检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 248-252页

作者：刘长明张超范危艳武谭斌陆月华谷守林中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,采用无污染的猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞培养,... 详细信息

从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,采用无污染的猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞培养,于第25代后毒价显著升高,于第35代毒价可达105.6TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明,分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质中;病毒感染的阳性细胞呈散在分布,阳性细胞数可达50%以上;免疫电镜观察到与PCV2特异抗体结合形成的病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团,病毒粒子直径约为17nm;病毒抗原基因组由1768个核苷酸组成,与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96.2%以上。用2mL的病毒细胞培养物(105.6TCID50/mL)接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头,可引起典型PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型病毒分离鉴定毒株培育细胞质

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猪瘟病毒E2基因和牛疱疹病毒Ⅰ型UL49基因的共表达

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中国兽医科学 2006年第10期36卷 777-781页

作者：刘燕田志军郑宝亮周伦江周艳君仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了探讨牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)UL49基因编码的膜蛋白VP22对猪瘟病毒E2基因表达水平的影响,构建了单独表达E2蛋白的pcDNA3.1-E2及融合表达E2-VP22的pcDNA3.1-E2-UL49。将pcDNA3.1-E2与pcDNA3.1-E2-UL49分别转染293 T细胞,间接免疫荧光试验结果显示,单独表达E2蛋白的细胞,其荧光主要固缩于核周,而融合表达E2-VP22蛋白的细胞在核周及细胞质内都有大量的荧光;Western-blot分析结果显示,VP22蛋白与E2蛋白都获得了表达,但融合了VP22蛋白的E2蛋白表达量要相对高一些(P<0.01),表明VP22蛋白可以促进E2蛋白的表达。

关键词：猪瘟病毒 E2基因 UL49基因体外表达

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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF2基因的表达及其单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 636-639,644页

作者：刘金霞周艳君安同庆仇华吉王云峰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株的GP2蛋白基因进行截短修饰后,克隆于pGEX6p-1载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。经SDS-PAGE分析发现,融合表达的蛋白rtGP2大小约40Ku,Western blot分析证实。表达的融合蛋白rtGP2能被PRRSV... 详细信息

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株的GP2蛋白基因进行截短修饰后,克隆于pGEX6p-1载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。经SDS-PAGE分析发现,融合表达的蛋白rtGP2大小约40Ku,Western blot分析证实。表达的融合蛋白rtGP2能被PRRSV阳性血清所特异性识别。收获融合表达的rtGP2,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以表达的融合蛋白rtGP2和GST蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA方法对融合细胞的上清液进行检测,结果获得了1株能稳定分泌抗rtGP2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,将其命名为26D8,利用PRRSV感染的Marc-145细胞进行间接免疫荧光检测结果发现,所获得的单克隆抗体能与PRRSV感染细胞产生特异性免疫荧光。亚型鉴定结果显示,该单克隆抗体为IgG1型,其轻链均为K链。本研究中融合表达的rtGP2蛋白及其单克隆抗体的获得,将为今后深入研究PRRSV GP2蛋白的功能与特性提供有益帮助。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 rtGP2 单克隆抗体

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猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染研究进展

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 720-724页

作者：温永俊蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

1病原简介猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的，以母猪的繁殖障碍、哺乳仔猪的高死亡率及呼吸症状为特征的一种传染病。PRRSV是有囊膜的单股正链RN... 详细信息

1病原简介猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的，以母猪的繁殖障碍、哺乳仔猪的高死亡率及呼吸症状为特征的一种传染病。PRRSV是有囊膜的单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属。该病1987年在美国首先发生，随后在世界各主要养猪国家流行。按其遗传差异和抗原性差异，可分为欧洲型（A群）与美洲型（B群）。该病毒的基因组全长约为15kb，含有8个开放阅读框架（ORFs），其中ORF1a和ORF1b编码病毒非结构蛋白，ORF2-ORF7编码病毒的结构蛋白。我国1996年由郭宝清等首次报道该病，研究证明其为美洲型。PRRS在我国大部分地区均有流行，造成巨大的经济损失。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2 混合感染

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传染性喉气管炎病毒gB基因的主要免疫原片段在大肠杆菌中的表达

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中国预防兽医学报 2006年第2期28卷 156-159页

