检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2006年第10期36卷 791-794页

作者：邓小芸高玉龙高宏雷祁小乐程宇王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩... 详细信息

为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩增淘洗,从每株单克隆抗体筛选到的噬菌斑中随机挑取20个单克隆噬菌斑,通过间接ELISA和竞争抑制ELISA检测,共选出13个单克隆噬菌斑,经噬菌体gⅢ部分基因的核苷酸序列测定,确定了8个15肽为IBDV抗原表位。这8个15肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与IBDV Gx(Gen-Bank登录号:AY444873)VP3的氨基酸序列相同,但二级结构上均以β折叠为主,并且与单抗的结合可被VP3蛋白有效地抑制。证实,筛选的是IBDV VP3的模拟表位。

关键词：传染性腔上囊病病毒 VP3蛋白抗原表位噬菌体随机15肽库筛选

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猪传染性胃肠炎病毒重组N蛋白抗原间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 572-576,580页

作者：孙东波冯力时洪艳刘胜旺陈洪岩佟有恩李伟杰王明马思奇陈建飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150001

本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原,建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rnTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于1... 详细信息

本研究以纯化的原核表达猪传染性胃肠炎病毒N蛋白为诊断抗原,建立了猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rnTGE-ELISA。该抗原不与其他常见10种猪病的阳性血清发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于15%;对仔猪免疫后不同时间的血清检测结果表明rnTGE-ELISA与纯化病毒ELISA符合率达95.0%;rnTGE-ELISA相对于VN试验的敏感性为96.3%、特异性为92.2%;现地试验中,rnTGE-ELISA与SvanovaTGEV/PRCVantibodydiagnosisKit的符合率达87.0%,通过中和试验复核结果表明,rnTGE-ELISA的假阳性低于SvanovaTGEV/PRCVantibodydiagnosisKit。本试验建立的rnTGE-ELISA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为免疫猪群抗体监测和TGE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。

关键词： TGEV 重组N蛋白间接ELISA 诊断

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传染性法氏囊病病毒非结构蛋白VP5的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国生物工程杂志 2006年第10期26卷 30-35页

作者：张宁高宏雷高玉龙李俊山冉多良王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 新疆农业大学乌鲁木齐830052

利用PCR技术,从传染性法氏囊病病毒(IBDV)Gx、Gt毒株中分别扩增出VP5基因,将其克隆到表达载体pET30a、pET28a中。经PCR、酶切和序列分析鉴定获得重组质粒命名为pET28a-GtVP5、pET30a-GxVP5。将pET30a-GxVP5、pET28a-GtVP5分别转化宿主菌... 详细信息

利用PCR技术,从传染性法氏囊病病毒(IBDV)Gx、Gt毒株中分别扩增出VP5基因,将其克隆到表达载体pET30a、pET28a中。经PCR、酶切和序列分析鉴定获得重组质粒命名为pET28a-GtVP5、pET30a-GxVP5。将pET30a-GxVP5、pET28a-GtVP5分别转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功表达了约24kDa的Gx-VP5及23kDa的Gt-VP5融合蛋白,它们都以包涵体形式存在。将Gx-VP5纯化后的蛋白免疫8周龄BALB/c雌鼠,ELISA分析表明制备的抗血清效价在1∶25600以上,Westernblot分析VP5表达产物能与抗6×HismAb及抗IBDV多克隆抗血清发生反应,具有良好的免疫反应特异性。

关键词：传染性法氏囊病病毒非结构蛋白 VP5 克隆表达多克隆抗体

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NDV F_(48) E_9和La Sota毒株F蛋白B细胞抗原优势表位区段的鉴定和免疫原性比较

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中国生物工程杂志 2006年第9期26卷 24-31页

作者：张海玲刘培欣曹殿军闫丽辉孙建宏冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 新疆农业大学乌鲁木齐830052

