检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 271-274页

作者：张莉秦泽荣崔尚金何召庆刘尚高北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100089 中国农业大学动物医学院北京100094 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

用PCR技术特异扩增了柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA序列,克隆至质粒pMD18-T中,获得重组质粒pMD18-T-TA4,采用KpnⅠ/SacⅠ双酶切法及PCR确认正确后,将TA4基因cDNA目的片段亚克隆到乳酸乳球菌表达载体pMG36n中,电穿孔法转化乳酸乳球菌LM0... 详细信息

用PCR技术特异扩增了柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA序列,克隆至质粒pMD18-T中,获得重组质粒pMD18-T-TA4,采用KpnⅠ/SacⅠ双酶切法及PCR确认正确后,将TA4基因cDNA目的片段亚克隆到乳酸乳球菌表达载体pMG36n中,电穿孔法转化乳酸乳球菌LM0230,获得重组质粒pMG36n-TA4,采用KpnⅠ/SacⅠ双酶切法及DNA测序证明cDNA序列完全正确。获得TA4乳酸乳球菌表达株,经SDS-PAGE电泳分析,结果表明表达产物与预期大小的TA4蛋白分子量一致。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 TA4抗原基因cDNA 乳酸乳球菌克隆与表达

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猪圆环病毒多重PCR诊断方法的建立

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 581-584页

作者：崔尚金全滟平李曦符芳姜艳玲张莉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学中心/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京100097

根据GenBank中20株猪圆环病毒(PCV2)核苷酸序列设计两对引物,建立的检测猪圆环病毒的多重PCR方法,其中引物P1、P2为PCV特异性,扩增938bp片段。P3、P4为PCV2特异性扩增490bp,因此本方法不仅可以扩增PCV片段,还可以同时区分PCV1和PCV2。... 详细信息

根据GenBank中20株猪圆环病毒(PCV2)核苷酸序列设计两对引物,建立的检测猪圆环病毒的多重PCR方法,其中引物P1、P2为PCV特异性,扩增938bp片段。P3、P4为PCV2特异性扩增490bp,因此本方法不仅可以扩增PCV片段,还可以同时区分PCV1和PCV2。该方法具有良好的特异性和敏感性,为猪圆环病毒的临床诊断与流行病学调查等研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒多重PCR

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禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2006年第9期36卷 701-706页

作者：包红梅王秀荣刘丽玲王昱李一经陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进... 详细信息

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行检测，结果显示，病毒尿囊液的最低检出稀释度为1：10^4；阳性棉拭子的最低检出稀释度为1：2^3。用病毒分离法和一步法RT—PCR同时检测人工感染鸡不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品，二者符合率为100％，但前者的检测灵敏度比后者高10～100倍。用该方法检测H1～H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原，所有禽流感病毒均有229bp的目的条带出现，而其他14种禽病病原均无目的条带出现，表明该方法的特异性好。

关键词：禽流感病毒一步法RT—PCR 快速诊断

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转基因苜蓿可饲(食)疫苗研究现状及应用前景

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 603-605页

作者：卢宝伟仇华吉胡宝忠中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

紫花苜蓿(Medicago satiua)简称苜蓿,是世界上栽培最早及利用最广泛的豆科牧草,具有一年种植多年收割的特点,全球种植面积3500万hm^2以上。我国栽培苜蓿已有2000年的历史,现种植面积达140万hm^2。苜蓿具备营养丰富、优质高产、长期种植... 详细信息

紫花苜蓿(Medicago satiua)简称苜蓿,是世界上栽培最早及利用最广泛的豆科牧草,具有一年种植多年收割的特点,全球种植面积3500万hm^2以上。我国栽培苜蓿已有2000年的历史,现种植面积达140万hm^2。苜蓿具备营养丰富、优质高产、长期种植可以改善土壤的理化性质等特点,在畜牧业生产中占有重要的地位,而被冠以“牧草之王”的美誉。在其丰富的营养物质中,蛋白质含量占其干重的20%左右,是多种禽畜喜食的优质蛋白牧草;干物质平均含有0.7个饲料单位引;赖氨酸含量达1.06%－1.38%,粗纤维高达35.70%。正如Henry(1898)所指出的那样:“对于家畜来说,没有任何一种粗饲料能比得上优质的苜蓿干草更适合它们的口味。”[第一段]