作者：张晶王云峰智海东王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

利用DNASIS等软件分析传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株的gB蛋白抗原性,筛选出一段抗原性较强的片段,该片段位于gB蛋白的403位至686位氨基酸残基之间。设计引物,引入双酶切位点EcoRⅠ,SalⅠ,将目的片段t-gB插入原核表达载体pET30a(+),得到... 详细信息

利用DNASIS等软件分析传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株的gB蛋白抗原性,筛选出一段抗原性较强的片段,该片段位于gB蛋白的403位至686位氨基酸残基之间。设计引物,引入双酶切位点EcoRⅠ,SalⅠ,将目的片段t-gB插入原核表达载体pET30a(+),得到重组表达质粒pET-tgB并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导后,表达分子量为37Ku的融合蛋白His-tgB,表达量占菌体蛋白的40.6%。Westernblot分析表明,His-tgB具有免疫反应性。重组蛋白免疫兔之后可以产生针对ILTVgB的特异性抗体。

关键词：传染性喉气管炎病毒糖蛋白B(gB) 表达

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胸膜肺炎放线杆菌Apxll毒素的基因序列特征

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 653-657页

作者：王春来刘思国邵美丽宫强郭设平王勇中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了深入地了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)分泌的ApxⅡ毒素的分子结构及序列特征,本实验以一株APP 7型现地分离株L25-4株为实验材料,对其分泌的ApXⅡ毒素的结构基因apxⅡA及其上游启动子区进行了PCR扩增和测序。结果表明APP7型L25-4株apxⅡ... 详细信息

为了深入地了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)分泌的ApxⅡ毒素的分子结构及序列特征,本实验以一株APP 7型现地分离株L25-4株为实验材料,对其分泌的ApXⅡ毒素的结构基因apxⅡA及其上游启动子区进行了PCR扩增和测序。结果表明APP7型L25-4株apxⅡA基因与其它血清型apxⅡA基因核苷酸序列同源性达99．5%以上,氨基酸序列同源性达98．5%以上。在ApxⅡA蛋白的N末端有3个大的疏水结构域,分布在240～422位氨基酸之间。在ApxⅡA蛋白的C末端有富含甘氨酸(Gly)和天门冬氨酸(Asp)的九肽(nonapeptides)重复序列Leu/Ile/Phe-Xaa-Gly-Gly-Xaa-Gly-Asm/Ssp-Asp-Xaa,串连重复9次。这些结构域的起始氨基酸的位置分别为374、503、630、735、753、762、771、780和802。推定的赖氨酸酰基化作用位点为557位氨基酸,与***的HlyA相比,在688位氨基酸处少了一个赖氨酸酰基化作用位点。apxⅡA基因启动子-10区序列为AATAAT,-35区序列为TTAAT,-10区与-35区间隔序列为11个碱基。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡ毒素序列特征

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中国1995～1999年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析

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病毒学报 2006年第3期22卷 225-229页

作者：张庆霞陈建飞韩宗玺周玉长邵昱昊荣骏弓刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

应用RT-PCR方法扩增到了我国1995～1999年10株IBV现地分离株的核蛋白基因片段，并将其进行了克隆、序列测定及分析。结果发现，10株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF，编码由409个氨基酸残基组成的多肽，末发现碱基的插入和... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增到了我国1995～1999年10株IBV现地分离株的核蛋白基因片段，并将其进行了克隆、序列测定及分析。结果发现，10株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF，编码由409个氨基酸残基组成的多肽，末发现碱基的插入和缺失。与GenBank中的20个IBV参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析，发现本研究分离的毒株主要分布于3个群中，该3群病毒主要包括我国IBV现地分离株。对n基因及其局部功能区序列比较发现，我国分离株与H120疫曲株N蛋白存在广泛的氨基酸变异。通过与s1基因系统发育进化树比较发现，我国IBV分离株存在基因重组现象。以上结果表明我国1995～1999年IBV毒株存在基因突，变和基因重组现象。

关键词：传染性支气管炎病毒核蛋白基因基因突变基因重组

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猪传染性胃肠炎病毒n基因的原核表达及重组蛋白的免疫活性分析

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病毒学报 2006年第2期22卷 147-149页

作者：孙东波冯力刘杰时洪艳佟有恩刘胜旺童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

A pair of primers containing BamHI and XhoI sites was designed to amplify n gene of 1149bp from the positive pMD18-TN plasmid of transmissible gastroenteritis virus n gene by *** product was subcloned into multiple cloning sites of pET-30a containing 6 His·*** plasmid pET-30a of n gene named pET30a-N was transfected into *** BL21 and the bacteria was induced with IPTG at 37℃.It was demonstrated by SDS-PAGE that recombinant N protein expressed in *** BL21 was soluble protein and its molecular weight was about *** result of Western blot test showed that immunoactivity of the recombinant N protein was the same to that of the natural N protein.

