检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 611-614页

作者：孙超杨德成高荣远周国辉王海伟于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为构建含有海肾萤光素酶(Rluc)报告基因的O型口蹄疫病毒(FMDV)亚基因组复制子,本研究在前期构建的O型FMDV cDNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法,以Rluc报告基因替换FMDV的前导蛋白Lb基因和结构蛋白P1基因,构建含有Rluc报告基因的F... 详细信息

为构建含有海肾萤光素酶(Rluc)报告基因的O型口蹄疫病毒(FMDV)亚基因组复制子,本研究在前期构建的O型FMDV cDNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法,以Rluc报告基因替换FMDV的前导蛋白Lb基因和结构蛋白P1基因,构建含有Rluc报告基因的FMDV亚基因组复制子FMDVRep。将该复制子质粒线性化后,经体外转录制备复制子全长RNA,转染BHK-21细胞,通过RT-PCR方法和间接免疫荧光试验分别检测该复制子RNA的自主复制能力以及FMDV非结构蛋白3B的表达情况。结果显示,复制子RNA在BHK-21细胞中能够进行自主复制并且能够表达病毒的非结构蛋白。Rluc活性检测结果表明,该复制子RNA在BHK-21细胞中可以高效表达Rluc,在转染后2 h^12 h Rluc活性呈线性递增,进一步反映该复制子具有良好的表达外源基因的能力。O型FMDV亚基因组复制子的构建,为深入研究FMDV的复制和翻译机制奠定了基础。

关键词： O型口蹄疫病毒海肾萤光素酶复制子

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雏鸡红细胞免疫相关基因差异表达的时序性研究

雏鸡红细胞免疫相关基因差异表达的时序性研究

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：贾悦李月健喻进张晨亮李娜娜卢晓晓张宁李欣张鼎郝卫芳马海利高文伟赵宇军高诗敏李建慧李桂兰闫芳韩凌霞宁官保田文霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 太原市动物疫病预防控制中心太原030024 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学创新团队中心/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

研究背景：红细胞不仅可以运输O2、CO2和调节pH,其自身还拥有一定的免疫功能。红细胞免疫功能方面的研究在哺乳动物及人的无核红细胞中起步较早,发展已比较完善,但在禽类等有核红细胞中起步较晚,发展比较滞后。

关键词：红细胞雏鸡红细胞免疫系统 RNA-Seq 差异表达基因信号通路

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马立克病毒对鸡红细胞中免疫相关基因的影响

马立克病毒对鸡红细胞中免疫相关基因的影响

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：李月健贾悦喻进张晨亮卢晓晓李娜娜李欣张宁张鼎郝卫芳马海利高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳韩凌霞宁官保田文霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 太原市动物疫病预防控制中心太原030024 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学创新团队中心/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

研究背景：马立克病(MD)足鸡的一种病毒性肿瘤疾病，多年来虽获得了一定的成效，但马立克病仍经常发生。自1981年提出红细胞免以来，人们发现红细胞除运输氧气，还参与免疫、代谢等生理过程，而对鸡的红细胞免疫研究不够深入。

关键词：红细胞马立克病转录组测序红细胞免疫

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牛细小病毒病毒样颗粒的组装及其免疫原性评价

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 930-934页

作者：张越常继涛于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为研究牛细小病毒(BPV)VP2衣壳蛋白自组装病毒样颗粒(VLPs)以及VLPs的免疫原性。本研究以BPV-1型C7-5中国分离株的基因组序列为模板扩增VP2蛋白的编码基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体p Shuttle-CMV中,利用*** BJ5183内同源重组将VP2基因... 详细信息

