌活性，对11种细菌均有不同程度的抑制作用，高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外，该重组蛋白对鸭血红细胞无明显溶血活性。

关键词：鸭β-防御素重组蛋白分离鉴定生物学作用

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鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用

鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用

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中国林牧渔业经济学会饲料经济专业委员会第八届学术交流大会

作者：张可心蔺丽娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201bp，编码66个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基，分别在分子内形成Cys1-Cys5，Cys2-Cys4，Cys3-Cys6共3对二硫键，与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97％。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后，通过菌落计数法测定其体外抗菌活性，盐离子浓度对其抗菌活性的影响，以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 ku，具有良好的抗菌活性，对11种细菌均有不同程度的抑制作用，高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外，该重组蛋白对红细胞溶血活性极低。

关键词：鸭β-防御素5基因生物学特性抗菌活性重组蛋白

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猪传染性胃肠炎病毒NSP5蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 220-224页

作者：董慧张鑫陈建飞时洪艳石达常铁城谷凤丽徐天王智琴冯力沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 首都医科大学基础医学院北京100069

为制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NSP5蛋白的单抗隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达并纯化的重组NSP5蛋白(r NSP5-GST)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛出一株稳定分泌抗TGEV NSP5蛋白... 详细信息

为制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NSP5蛋白的单抗隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达并纯化的重组NSP5蛋白(r NSP5-GST)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛出一株稳定分泌抗TGEV NSP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(5C3)。MAb亚类鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1/κ链。杂交瘤细胞培养上清液和腹水的效价分别为1∶6 400和1∶105。Western blot鉴定表明该MAb能够识别原核及真核表达的NSP5重组蛋白。利用肽扫描法鉴定显示,该MAb识别的抗原表位为286EFTPTEVIR QMYGVN300。本研究制备的MAb及其抗原表位的鉴定,为TGEV NSP5蛋白结构和功能的研究奠定了基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 nsp5基因单克隆抗体抗原表位

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禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

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第三届(2012)中国白羽肉鸡产业发展大会暨第二届全球肉鸡产业论坛

作者：贠炳岭 YUN Bing-ling LIU Wen 刘文 LI De-long 李德龙 QIN Li-ting 秦立廷 L1U Zai-si 刘在斯 WU Guan 吴关 QI Xiao-le 祁小乐 WANG Yong-qiang 王永强 GAO Hong-lei 高宏雷高玉龙 GAO Yu-long WANG Xiao-mei 王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 Division of Avian Infectious Diseases State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology Harbin Vete

本文为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法.该方法对p27的最小检出量... 详细信息

本文为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法.该方法对p27的最小检出量为1.25ng/ML,且与禽类常见的病毒(IBV,MDV,ILTV等)无交叉反应.动物感染实验结果表明该方法可在感染动物12天后有效检测泄殖腔分泌物中的ALV.利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法符合率分别为96.5％和93.8％.结果表明,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具.

关键词：禽白血病病毒早期诊断抗体检测双抗体夹心法

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共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白和猪瘟病毒E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白和猪瘟病毒E2蛋白的“自杀...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙建富赵和平李娜孙元夏照和周艳君王煜祁巧芬鲁承仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室延边大学农学院动物医学系

为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载... 详细信息

为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖;部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。这表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答。

关键词： "自杀性"DNA疫苗猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒泛DR表位 VP22转导蛋白共表达

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