对预测的NDVF48E9强毒株和LaSota疫苗株F蛋白优势表位进行比较分析。根据预测结果设计克隆了两个毒株F蛋白各4段表位区,分别将每个毒株的4段表位区连接到原核表达载体上进行了体外表达,鉴定得到4段多肽的大小分别是P1∶8.0kDa、P2∶10.8... 详细信息

对预测的NDVF48E9强毒株和LaSota疫苗株F蛋白优势表位进行比较分析。根据预测结果设计克隆了两个毒株F蛋白各4段表位区,分别将每个毒株的4段表位区连接到原核表达载体上进行了体外表达,鉴定得到4段多肽的大小分别是P1∶8.0kDa、P2∶10.8kDa、P5∶13.5kDa、P6∶10.5kDa。应用F48E9和LaSota特异性抗血清对表达各肽段进行了抗原性鉴定,P1、P2、P5、P6段均呈阳性反应,表明其中含有线性B细胞表位。其中F48E9P5(FP5)和LaSotaP5(LP5)与血清反应时有明显差异。FP5和LP5与鸡IL-18成熟肽(mChIL-18)蛋白以不同组合免疫SPF鸡,ELISA检测各组的免疫活性,结果发现FP5与mChIL-18蛋白联合免疫组的抗体水平高于LP5与mChIL-18蛋白联合免疫组、FP5、LP5单独免疫组;用NDVF48E9株攻毒结果显示FP5具有20%的保护率,说明P5段与F蛋白免疫原性相关,而LaSotaP5不能抵抗强毒的攻击,证明该表位区域在两个毒株之间存在着免疫原性差异。

关键词：新城疫病毒融合蛋白抗原表位肽段

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猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

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北京林业大学学报 2006年第S2期28卷 101-104页

作者：张立娜刘培欣曹殿军闫丽辉贾竞波危艳武东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN... 详细信息

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性.试验结果表明,转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异,说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用.

关键词：猪γ干扰素真核表达活性测定

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猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护效果的评价及其免疫机制的研究

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中国兽医科学 2006年第12期36卷 955-960页

作者：王勇刘思国王春来邵美丽宫强刘建东迟磊赵昆郭设平李广兴中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

分别表达了rApxⅠr、ApxⅡr、ApxⅢ、rApxⅣr、Apfa和rOMP 6种重组蛋白,以不同组合分组免疫小鼠,分别以APP1型菌(5×109CFU)和APP7型菌(1×1011CFU)进行攻毒。结果显示,试验Ⅱ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP)的APXⅠ抗体水平、... 详细信息

分别表达了rApxⅠr、ApxⅡr、ApxⅢ、rApxⅣr、Apfa和rOMP 6种重组蛋白,以不同组合分组免疫小鼠,分别以APP1型菌(5×109CFU)和APP7型菌(1×1011CFU)进行攻毒。结果显示,试验Ⅱ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP)的APXⅠ抗体水平、细胞免疫水平及对APP1和APP7型菌的保护效果均显著高于其他各试验组及对照组;试验Ⅰ组(灭活疫苗)、Ⅲ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApxⅣ)、Ⅳ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApfa)与对照组差异显著,但均显著低于试验Ⅱ组;APXⅠ抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率呈正相关。证实rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP组免疫效果最好,可对2个血清型APP的攻击提供有效保护。

关键词：猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护效果免疫机制

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鸡传染性支气管炎病毒鸡胚传代毒对SPF雏鸡的致病力的变化

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农业生物技术学报 2006年第6期14卷 836-839页

作者：韩宗玺刘昕张庆霞邵昱昊刘胜旺孔宪刚荣骏弓乌鲁木齐830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

应用鸡胚连续传代的第5(P5)和115代(P115)鸡传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvirus,IBV)中国分离株CK/CH/LDL/97Ⅰ进行动物实验,评价两个不同代次毒对SPF雏鸡的致病性、病毒在机体内复制动态以及病毒刺激机体产生抗体的变化。... 详细信息