为研究牛细小病毒(BPV)VP2衣壳蛋白自组装病毒样颗粒(VLPs)以及VLPs的免疫原性。本研究以BPV-1型C7-5中国分离株的基因组序列为模板扩增VP2蛋白的编码基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体p Shuttle-CMV中,利用*** BJ5183内同源重组将VP2基因插入腺病毒骨架质粒p Ad Easy-1中,获得携带BPV VP2基因的重组腺病毒质粒(p Ad-BPV-VP2)。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染Ad293细胞,获得重组腺病毒r Ad-BPV-VP2,第8代时滴度为107.25TCID50/m L。间接免疫荧光、western blot以及电镜观察结果显示,BPV VP2蛋白可以在腺病毒系统中稳定表达,并有效组装VLPs。将r Ad-BPV-VP2肌肉注射免疫BALB/c小鼠,结果显示,针对BPV的血清Ig G和中和(VN)抗体分别于加强免疫后2周和8周达最高水平,高峰抗体可持续至15周,VN抗体的最高滴度可达1∶4 000。此外,与对照小鼠血清相比,免疫小鼠血清中的IL-2、IL-4及IFN-γ含量显著升高(p<0.05)。结果表明,r Ad-BPV-VP2免疫小鼠后可以诱导机体产生针对BPV的特异性体液和细胞免疫。本研究为BPV的免疫预防及载体的开发奠定了基础。

关键词：牛细小病毒病毒样颗粒免疫原性

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重组鸡β-防御素12蛋白的原核表达及其生物学特性分析

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东北农业大学学报 2014年第10期45卷 49-56页

作者：马得莹徐杨李妍妍徐倩倩张婷婷韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室哈尔滨150001

为探讨鸡β-防御素12(AvBD12)的生物学特性,试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因,其cDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上,进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳表明,重... 详细信息

为探讨鸡β-防御素12(AvBD12)的生物学特性,试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因,其cDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上,进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳表明,重组鸡AvBD12融合蛋白分子质量约为14 ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定,结果显示,纯化后的重组鸡AvBD12融合蛋白对金黄色葡萄球菌和兔波氏杆菌有较高抗菌活性,对猪霍乱沙门氏菌和乳酸菌的抗菌活性较弱。高盐浓度对其抗菌活性有显著影响。该重组蛋白对鸡红细胞无显著溶血活性。荧光定量PCR结果表明,AvBD12基因在所测定的15个鸡组织器官中均有表达。

关键词：鸡β-防御素12 重组蛋白抗菌活性组织分布

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H4N2亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的构建

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 90-93页

作者：王帅梁立滨邓国华施建忠姜永萍关云涛陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立H4N2亚型禽流感病毒(AIV)反向遗传操作系统,本研究构建了A/Duck/JiangXi/21046/2012(H4N2)(W-DKJX)的8个重组质粒,拯救出A/Duck/JiangXi/21046/2012(H4N2)(R-DKJX)。全基因组序列测序结果表明,拯救病毒R-DKJX与野生病毒W-DKJX的核苷酸序列完全相同。受体结合试验表明,野生病毒与拯救病毒均具有人型受体结合特性。以106EID50/50μL剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,病毒均仅在小鼠的呼吸道复制,对BALB/c小鼠呈低致病性,可以在感染早期引起小鼠体重轻微下降但并未引起发病或死亡。以上结果表明,两者保持了一致的生物学特性。H4N2亚型AIV反向遗传操作系统的构建为进一步研究H4亚型AIV的致病机理及其跨种传播分子机制等提供了技术平台。

关键词： H4N2 禽流感病毒反向遗传操作系统

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不同类型H5亚型禽流感疫苗的免疫保护效力比较研究

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中国农业科技导报 2014年第1期16卷 46-51页

作者：赵双成柳金雄陈普成曾显营葛金英乔传玲田国彬姜永萍陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部人兽共患病重点开放实验室哈尔滨150001

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/96]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及... 详细信息