关键词：转基因苜蓿种植面积应用现状疫苗豆科牧草营养丰富优质高产畜牧业生产蛋白质含量

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IS711和omp2作为布氏杆菌种属及种株间分子鉴别诊断标记的研究

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中国预防兽医学报 2006年第6期28卷 676-680页

作者：陈伟业胡森黄克和步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

布氏杆菌为世界性具重要公共卫生意义的人兽共患疫病原,分6个种。建立种间及种株间安全敏感、经济有效的快速鉴别诊断方法对布病防制及分子流行病学研究具有重要意义。布氏杆菌IS711和omp2基因具有种属特异性,可用于布氏杆菌的PCR分子... 详细信息

布氏杆菌为世界性具重要公共卫生意义的人兽共患疫病原,分6个种。建立种间及种株间安全敏感、经济有效的快速鉴别诊断方法对布病防制及分子流行病学研究具有重要意义。布氏杆菌IS711和omp2基因具有种属特异性,可用于布氏杆菌的PCR分子诊断。其中IS711为转座因子,在不同种布菌种存在插入位置的多态性,外膜蛋白OMP2编码基因则存在反向重复序列及种株间的多态性。为此,分别采用复式—PCR、PCR和限制性酶切片段长多态性(RFLP)分析,对分属于***、***和***的不同种布氏杆菌的不同种株,M5、M16、S2、S6和S19进行分子鉴别诊断。结果显示,根据IS711基因特定PCR扩增片段长多态性,可进行布氏杆菌种间的快速鉴别；而omp2编码基因PCR扩增片段PstⅠ、KpnⅠ、NcoⅠ和Eco47Ⅲ等4种限制酶片段长多态性,则可成为布氏杆菌菌株间特异的分子鉴别诊断标记,甚至疫苗株M5和野毒株M16之间的分子诊断标记。

关键词：布氏杆菌分子标记,IS711 omp2 限制性酶切片段长多态性(RFLP)

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 13-15页

作者：智海东王云峰孙永科杨玉艾王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学系陕西杨凌712100

用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180 d分别采血,分离血清,检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14 d,免疫鸡... 详细信息

用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180 d分别采血,分离血清,检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14 d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21 d血清抗FPV的抗体出现峰值;此后便开始回落,到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。抗gB的抗体在免疫后的第二周达到阳性,之后的六个月都为阳性。在免疫后的每个月将免疫鸡取20只再分成两组,分别用新城疫强毒与传染性喉气管炎强毒的攻击。在免疫后的第一个月对新城疫的保护率为8/10,第2个月对新城疫的保护为7/10,第3个月为2/10,因此对新城疫的免疫保护期为2个月。在免疫后的5个月内可以使免疫鸡对传染性喉气管炎强毒攻击的保护率达到8/10以上,免疫后的6个月对ILT为8/13,因此rF-PV-gB-F对传染性喉气管炎的免疫保护期为5个月。

关键词：新城疫传染性喉气管炎重组鸡痘病毒免疫持续期

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组病毒免疫及强毒攻击后外周血T淋巴细胞亚群的动态

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 535-538页

作者：智海东王云峰孙永科张晶王玫彭金美刘永刚童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学系陕西杨凌712100

采用流式细胞检测技术对表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)、新城疫弱毒疫苗以及传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫和传染性喉气管炎以及新城疫强毒攻击后外周血T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCRγδ+)的... 详细信息

采用流式细胞检测技术对表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)、新城疫弱毒疫苗以及传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫和传染性喉气管炎以及新城疫强毒攻击后外周血T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCRγδ+)的变化动态进行监测。重组疫苗和禽痘疫苗免疫之后,CD8+和TCRγδ+的细胞数先升高后回落;在NDV强毒攻击之后,ND疫苗免疫组的TCRγδ+数量升高,rFPV-gB-F免疫组的三种细胞数量在第1周都下降,随后升高;ILT疫苗在免疫后的第1周,CD4+细胞数量下降。结果提示rFPV-gB-F可以诱发相应的细胞免疫应答,但是有关传染性喉气管炎病毒导致的细胞免疫需要进一步的研究。

关键词：传染性喉气管炎新城疫重组禽痘病毒外周血T淋巴细胞

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表达禽流感病毒H5HA、H7HA基因DNA疫苗的免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 1-5页