应用鸡胚连续传代的第5(P5)和115代(P115)鸡传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvirus,IBV)中国分离株CK/CH/LDL/97Ⅰ进行动物实验,评价两个不同代次毒对SPF雏鸡的致病性、病毒在机体内复制动态以及病毒刺激机体产生抗体的变化。结果显示,P5接种的鸡群发病率为100%,死亡率为10%;P115接种的鸡群发病率和死亡率均为0%。表明,P115较P5毒力明显减弱。病毒复制动态检测结果显示,P5和P115均能在鸡的上呼吸道中复制,但P5接种的鸡群上呼吸道带毒时间为15d左右;P115接种的鸡群上呼吸道带毒时间为9d左右。抗体检测发现,P5与P115均能刺激机体产生血清抗体,SPF鸡对P5与P115感染均能产生良好的体液免疫应答,说明致弱毒P115仍然保持良好的免疫原性。P115代病毒可作为IBV疫苗研制的候选毒株。

关键词：传染性支气管炎病毒鸡胚传代致病力

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新城疫病毒F48E9株V基因的表达及其抗血清的制备

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中国兽医科学 2006年第5期36卷 357-361页

作者：韩放闫丽辉曹殿军刘培欣李景鹏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

采用PCR方法从鸡源新城疫病毒(NDV)强毒F48E9株P基因重组质粒中扩增出了V 基因全长cDNA,并引进相应的突变位点,将其克隆到pMD18-T载体,然后亚克隆到原核表达载体 pET-30c上,重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为p... 详细信息

采用PCR方法从鸡源新城疫病毒(NDV)强毒F48E9株P基因重组质粒中扩增出了V 基因全长cDNA,并引进相应的突变位点,将其克隆到pMD18-T载体,然后亚克隆到原核表达载体 pET-30c上,重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为pET-30c-V。将 pET-30c-V转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol／L IPTG 37℃过夜诱导表达,SDS-PAGE 及Western-blotting分析结果表明,所表达的NDV V重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子质量约28 ku,与理论值大小相符。将包涵体用8 mol／L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到纯化的V蛋白。用复性后的V蛋白免疫21日龄SPF鸡(300 μg／只),成功制备了抗鸡NDV V蛋白的抗血清。

关键词：新城疫病毒 V基因原核表达

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山羊关节炎-脑炎病毒甘肃株env基因的克隆和序列分析

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中国预防兽医学报 2006年第4期28卷 478-481页

作者：曲娟娟赵立平沈荣显相文华东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,... 详细信息

本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,结果表明所扩增2893个核苷酸片段含有CAEV囊膜基因的全序列,编码964个氨基酸。核苷酸和氨基酸序列分析显示,CAEV甘肃株env基因与CAEV-63美国株的env基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.1%。

关键词：山羊关节炎-脑炎病毒 env基因克隆序列分析

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牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的截短克隆与表达

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中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 289-293页

作者：王海燕朱远茂薛飞童光志赵立平相文华韩文瑜中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 吉林大学农学部吉林长春130062

以牛传染性鼻气管炎病毒BarthaNu/67株的DNA作为模板,用PCR扩增gE基因并克隆至pGEM-TEasy载体,再以此质粒作为模板将gE基因分成6个片段,分别插入原核表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行了表达。蛋白电泳结果表明6个片段中有2个片段以可... 详细信息

以牛传染性鼻气管炎病毒BarthaNu/67株的DNA作为模板,用PCR扩增gE基因并克隆至pGEM-TEasy载体,再以此质粒作为模板将gE基因分成6个片段,分别插入原核表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行了表达。蛋白电泳结果表明6个片段中有2个片段以可溶形式表达,1个片段以包涵体形式表达,另外3个片段没有表达。采用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下对两个可溶性片段进行了纯化。经免疫印迹试验,间接ELISA和交叉试验证明,两个纯化的重组蛋白均与牛传染性鼻气管炎阳性血清样品发生反应,而与牛传染性鼻气管炎阴性血清无任何反应,显示其具有良好的抗原性和特异性,可用于牛传染性鼻气管炎gE-ELISA诊断方法的建立。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gE基因克隆表达

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