为比较以我国首个H5亚型禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/96]为基础构建的新型重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)的免疫保护效力。分别将四种禽流感疫苗以2.8μg HA/0.3 mL(肌肉注射)、103PFU/100μL(刺种)、106EID50/100μL(滴鼻、点眼)、15μg/200μL(肌肉注射)等不同剂量和方式免疫3周龄SPF鸡,首次免疫3周后再加强免疫一次,加强免疫2周后用106EID50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)GS/GD/96鼻腔途径进行攻击,观察发病与死亡情况。分别于攻毒后第3 d、第5 d、第7 d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况,同时检测免疫及攻毒后血清HI抗体的动态变化。所有疫苗均可对免疫鸡形成100%完全保护(不发病、不致死、不排毒);在病毒攻击前,灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)、禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗(H5亚型)、禽流感、新城疫重组二联活疫苗(rLH5-1株)以及禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)所诱导的HI抗体平均水平分别为8.75log2、6.5log2、5.13log2和7.88log2。新型的基因工程疫苗具有良好的免疫保护性,已经或将在H5亚型HPAIV的防治实践中起到有益的补充作用。

关键词：禽流感 H5N1 疫苗保护效力

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鸡法氏囊B淋巴细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2014年第10期 15-17,21页

作者：陈玉明高玉龙张礼洲王念高立任宪刚姜莉莉高宏雷秦立廷王永强祁小乐王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001

为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)与宿主B淋巴细胞作用机制,构建鸡法氏囊B淋巴细胞酵母表达文库,试验从3周龄SPF鸡中摘取法氏囊,分离制备B淋巴细胞,从中提取细胞总RNA,使用SMART和LD-PCR技术合成双链cDNA,并进一步与线性化载体pGADT7-... 详细信息

为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)与宿主B淋巴细胞作用机制,构建鸡法氏囊B淋巴细胞酵母表达文库,试验从3周龄SPF鸡中摘取法氏囊,分离制备B淋巴细胞,从中提取细胞总RNA,使用SMART和LD-PCR技术合成双链cDNA,并进一步与线性化载体pGADT7-Rec共同转化Y187酵母感受态细胞,通过同源重组构建酵母表达文库。结果表明:所构建cDNA文库的效价为9.5×107cfu/mL,重组率为100%,可以用于酵母双杂交试验。

关键词：法氏囊 B淋巴细胞酵母双杂交 cDNA文库

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影响禽流感病毒致病性和传播的关键氨基酸位点的研究进展

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 165-168页

作者：徐晓龙包红梅陈化兰王秀荣中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

A型流感病毒根据其血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的不同分为不同亚型，目前已鉴定出有17种HA亚型和10种NA亚型。禽流感（AvianInfluenza，AI）是由A型流感病毒引起的急性或慢性呼吸道传染病，

关键词：禽流感病毒神经氨酸酶致病性慢性呼吸道传染病 A型流感病毒酸位传播亚型

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H7和N9亚型及A型流感病毒多重荧光定量RT-RCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 939-942页

作者：徐晓龙包红梅马勇施建忠曾显营李雁冰王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为同时检测H7亚型、N9亚型和A型流感病毒,本研究根据流感病毒H7 HA、N9 NA以及M基因序列分别合成3对引物和3种荧光素标记的探针,建立了多重Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,仅H7亚型和N9亚型病毒分别在FAM和JOE通道... 详细信息

为同时检测H7亚型、N9亚型和A型流感病毒,本研究根据流感病毒H7 HA、N9 NA以及M基因序列分别合成3对引物和3种荧光素标记的探针,建立了多重Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,仅H7亚型和N9亚型病毒分别在FAM和JOE通道监测到荧光信号,而所有A型参考流感病毒株均可获得Cy5荧光信号,此外其他相关的禽源病毒检测结果均为阴性。同时,以H7N9亚型病毒RNA为模板建立了标准曲线,检测H7 HA、N9 NA以及M基因的R2值均为0.999,最低检出量均为35.4 EID50/m L。批内和批间试验的变异系数均小于1.48%。利用该方法对1 072份临床样品(咽喉和泄殖腔拭子)检测,H7N9亚型和A型流感病毒分别检出7份和23份。该方法可以有助于H7N9亚型和A型流感病毒的快速检测及鉴定。

关键词： A型流感病毒 H7N9亚型流感病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR

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