作者：张芳芳姜永萍刘光亮陈怀涛乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学甘肃兰州730070

为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达载体上,构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI-H5HA-H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡,首次免疫后3周加强免疫,同时设pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免... 详细信息

为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达载体上,构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI-H5HA-H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡,首次免疫后3周加强免疫,同时设pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免疫组及空白对照组,每周采血用微量血凝抑制法检测HI抗体。加强免疫后3周分别以100LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)进行致死性攻击。结果显示各免疫组均可刺激鸡体产生H5、H7特异性抗体,pCI-H5HA-H7HA诱导产生的抗体对H5N1和H7N1的攻毒保护分别为50%和10%,而pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免疫的攻毒保护均为70%。表明双顺反子质粒可诱导鸡产生较好或一定的保护,但免疫效果不够理想,推测与DNA的摄取及其体内表达有关,可望通过调整DNA疫苗的多种因素提高免疫效果。

关键词：禽流感 H5亚型 H7亚型 HA基因 DNA疫苗

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尼帕病毒F糖蛋白在重组牛痘病毒中的表达及鉴定

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病毒学报 2006年第3期22卷 220-224页

作者：胡森王清华王喜军程小文步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 农业部检疫所国家外来动物疫病诊断中心青岛266032 南京农业大学南京210095

尼帕病毒(NiV)F蛋白在病毒侵入细胞和诱导中和抗体等方面具有重要作用。通过over-lapping PCR合成密码子优化的F蛋白基因构建了表达NiV F蛋白的重组牛痘病毒(WR株)rWR-NiV-F。利用兔抗NiV血清为检测抗体,通过间接免疫荧光(IFA)检测到了... 详细信息

尼帕病毒(NiV)F蛋白在病毒侵入细胞和诱导中和抗体等方面具有重要作用。通过over-lapping PCR合成密码子优化的F蛋白基因构建了表达NiV F蛋白的重组牛痘病毒(WR株)rWR-NiV-F。利用兔抗NiV血清为检测抗体,通过间接免疫荧光(IFA)检测到了F蛋白在重组病毒感染细胞中的表达。SDS-PAGE和Western blot检测证明重组蛋白F0被裂解为F1和F2。以rWR-NiV-F感染瞬时转染共表达NiV受体结合囊膜糖蛋白G的BHK细胞,可诱导细胞膜融合及合包体形成,证明该重组病毒表达F蛋白保持良好的抗原性及生物学活性,为NiV诊断及重组活载体疫苗研究奠定了重要基础。

关键词：副粘病毒科尼帕病毒 F蛋白重组牛痘病毒细胞融合

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黑龙江省部分地区散养畜禽流感病毒感染的血清学调查与分析

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 589-591,598页

作者：李曦符芳李洪彬王靖飞王君伟崔尚金童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省兽医科学研究所黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150001

本研究应用血凝抑制试验(HI),在2005年初,于黑龙江省绥化、海林两地区散养的临床健康的猪、家禽中采集血清样品178份,对其进行了血清学检测,并将获得的血清学检测数据进行了统计学分析。分析结果显示,绥化地区采集的血清样品共计60份,... 详细信息

本研究应用血凝抑制试验(HI),在2005年初,于黑龙江省绥化、海林两地区散养的临床健康的猪、家禽中采集血清样品178份,对其进行了血清学检测,并将获得的血清学检测数据进行了统计学分析。分析结果显示,绥化地区采集的血清样品共计60份,其中家禽中抗H9亚型流感病毒抗体阳性样品24份,占家禽检测总样品数(45份)的53.3%;在海林市地区采集的血清样品共计118份,其中家禽中抗H9亚型流感病毒抗体阳性样品29份,占家禽被检测总样品数(88份)的32.9%。在两地猪群中的血清学检测结果发现,抗H9亚型流感病毒抗体阳性率较高,分别占猪血清检测样品(14/15,19/30)的93.3%和63.3%,两地的畜禽检测中均未检测到H5、H7亚型抗流感抗体。本次试验检测结果表明,在黑龙江省的畜禽养殖中,尤其是猪与家禽当中,存在抗H9亚型流感病毒的抗体,推断可能有该亚型流感病毒的传播;未检到H5、H7亚型流感病毒抗体,在本次检测中可以初步判定在被检测的畜禽当中不存在高致病性禽流感病毒感染与流行。

关键词：血凝抑制试验流感病毒抗体统计学分析

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