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 n基因原核表达免疫活性分析

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表达尼帕病毒G囊膜糖蛋白重组牛痘病毒的研究

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微生物学报 2006年第4期46卷 644-648,I0005页

作者：王喜军王清华葛金英胡森步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 农业部青岛动物检疫所国家外来病诊断中心青岛266032

采用牛痘病毒WR株,构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV G蛋白基因的重组病毒rWR-NiV-G。Westernblot证实大小为66kDa的重组G蛋白在rWR-NiV-G感染的Hela细胞中获得表达;采用兔抗NiV高免血清间接免疫荧光检测重组痘病毒表达G蛋白显示出良... 详细信息

采用牛痘病毒WR株,构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV G蛋白基因的重组病毒rWR-NiV-G。Westernblot证实大小为66kDa的重组G蛋白在rWR-NiV-G感染的Hela细胞中获得表达;采用兔抗NiV高免血清间接免疫荧光检测重组痘病毒表达G蛋白显示出良好的特异免疫反应原性。rWR-NiV-G感染NiV敏感的BHK细胞系,并与NiV融合蛋白F共同表达,可形成强烈细胞融合现象。rWR-NiV-G感染免疫BALB/c小鼠,可诱导显著的NiV G蛋白特异体液免疫反应。以原核表达NiV G蛋白片段为包被抗原,间接ELISA检测rWR-NiV-G感染免疫小鼠血清中的G蛋白特异抗体,具有良好的敏感性和特异性。同时,rWR-NiV-G感染免疫小鼠血清中的G蛋白特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性。结果表明,重组牛痘病毒表达的NiV G蛋白有良好的免疫原性和生物学活性功能,为进一步深入研究NiV G蛋白生物学功能、免疫原性及重组活载体疫苗研究奠定了重要基础。

关键词：尼帕病毒 G蛋白重组牛痘病毒

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重组杆状病毒表达尼帕病毒融合蛋白和受体结合蛋白的研究

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生物工程学报 2006年第3期22卷 418-424页

作者：王喜军胡森葛金英王清华秦立廷步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 农业部青岛动物检疫所国家外来病诊断中心青岛266032

构建了表达尼帕病毒（Nipahvirus，NiV）囊膜功能糖蛋白F和G的重组杆状病毒rBac—NF、rBac-NG。Westem-blot证实大小分别为61kD和66kD的重组融合蛋白（rNF）和受体结合蛋白（rNG）分别在rBac—NF、rBac-NG感染的昆虫细胞中获得表达，并... 详细信息

构建了表达尼帕病毒（Nipahvirus，NiV）囊膜功能糖蛋白F和G的重组杆状病毒rBac—NF、rBac-NG。Westem-blot证实大小分别为61kD和66kD的重组融合蛋白（rNF）和受体结合蛋白（rNG）分别在rBac—NF、rBac-NG感染的昆虫细胞中获得表达，并且rNF前体F0可在昆虫细胞内进一步有效裂解为F1（～49kD）和F2；采用兔抗NiV病毒高免血清间接免疫荧光检测重组杆状病毒表达F和G蛋白显示出良好的特异免疫反应原性。以rBac。NF、rBac—NG感染的昆虫细胞裂解液稀释后直接包被ELISA板，间接ELISA检测兔抗灭活NiV全病毒高免血清中的F和G蛋白特异性抗体，同样具有良好的敏感性和特异性；以rBac—NF和rBac—NG感染昆虫细胞培养物直接免疫BALB／c小鼠，可诱导显著的NiVF和G蛋白特异体液免疫反应，产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性。结果表明，杆状病毒表达重组F和G蛋白抗原具有替代NiV全病毒，作为安全、经济、敏感和特异的诊断抗原的潜力，并为重组病毒亚单位疫苗防制尼帕病毒性脑炎的探索研究奠定了基础。

关键词：尼帕病毒,融合蛋白,受体结合蛋白,重组杆状病毒

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